新疆阿尔泰人工虫草菌丝体及培养液对实验性肝损伤的保护作用
作者：吴念江 管继萍 平学如 王清杰 申 敏 吴立新
单位：(新疆石油管理局总医院 克拉玛依834000)
关键词：阿尔泰人工虫草菌丝体及培养液；D-氨基半乳糖；肝损伤
中国医院药学杂志981103 摘要 目的:观察新疆阿尔泰人工虫草菌丝体(CCM)及培养液(CCL)的护肝作用。方法:采用D-氨基半乳糖(D-Gal)致大鼠小鼠实验性肝损伤。结果:CCM及CCL灌胃可使小鼠肝损伤升高的血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶明显下降(P<0.05),而对大鼠肝损伤升高的谷丙转氨酶及谷草转氨酶作用不明显(P>0.05),但可使大鼠肝损伤升高的血清前白蛋白明显下降(P<0.05)。病理组织切片显示,CCM和CCL对大鼠及小鼠肝损伤的肝组织均有一定的保护作用。
结论:CCM和CCL有一定的护肝作用。
, 百拇医药
Protective effect of mycelia of cultivated cardyceps and cultivated liquid from xinjiang AITai district on experimental hepatic injury
Wu Nianjiang,Guan Jiping,Pin Xueru,et al
(General hospital of Xinjing Petrolum Administration Bureau,Kalamay 834000)
Aim:to observe the protective effect of artifical mycelia of cultivated cardyceps(CCM) and cultivated liquid(CCL) from xinjiang altai district.Method:The D-galactosamine(D-Gal) was used for rats and mice experimental hepatic injury.Result:The experiment showed that CCM and CCL could obviously reduce the rising serum alanine transaminase and serum glutamic oxaloacetic transaminase from the hepatic injury in mice(P<0.05),but there was no obvious effect on rising alanine transaminase and glutamic oxaloacetic from the hepatic injury for rats(P>0.05).However,CCM and CCL could reduce the prealbumin rose from hepatic injury for rats(P<0.05).Conclusion:The pathology cut section shows that CCM and CCL have certain protective effect for rats and mice,which suffered hepatic injury from D-Gal.
, 百拇医药
Key words mycelia of cultivated cardyceps cultivatedliquid,D-galactosamine,hepaticinjury
冬虫夏草系我国名贵强壮滋补中药。目前它在中枢神经系统、心血管系统、免疫系统及抗肿瘤方面的功效已被人们肯定。近年来不少研究部门人工发酵培养成功,获得人工虫草菌,解决天然虫草稀缺问题。新疆农业科学院微生物研究所培育的新疆阿尔泰人工虫草菌丝体就是其中之一。经分析鉴定,其有效成份、理化性质及药理作用与天然阿尔泰虫草相似,且毒性较少。据文献报道[1],人工虫草菌对病毒性肝炎有一定疗效,如心肝宝胶囊、金水宝胶囊等。为验证阿尔泰人工虫草菌是否也具有护肝作用,我们观察了人工菌丝体及培养液对大鼠及小鼠D-氨基半乳糖所致的实验性肝损伤的保护作用。现报道如下:
1 实验材料
1.1 药物 阿尔泰人工虫草菌丝体(CCM,系菌丝体干燥粉末),人工虫草培养液(CCL,原液滤液残渣经两次蒸馏水提取,与原滤液合并,浓缩成三倍滤液。经分析,其有效成份与菌丝体相似,含量为菌丝体45%),由新疆农业科学院微生物研究所提供。D-氨基半乳糖(D-Gal):重庆医学院化学系提供,批号951124。联苯双酯滴丸:中外合资天津太平阳制药有限公司,批号951206,将药丸研碎,用生理盐水配成所需浓度。
, 百拇医药
1.2 动物 Wistar大鼠(200.0±20.0 g),NIH系小鼠(20.0±5.0 g),雌雄兼有,由新疆自治区地方病研究所提供。
1.3 仪器 美国Bekeam公司CX7全自动生化分析仪。
2 方法及结果
2.1 CCM及CCL对D-Gal致大鼠肝损伤的保护作用 大鼠90只,雌雄兼有,随机分为9组,每组10只,分别为正常组,联苯双酯组(100 mg.kg-1),D-Gal模型组(560 mg.kg-1),CCM(2.8,1.4,0.7 g.kg-1)三个剂量组及CCL(20,10,5 ml.kg-1)三个剂量组。CCM和CCL组每日灌胃给药一次,连续5 d,正常组及D-Gal组给予同量生理盐水,末次给药后1 h除正常组外,其余组皆腹膜内给D-Gal,于18 h后进行尾部取血测定血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶(采用IFCC推荐酶促动力学方法)及血清前白蛋白(采用上海长征公司试剂盒免疫透射比浊法),同时处死动物取肝脏(肝脏切片采用常规HE染色法)作病理检查。结果见表1。
