巨细胞病毒感染与冠心病的关系探讨*
作者：黄从新 李庚山 李建军 许家利 江洪
单位：湖北医科大学附属第一医院(430060)心内科
关键词：巨细胞病毒；动脉粥样硬化；冠心病
心肺血管病杂志990402 摘要 探讨巨细胞病毒(CMV)感染与冠心病发生的关系。采用多聚酶链反应(PCR)技术检测47例冠心病患者(心肌梗塞11例，心绞痛36例)血CMV-DNA，同时选择17例同期住院的非冠心病患者作对照。冠心病患者47例，血CMV-DNA阳性者34例，占72.3%。对照组17例，血CMV-DNA阳性者4例，占23.5%，二者相比差异非常显著(P<0.01)。冠心病心肌梗塞亚组11例，血CMV-DNA阳性者9例，占81.8%。冠心病心绞痛亚组36例，血CMV-DNA阳性者25例，占69.4%，二亚组相比无显著差异(P>0.05)。冠心病心绞痛亚组又细分为单支、双支和三支血管病变组，各组CMV-DNA阳性检出率无差异(P>0.05)。本研究表明CMV感染可能与冠心病的发生与发展有一定关系。
, http://www.100md.com
Relationship of Cytomegalovirus
Infection and Coronary Heart Dise ase
Huang Congxin,Li Gengshan,Li Jianjun,et al.
Department of Cardiology,First Affiliated Hospital，Hubei Medical University,Wuhan(430060)
Abstract The present study is to explore the relationship of cytomegalovirus (CMV) infection and coronary heart disease(CHD).The serum CM V-DNA was examined using polymerase chain reaction (PCR) technique in 47 pati ents with CHD including 11 of myocardial infarction (MI) and 36 of angina and no n-CHD 17 patients.The positive rate of serum CMV-DNA in patients with CHD was much high er than that in patients non-CHD(72.3% vs 23.5%,P<0.01).The positive rate of seru m CMV-DNA in patients with MI subgroup was not significantly higher than that i n patients with angina subgroup(81.8% vs 69.4%,P>0.05).Moreover,there was n ot s ignificant relation between numbers of diseased vessels and positive rate of CMV -DNA in patients with angian(P>0.05).The results indicated that CMV infect ion might be involved in development of CHD.
, 百拇医药
Key words: Cytomegalovirus；Atherosclerosis；Coronary heart disease
冠心病是危及人们健康的常见疾病。迄今为止，其发生机理尚未明了。文献报道，引起冠心病的危险因子较多，如高血压、高血脂、高血糖、吸烟等，但都不能完全解释其成因及严重性。新近观察发现病毒感染尤其是巨细胞病毒感染(CMV)与冠心病的发生有一定关系[1]。据此，本文采用多聚酶链反应(PCR)技术检测冠心病患者血CMV-DNA，并与非冠心病患者进行对比，现报道如下。
材料与方法
1.研究对象 选择1998年以来住院确诊为冠心病患者47例，列为冠心病组。所有患者冠心病的诊断均经冠状动脉造影证实。其中心肌梗塞(MI)11例(包括急性MI2例，陈旧性MI9例)，男10例，女1例，年龄57～68岁，平均61.1±11岁，列为冠心病MI亚组。心绞痛36例，男32例，女4例，年龄40～75岁，平均62.4±13岁，列为冠心病心绞痛亚组。根据冠状动脉造影结果，将冠心病心绞痛亚组又分为单支、双支和三支血管病变组。另选同期住院的非冠心病患者17例，男14例，女3例，年龄42～71岁，平均61.9±10岁，列为对照组。其临床诊断为风湿性心脏病10例，高血压病和/或高血压性心脏病2例，系统性红斑狼疮2例，肿瘤性心包炎、硬皮病、原发性醛固酮增多症各1例。3组患者中男女性别构成比无差异。
