细粒棘球蚴95(Eg95)抗原基因的克隆及真核表达质粒的构建
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新疆医科大学免疫学教研室；汕头大学医学院病原生物学教研室 乌鲁木齐830054 丁剑冰；林仁勇；温浩；王国荃
细粒棘球蚴|Eg95抗原基因|真核表达质粒
参见附件(48kb)。
新疆医科大学免疫学教研室；汕头大学医学院病原生物学教研室 乌鲁木齐830054 丁剑冰；林仁勇；温浩；王国荃；王笑峰；魏晓丽；傅玉才
关键词：细粒棘球蚴；Eg95抗原基因；真核表达质粒
摘要：目的 克隆Eg95抗原基因 ,构建携带目的基因的真核表达载体 ,为细粒棘球蚴DNA疫苗的研究提供材料。方法 应用PCR方法从细粒棘球蚴cDNA文库中克隆获得Eg95抗原基因 ,将其克隆至 pUCm -T载体 ,测序确定其正确性。利用定向克隆技术将Eg95抗原基因片段克隆至真核表达质粒pcDNA3上 ,根据选择标记的氨苄抗性基因筛选到阳性克隆 ,通过酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆 ,测序确定序列。结果 测序表明所选 pcDNA3-Eg95阳性克隆均为正确连接Eg95抗原基因的重组质粒 ,可以作为DNA疫苗作进一步的研究。结论 成功构建真核细胞表达载体 pcDNA3-Eg95。
新疆医科大学免疫学教研室；汕头大学医学院病原生物学教研室 乌鲁木齐830054 丁剑冰；林仁勇；温浩；王国荃；王笑峰；魏晓丽；傅玉才
关键词：细粒棘球蚴；Eg95抗原基因；真核表达质粒
摘要：目的 克隆Eg95抗原基因 ,构建携带目的基因的真核表达载体 ,为细粒棘球蚴DNA疫苗的研究提供材料。方法 应用PCR方法从细粒棘球蚴cDNA文库中克隆获得Eg95抗原基因 ,将其克隆至 pUCm -T载体 ,测序确定其正确性。利用定向克隆技术将Eg95抗原基因片段克隆至真核表达质粒pcDNA3上 ,根据选择标记的氨苄抗性基因筛选到阳性克隆 ,通过酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆 ,测序确定序列。结果 测序表明所选 pcDNA3-Eg95阳性克隆均为正确连接Eg95抗原基因的重组质粒 ,可以作为DNA疫苗作进一步的研究。结论 成功构建真核细胞表达载体 pcDNA3-Eg95。
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