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表 1 阿尔泰人工虫草菌丝体及培养液对D-Gal致大鼠肝损伤的保护作用 组 别
动物数
只
血清谷丙转氨酶
±s
血清谷草转氨酶±s
血清前白蛋白±s
正常组
10
, 百拇医药
74.0±19.0
172.0±77.7
330.2±64.1
D-Gal模型组
10
8 232.5±4 290.7
8 473.3±5 492.9
596.1±177.3
联苯双酯组
10
3 717.4±2 552.2*2
, 百拇医药
3 419.3±3 160.82
680.8±149.5
菌丝体高剂量组(2.8 g.kg-1)
10
5 368.0±2 409.6
6 088.0±2 489.6
369.2±91.1*1
菌丝体中剂量组(1.4 g.kg-1)
10
, 百拇医药 5 927.0±2 808.1
6 785.0±2 783.6
350.6±43.9*2
菌丝体低剂量组(0.7 g.kg-1)
10
7 555.6±3 640.5
7 356.4±3 612.8
495.8±181.3
培养液高剂量组(20 ml.kg-1)
10
, 百拇医药
7 762.5±6 144.1
8 265.0±6 427.6
334.7±85.4*2
培养液中剂量组(10 ml.kg-1)
10
8 100.0±5 852.8
9 110.0±6 427.7
384.3±56.5*1
培养液低剂量组(5 ml.kg-1)
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10
8 600.0±4 260.5
10 193.0±4 120.8
367.1±67.3*1
注:与D-Gal对照组比较,1 P<0.05,2 P<0.01 从表1可见,CCM三个剂量组的血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶皆低于D-Gal模型组,且下降程度与剂量呈相关性,CCL组只有高剂量低于D-Gal模型组,但与D-Gal组比较,差异均无显著性(P>0.05),说明CCM和CCL对大鼠肝损伤升高的血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶无显著降低作用。从血清前白蛋白数据分析可见,CCM组和CCL组皆明显低于D-Gal模型组(P<0.05)且CCM中剂量组和CCL高剂量组降低作用更为明显(P<0.01),说明,CCM和CCL有降低大鼠肝损伤升高的血清前白蛋白作用。
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2.2 CCM及CCL对D-Gal致小鼠肝损伤的保护作用 小鼠70只,每组10只,雌雄兼有,随机分为正常组、D-Gal模型组(800 mg*kg-1)、联苯双酯组(200 mg.kg-1)、CCM(4,2 g.kg-1)及CCL(20,10 ml.kg-1)组,实验及检验方法同2.1,结果见表2。
从表2中可见,D-Gal模型组的血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶均高于正常组,CCM和CCL的两个剂量组的血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶皆明显低于D-Gal模型组(P<0.05),且CCM中剂量组和CCL高剂量组降低更为明显(P<0.01),说明CCM和CCL可降低小鼠肝损伤升高的血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶。
2.3 病理检查结果 实验2.1和实验2.2中正
, 百拇医药
表 2 阿尔泰人工虫草菌丝体及培养液对D-Gal致小鼠肝损伤的保护作用 组 别
动物数
只
血清谷丙转氨酶±s
血清谷草转氨酶±s
正常组
10
99.9±15.7
106.3±24.1
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D-Gal模型组
10
249.9±18.7
230.5±43.7
联苯双酯组
10
96.8±15.6*2
100.1±32.0*2
菌丝体高剂量组(4 g.kg-1)
10
194.7±38.9*1
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175.3±24.8*1
菌丝体中剂量组(2 g.kg-1)
10
118.4±70.0*2
109.6±19.6*2
培养液高剂量组( 20 ml.kg-1 )
10
152.7±14.5*2
135.7±21.9*2
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培养液中剂量组( 10 ml.kg-1 )
10
215.9±16.9*1
206.6±37.3*1