, http://www.100md.com
2.血CMV-DNA检测 血CMV-DNA检测方法按上海复华生物工程有限公司的试剂盒操作说明进行。取患者清晨禁食肘静脉血2ml，单盲法进行血CMV-DNAPCR检测。血液标本经3000转/秒离心10min，弃除上清后，沉淀物加入50μl裂解液，混匀后100℃沸水浴10min。15000转/秒离心15min。取上清10μl加入已分装有CMVPCR反应混合物的离心管中，置93℃保温35min，按90℃30秒，72℃60秒循环扩增35次，最后置于72℃5min。扩增产物用2%的琼脂糖凝胶(Sigma,USA)于70V电泳3h。若标本扩增带(扩增片段435bp)与阳性对照扩增带处于同一位置，即判为患者血CMV-DNA检测阳性，否则为阴性。
结 果
采用单盲法进行血CMV-DNAPCR检测，并与同期住院的非冠心病患者对比研究，发现冠心病患者47例，血CMV-DNA阳性者34例，占72.3%。对照组17例，血CMV-DNA阳性者4例，占23.5%。二者相比差异非常显著(P<0.01)。冠心病MI亚组11例，血CMV-DNA阳性者9例，占81.8%；冠心病心绞痛亚组36例，血CMV-DNA阳性者25例，占69.4%，二亚组相比无显著差异(P>0.05)。根据冠状动脉造影结果，将冠心病心绞痛亚组又分为单支、双支和三支血管病变组。比较各组CMV-DNA阳性检出率之差异，结果详见表1。
, 百拇医药
表1 冠心病心绞痛患者血管病变支数与CMV-DNA阳性检出率的关系 血管病变支数
例数
CMV-DNA阳性数
CMV-DNA阳性检出率(%)
单支血管病变组
9
7
77.6
双支血管病变组
12
8
66.7
, 百拇医药
三支血管病变组
15
10
66.7
由表1可见，根据冠状动脉造影结果，冠心病心绞痛亚组中单支、双支和三支血管病变间相比CMV-DNA阳性检出率无明显差别(P>0.05)。讨 论
冠心病是工业化国家常见多发性疾病，亦是发达国家人口主要死因之一。其病因及发病机理尚未明了。Ross提出的“损伤-反应假说(injury-response hypothesis)”已较为人们所接受，亦即动脉粥样硬化病变始于血管内皮细胞受损[2]。继之，启动血管局部及血液某些成分反应，导致血管内膜增厚，管腔狭窄。引起血管内皮损伤的因子较多，其中病毒源学说早已被动物研究所证实。在由CMV所诱发的鸡动脉粥样硬化病变的形成过程中，可以观察到动脉内膜受损后，平滑肌细胞增生及脂质沉积。病毒感染动物培养细胞后可引起细胞内胆固醇及胆固醇脂的蓄积，人类血管内皮细胞和平滑肌细胞受CMV感染后亦可引起类似的改变。
, 百拇医药
有关CMV感染与冠心病的关系研究越来越受到临床研究者的关注。1990年，Melinck等[3]在人类动脉粥样硬化病变及周围组织中检测出CMV抗原，且病灶周围组织CMV抗原阳性检出率高于病灶本身，据此他认为病毒感染可能是动脉粥样硬化发生的始动因子。Hendrix等[4]对因动脉粥样硬化病变行手术治疗的患者血管进行研究，并同期非冠心病死亡的尸检患者作对照，经PCR技术检测发现，前者血管壁CMV-DNA的阳性检出率明显高于后者(P<0.01)。美国动脉粥样硬化危险因子社区调查结果提示，经血清CMV及HSV抗体测定，CMV感染与动脉粥样硬化的发生有明显相关性，且不受高血压、高血脂等其它动脉粥样硬化相关的危险因素的影响，提示CMV感染是动脉粥样硬化和冠心病发生的独立危险因子[5]。本研究选用同期住院患者进行观察，在一定程度上除外环境及系统误差引起的CMV-DNA假阳性和假阴性，结果提示冠心病患者CMV-DNA的阳性检出率明显高于对照组，似提示CMV感染与冠心病发生可能有一定相关性。
, 百拇医药
CMV感染与冠心病的严重程度有否关系尚缺乏报道。本研究将冠心病MI亚组的CMV-DNA阳性检出率与冠心病心绞痛亚组比较，前者检出率绝对值虽高于后者，但经统计学处理无明显差别(P>0.05)。此外，根据冠状动脉造影结果，将冠心病心绞痛亚组又分为单支、双支和三支血管病变组。比较各组CMV-DNA阳性检出率之差异，结果也未见明显差别(P>0.05)。是否与例数尚少有关待进一步探讨。
病毒感染诱发动脉粥样硬化及冠心病的发病机理尚不清楚。据文献报道认为病毒经细胞膜上的受体侵入内皮细胞和/或平滑肌细胞并持续活动和潜伏感染，可引起局部单核细胞、淋巴细胞、多形核白细胞在局部浸润，平滑肌细胞增殖，并改变细胞的脂质代谢，加上一些冠心病的其它危险因子的相互作用，导致冠心病的发生与发展[5]，确切机理有待进一步研究。
参考文献
1 Zhou YF,Leon MB,Waclawiw MA,et al.Association between prior cytomegalo virus infection and the risk of restenosis after coronary atherectomy.N Eng1 J M ed,1996,335∶628～630.
, 百拇医药
2 Ross R.The pathogenesis of atherosclerosis:a perspective for the 1990s .Nature,1993,362∶801.
3 Melinck JL,Adam E,Bebakey ME.Cytomegalovirus of atherosclerosis.Eur He art J 1993,14(suppl.K)∶30.
4 Hendrix MGR.Salimans MMM,Van Boven CPA,et al.High prevalence of latent ly present cytomegalovirus in arterial walls of patients suffering from grade Ⅲ atherosclerosis.Am J Pathol 1990,136∶23.
5 Chiu B,Viira E,Tucker W,et al,Chlamydia pneumoniae,cytomegalovirus,and herpes simplex virus in atherosclerosis of the carotid artery.Circulation,1997,96∶2144.
(1998-10-05收稿)
(1999-07-09修回), http://www.100md.com
单位：湖北医科大学附属第一医院(430060)心内科
关键词：巨细胞病毒；动脉粥样硬化；冠心病
心肺血管病杂志990402 摘要 探讨巨细胞病毒(CMV)感染与冠心病发生的关系。采用多聚酶链反应(PCR)技术检测47例冠心病患者(心肌梗塞11例，心绞痛36例)血CMV-DNA，同时选择17例同期住院的非冠心病患者作对照。冠心病患者47例，血CMV-DNA阳性者34例，占72.3%。对照组17例，血CMV-DNA阳性者4例，占23.5%，二者相比差异非常显著(P<0.01)。冠心病心肌梗塞亚组11例，血CMV-DNA阳性者9例，占81.8%。冠心病心绞痛亚组36例，血CMV-DNA阳性者25例，占69.4%，二亚组相比无显著差异(P>0.05)。冠心病心绞痛亚组又细分为单支、双支和三支血管病变组，各组CMV-DNA阳性检出率无差异(P>0.05)。本研究表明CMV感染可能与冠心病的发生与发展有一定关系。
, http://www.100md.com
Relationship of Cytomegalovirus
Infection and Coronary Heart Dise ase
Huang Congxin,Li Gengshan,Li Jianjun,et al.
Department of Cardiology,First Affiliated Hospital，Hubei Medical University,Wuhan(430060)
Abstract The present study is to explore the relationship of cytomegalovirus (CMV) infection and coronary heart disease(CHD).The serum CM V-DNA was examined using polymerase chain reaction (PCR) technique in 47 pati ents with CHD including 11 of myocardial infarction (MI) and 36 of angina and no n-CHD 17 patients.The positive rate of serum CMV-DNA in patients with CHD was much high er than that in patients non-CHD(72.3% vs 23.5%,P<0.01).The positive rate of seru m CMV-DNA in patients with MI subgroup was not significantly higher than that i n patients with angina subgroup(81.8% vs 69.4%,P>0.05).Moreover,there was n ot s ignificant relation between numbers of diseased vessels and positive rate of CMV -DNA in patients with angian(P>0.05).The results indicated that CMV infect ion might be involved in development of CHD.