注:与D-Gal对照组比较,1 P<0.05,2 P<0.01常组大鼠和小鼠的肝组织结构完整;D-Gal模型组动物肝细胞排列紊乱、肿胀及气球样变,肝小叶有较大范围的细胞变性坏死;CCM中剂量组和CCL高剂量组大鼠肝细胞变性坏死不明显,占30%和20%;CCM高剂量组大鼠肝细胞变性坏死占75%;低剂量组占83%;CCL低、中剂量组则分别为67%和58%。在实验2.2中,CCM高、中剂量组小鼠肝细胞变性坏死占42%和37%,CCL高、中剂量组则为35%和64%,与D-Gal组相比,肝细胞损伤明显减轻。
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3 讨论
D-Gal致肝损伤其病理改变与临床病毒性肝炎的改变很相似,有文献报道[2],注射D-Gal 6 h后肝窦枯氏细胞即有肿胀变性,网状内皮系统功能(RES)减弱,并认为RES障碍是增加肝衰、死亡的重要原因。有研究证明[3],人工虫草菌丝能提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力,通过对核酸及蛋白代谢的影响,增加机体免疫功能,对细胞免疫有促进作用,能激活肝脏kuffer细胞,改善肝功能,降低GPT,抑制γ-球蛋白及肝纤维化进程,起到良好的抗纤维化作用。因此,人工虫草菌丝成为治疗慢性肝炎的药物之一。本实验研究结果发现,新疆阿尔泰人工虫草菌丝体及培养液对D-Gal致大鼠及小鼠肝损伤的肝组织有一定的保护作用,但降肝损伤升高的血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶作用,只对小鼠明显,对大鼠不明显,并且实验中发现CCM和CCL只对大鼠肝损伤升高的血清前白蛋白有降低作用,而对小鼠却无此作用,造成种属差异的原因不明,尚待进一步研究确定。实验结果提示,新疆阿尔泰人工虫草菌丝同样能起到护肝降酶作用。
, 百拇医药
*新疆克拉玛依市人民医院药剂科
参考文献
1 樊洪青,高俊梅.虫草头孢菌丝胶囊治疗慢性活动性肝炎疗效观察.中国医院药学杂志,1992,12(12):547
2 何雅军,吴 谦,朱瑞斐等.虫草多糖脂质体对小鼠肝损伤的保护作用.中西药结合肝病杂志,1996,6(1):14
3 周良楣,杨倚竹,续月明.冬虫夏草菌丝治疗慢性乙型病毒性肝炎的近期疗效观察.中国中药杂志,1990,15(1):53
(1997年3月18日收稿), http://www.100md.com
单位：(新疆石油管理局总医院 克拉玛依834000)
关键词：阿尔泰人工虫草菌丝体及培养液；D-氨基半乳糖；肝损伤
中国医院药学杂志981103 摘要 目的:观察新疆阿尔泰人工虫草菌丝体(CCM)及培养液(CCL)的护肝作用。方法:采用D-氨基半乳糖(D-Gal)致大鼠小鼠实验性肝损伤。结果:CCM及CCL灌胃可使小鼠肝损伤升高的血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶明显下降(P<0.05),而对大鼠肝损伤升高的谷丙转氨酶及谷草转氨酶作用不明显(P>0.05),但可使大鼠肝损伤升高的血清前白蛋白明显下降(P<0.05)。病理组织切片显示,CCM和CCL对大鼠及小鼠肝损伤的肝组织均有一定的保护作用。
结论:CCM和CCL有一定的护肝作用。
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Protective effect of mycelia of cultivated cardyceps and cultivated liquid from xinjiang AITai district on experimental hepatic injury
Wu Nianjiang,Guan Jiping,Pin Xueru,et al
(General hospital of Xinjing Petrolum Administration Bureau,Kalamay 834000)
Aim:to observe the protective effect of artifical mycelia of cultivated cardyceps(CCM) and cultivated liquid(CCL) from xinjiang altai district.Method:The D-galactosamine(D-Gal) was used for rats and mice experimental hepatic injury.Result:The experiment showed that CCM and CCL could obviously reduce the rising serum alanine transaminase and serum glutamic oxaloacetic transaminase from the hepatic injury in mice(P<0.05),but there was no obvious effect on rising alanine transaminase and glutamic oxaloacetic from the hepatic injury for rats(P>0.05).However,CCM and CCL could reduce the prealbumin rose from hepatic injury for rats(P<0.05).Conclusion:The pathology cut section shows that CCM and CCL have certain protective effect for rats and mice,which suffered hepatic injury from D-Gal.