, 百拇医药
Key words: Cytomegalovirus；Atherosclerosis；Coronary heart disease
冠心病是危及人们健康的常见疾病。迄今为止，其发生机理尚未明了。文献报道，引起冠心病的危险因子较多，如高血压、高血脂、高血糖、吸烟等，但都不能完全解释其成因及严重性。新近观察发现病毒感染尤其是巨细胞病毒感染(CMV)与冠心病的发生有一定关系[1]。据此，本文采用多聚酶链反应(PCR)技术检测冠心病患者血CMV-DNA，并与非冠心病患者进行对比，现报道如下。
材料与方法
1.研究对象 选择1998年以来住院确诊为冠心病患者47例，列为冠心病组。所有患者冠心病的诊断均经冠状动脉造影证实。其中心肌梗塞(MI)11例(包括急性MI2例，陈旧性MI9例)，男10例，女1例，年龄57～68岁，平均61.1±11岁，列为冠心病MI亚组。心绞痛36例，男32例，女4例，年龄40～75岁，平均62.4±13岁，列为冠心病心绞痛亚组。根据冠状动脉造影结果，将冠心病心绞痛亚组又分为单支、双支和三支血管病变组。另选同期住院的非冠心病患者17例，男14例，女3例，年龄42～71岁，平均61.9±10岁，列为对照组。其临床诊断为风湿性心脏病10例，高血压病和/或高血压性心脏病2例，系统性红斑狼疮2例，肿瘤性心包炎、硬皮病、原发性醛固酮增多症各1例。3组患者中男女性别构成比无差异。
, http://www.100md.com
2.血CMV-DNA检测 血CMV-DNA检测方法按上海复华生物工程有限公司的试剂盒操作说明进行。取患者清晨禁食肘静脉血2ml，单盲法进行血CMV-DNAPCR检测。血液标本经3000转/秒离心10min，弃除上清后，沉淀物加入50μl裂解液，混匀后100℃沸水浴10min。15000转/秒离心15min。取上清10μl加入已分装有CMVPCR反应混合物的离心管中，置93℃保温35min，按90℃30秒，72℃60秒循环扩增35次，最后置于72℃5min。扩增产物用2%的琼脂糖凝胶(Sigma,USA)于70V电泳3h。若标本扩增带(扩增片段435bp)与阳性对照扩增带处于同一位置，即判为患者血CMV-DNA检测阳性，否则为阴性。
结 果
采用单盲法进行血CMV-DNAPCR检测，并与同期住院的非冠心病患者对比研究，发现冠心病患者47例，血CMV-DNA阳性者34例，占72.3%。对照组17例，血CMV-DNA阳性者4例，占23.5%。二者相比差异非常显著(P<0.01)。冠心病MI亚组11例，血CMV-DNA阳性者9例，占81.8%；冠心病心绞痛亚组36例，血CMV-DNA阳性者25例，占69.4%，二亚组相比无显著差异(P>0.05)。根据冠状动脉造影结果，将冠心病心绞痛亚组又分为单支、双支和三支血管病变组。比较各组CMV-DNA阳性检出率之差异，结果详见表1。
, 百拇医药
表1 冠心病心绞痛患者血管病变支数与CMV-DNA阳性检出率的关系 血管病变支数
例数
CMV-DNA阳性数
CMV-DNA阳性检出率(%)
单支血管病变组
9
7
77.6
双支血管病变组
12
8
66.7
, 百拇医药
三支血管病变组
15
10
66.7
由表1可见，根据冠状动脉造影结果，冠心病心绞痛亚组中单支、双支和三支血管病变间相比CMV-DNA阳性检出率无明显差别(P>0.05)。讨 论
冠心病是工业化国家常见多发性疾病，亦是发达国家人口主要死因之一。其病因及发病机理尚未明了。Ross提出的“损伤-反应假说(injury-response hypothesis)”已较为人们所接受，亦即动脉粥样硬化病变始于血管内皮细胞受损[2]。继之，启动血管局部及血液某些成分反应，导致血管内膜增厚，管腔狭窄。引起血管内皮损伤的因子较多，其中病毒源学说早已被动物研究所证实。在由CMV所诱发的鸡动脉粥样硬化病变的形成过程中，可以观察到动脉内膜受损后，平滑肌细胞增生及脂质沉积。病毒感染动物培养细胞后可引起细胞内胆固醇及胆固醇脂的蓄积，人类血管内皮细胞和平滑肌细胞受CMV感染后亦可引起类似的改变。
, 百拇医药
有关CMV感染与冠心病的关系研究越来越受到临床研究者的关注。1990年，Melinck等[3]在人类动脉粥样硬化病变及周围组织中检测出CMV抗原，且病灶周围组织CMV抗原阳性检出率高于病灶本身，据此他认为病毒感染可能是动脉粥样硬化发生的始动因子。Hendrix等[4]对因动脉粥样硬化病变行手术治疗的患者血管进行研究，并同期非冠心病死亡的尸检患者作对照，经PCR技术检测发现，前者血管壁CMV-DNA的阳性检出率明显高于后者(P<0.01)。美国动脉粥样硬化危险因子社区调查结果提示，经血清CMV及HSV抗体测定，CMV感染与动脉粥样硬化的发生有明显相关性，且不受高血压、高血脂等其它动脉粥样硬化相关的危险因素的影响，提示CMV感染是动脉粥样硬化和冠心病发生的独立危险因子[5]。本研究选用同期住院患者进行观察，在一定程度上除外环境及系统误差引起的CMV-DNA假阳性和假阴性，结果提示冠心病患者CMV-DNA的阳性检出率明显高于对照组，似提示CMV感染与冠心病发生可能有一定相关性。
, 百拇医药
CMV感染与冠心病的严重程度有否关系尚缺乏报道。本研究将冠心病MI亚组的CMV-DNA阳性检出率与冠心病心绞痛亚组比较，前者检出率绝对值虽高于后者，但经统计学处理无明显差别(P>0.05)。此外，根据冠状动脉造影结果，将冠心病心绞痛亚组又分为单支、双支和三支血管病变组。比较各组CMV-DNA阳性检出率之差异，结果也未见明显差别(P>0.05)。是否与例数尚少有关待进一步探讨。
病毒感染诱发动脉粥样硬化及冠心病的发病机理尚不清楚。据文献报道认为病毒经细胞膜上的受体侵入内皮细胞和/或平滑肌细胞并持续活动和潜伏感染，可引起局部单核细胞、淋巴细胞、多形核白细胞在局部浸润，平滑肌细胞增殖，并改变细胞的脂质代谢，加上一些冠心病的其它危险因子的相互作用，导致冠心病的发生与发展[5]，确切机理有待进一步研究。
参考文献
1 Zhou YF,Leon MB,Waclawiw MA,et al.Association between prior cytomegalo virus infection and the risk of restenosis after coronary atherectomy.N Eng1 J M ed,1996,335∶628～630.
, 百拇医药
2 Ross R.The pathogenesis of atherosclerosis:a perspective for the 1990s .Nature,1993,362∶801.
3 Melinck JL,Adam E,Bebakey ME.Cytomegalovirus of atherosclerosis.Eur He art J 1993,14(suppl.K)∶30.
4 Hendrix MGR.Salimans MMM,Van Boven CPA,et al.High prevalence of latent ly present cytomegalovirus in arterial walls of patients suffering from grade Ⅲ atherosclerosis.Am J Pathol 1990,136∶23.
5 Chiu B,Viira E,Tucker W,et al,Chlamydia pneumoniae,cytomegalovirus,and herpes simplex virus in atherosclerosis of the carotid artery.Circulation,1997,96∶2144.
(1998-10-05收稿)
(1999-07-09修回), http://www.100md.com