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Key words mycelia of cultivated cardyceps cultivatedliquid,D-galactosamine,hepaticinjury
冬虫夏草系我国名贵强壮滋补中药。目前它在中枢神经系统、心血管系统、免疫系统及抗肿瘤方面的功效已被人们肯定。近年来不少研究部门人工发酵培养成功,获得人工虫草菌,解决天然虫草稀缺问题。新疆农业科学院微生物研究所培育的新疆阿尔泰人工虫草菌丝体就是其中之一。经分析鉴定,其有效成份、理化性质及药理作用与天然阿尔泰虫草相似,且毒性较少。据文献报道[1],人工虫草菌对病毒性肝炎有一定疗效,如心肝宝胶囊、金水宝胶囊等。为验证阿尔泰人工虫草菌是否也具有护肝作用,我们观察了人工菌丝体及培养液对大鼠及小鼠D-氨基半乳糖所致的实验性肝损伤的保护作用。现报道如下:
1 实验材料
1.1 药物 阿尔泰人工虫草菌丝体(CCM,系菌丝体干燥粉末),人工虫草培养液(CCL,原液滤液残渣经两次蒸馏水提取,与原滤液合并,浓缩成三倍滤液。经分析,其有效成份与菌丝体相似,含量为菌丝体45%),由新疆农业科学院微生物研究所提供。D-氨基半乳糖(D-Gal):重庆医学院化学系提供,批号951124。联苯双酯滴丸:中外合资天津太平阳制药有限公司,批号951206,将药丸研碎,用生理盐水配成所需浓度。
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1.2 动物 Wistar大鼠(200.0±20.0 g),NIH系小鼠(20.0±5.0 g),雌雄兼有,由新疆自治区地方病研究所提供。
1.3 仪器 美国Bekeam公司CX7全自动生化分析仪。
2 方法及结果
2.1 CCM及CCL对D-Gal致大鼠肝损伤的保护作用 大鼠90只,雌雄兼有,随机分为9组,每组10只,分别为正常组,联苯双酯组(100 mg.kg-1),D-Gal模型组(560 mg.kg-1),CCM(2.8,1.4,0.7 g.kg-1)三个剂量组及CCL(20,10,5 ml.kg-1)三个剂量组。CCM和CCL组每日灌胃给药一次,连续5 d,正常组及D-Gal组给予同量生理盐水,末次给药后1 h除正常组外,其余组皆腹膜内给D-Gal,于18 h后进行尾部取血测定血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶(采用IFCC推荐酶促动力学方法)及血清前白蛋白(采用上海长征公司试剂盒免疫透射比浊法),同时处死动物取肝脏(肝脏切片采用常规HE染色法)作病理检查。结果见表1。
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表 1 阿尔泰人工虫草菌丝体及培养液对D-Gal致大鼠肝损伤的保护作用 组 别
动物数
只
血清谷丙转氨酶
±s血清谷草转氨酶
±s血清前白蛋白
±s正常组
10
, 百拇医药
74.0±19.0
172.0±77.7
330.2±64.1
D-Gal模型组
10
8 232.5±4 290.7
8 473.3±5 492.9
596.1±177.3
联苯双酯组
10
3 717.4±2 552.2*2
, 百拇医药
3 419.3±3 160.82
680.8±149.5
菌丝体高剂量组(2.8 g.kg-1)
10
5 368.0±2 409.6
6 088.0±2 489.6
369.2±91.1*1
菌丝体中剂量组(1.4 g.kg-1)
10
, 百拇医药 5 927.0±2 808.1
6 785.0±2 783.6
350.6±43.9*2
菌丝体低剂量组(0.7 g.kg-1)
10
7 555.6±3 640.5
7 356.4±3 612.8
495.8±181.3
培养液高剂量组(20 ml.kg-1)
10
, 百拇医药
7 762.5±6 144.1
8 265.0±6 427.6
334.7±85.4*2
培养液中剂量组(10 ml.kg-1)
10
8 100.0±5 852.8
9 110.0±6 427.7
384.3±56.5*1
培养液低剂量组(5 ml.kg-1)
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10
8 600.0±4 260.5
10 193.0±4 120.8
367.1±67.3*1
注:与D-Gal对照组比较,1 P<0.05,2 P<0.01 从表1可见,CCM三个剂量组的血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶皆低于D-Gal模型组,且下降程度与剂量呈相关性,CCL组只有高剂量低于D-Gal模型组,但与D-Gal组比较,差异均无显著性(P>0.05),说明CCM和CCL对大鼠肝损伤升高的血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶无显著降低作用。从血清前白蛋白数据分析可见,CCM组和CCL组皆明显低于D-Gal模型组(P<0.05)且CCM中剂量组和CCL高剂量组降低作用更为明显(P<0.01),说明,CCM和CCL有降低大鼠肝损伤升高的血清前白蛋白作用。
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2.2 CCM及CCL对D-Gal致小鼠肝损伤的保护作用 小鼠70只,每组10只,雌雄兼有,随机分为正常组、D-Gal模型组(800 mg*kg-1)、联苯双酯组(200 mg.kg-1)、CCM(4,2 g.kg-1)及CCL(20,10 ml.kg-1)组,实验及检验方法同2.1,结果见表2。
从表2中可见,D-Gal模型组的血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶均高于正常组,CCM和CCL的两个剂量组的血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶皆明显低于D-Gal模型组(P<0.05),且CCM中剂量组和CCL高剂量组降低更为明显(P<0.01),说明CCM和CCL可降低小鼠肝损伤升高的血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶。
2.3 病理检查结果 实验2.1和实验2.2中正
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表 2 阿尔泰人工虫草菌丝体及培养液对D-Gal致小鼠肝损伤的保护作用 组 别
动物数
只
血清谷丙转氨酶
±s血清谷草转氨酶
±s正常组
10
99.9±15.7
106.3±24.1
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D-Gal模型组
10
249.9±18.7
230.5±43.7
联苯双酯组
10
96.8±15.6*2
100.1±32.0*2
菌丝体高剂量组(4 g.kg-1)
10
194.7±38.9*1
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175.3±24.8*1
菌丝体中剂量组(2 g.kg-1)
10
118.4±70.0*2
109.6±19.6*2
培养液高剂量组( 20 ml.kg-1 )
10
152.7±14.5*2
135.7±21.9*2
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培养液中剂量组( 10 ml.kg-1 )
10
215.9±16.9*1
206.6±37.3*1
注:与D-Gal对照组比较,1 P<0.05,2 P<0.01常组大鼠和小鼠的肝组织结构完整;D-Gal模型组动物肝细胞排列紊乱、肿胀及气球样变,肝小叶有较大范围的细胞变性坏死;CCM中剂量组和CCL高剂量组大鼠肝细胞变性坏死不明显,占30%和20%;CCM高剂量组大鼠肝细胞变性坏死占75%;低剂量组占83%;CCL低、中剂量组则分别为67%和58%。在实验2.2中,CCM高、中剂量组小鼠肝细胞变性坏死占42%和37%,CCL高、中剂量组则为35%和64%,与D-Gal组相比,肝细胞损伤明显减轻。
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3 讨论
D-Gal致肝损伤其病理改变与临床病毒性肝炎的改变很相似,有文献报道[2],注射D-Gal 6 h后肝窦枯氏细胞即有肿胀变性,网状内皮系统功能(RES)减弱,并认为RES障碍是增加肝衰、死亡的重要原因。有研究证明[3],人工虫草菌丝能提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力,通过对核酸及蛋白代谢的影响,增加机体免疫功能,对细胞免疫有促进作用,能激活肝脏kuffer细胞,改善肝功能,降低GPT,抑制γ-球蛋白及肝纤维化进程,起到良好的抗纤维化作用。因此,人工虫草菌丝成为治疗慢性肝炎的药物之一。本实验研究结果发现,新疆阿尔泰人工虫草菌丝体及培养液对D-Gal致大鼠及小鼠肝损伤的肝组织有一定的保护作用,但降肝损伤升高的血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶作用,只对小鼠明显,对大鼠不明显,并且实验中发现CCM和CCL只对大鼠肝损伤升高的血清前白蛋白有降低作用,而对小鼠却无此作用,造成种属差异的原因不明,尚待进一步研究确定。实验结果提示,新疆阿尔泰人工虫草菌丝同样能起到护肝降酶作用。
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参考文献
1 樊洪青,高俊梅.虫草头孢菌丝胶囊治疗慢性活动性肝炎疗效观察.中国医院药学杂志,1992,12(12):547
2 何雅军,吴 谦,朱瑞斐等.虫草多糖脂质体对小鼠肝损伤的保护作用.中西药结合肝病杂志,1996,6(1):14
3 周良楣,杨倚竹,续月明.冬虫夏草菌丝治疗慢性乙型病毒性肝炎的近期疗效观察.中国中药杂志,1990,15(1):53
(1997年3月18日收稿), http://www.100md.com