环丙沙星与庆大霉素联用的抗生素后效应
作者：崔 洁 郭中固 李志光 王宏斌
单位：(葛洲坝集团公司中心医院 宜昌443002)
关键词：
中国医院药学杂志981106 应用抗生素后效应(Postantibiotic effect,PAE)可评价抗菌药的联合作用。氟喹诺酮类与氨基糖苷类在治疗感染时,常联合应用。为此,我们对环丙沙星(Ciprofloxacin,CPLX)和庆大霉素(Gentamicin,GTM)联用的PAE进行了研究,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料 抗菌药物:环丙沙星(上海第二制药厂,批号950602),庆大霉素(中国药品生物制品检定中心,批号3269112)。两种抗菌药均分别应用磷酸盐缓冲液配制成1 280 μg.ml-1的贮备液[1],冰箱保存备用。培养基:Mueller-Hinton肉汤培养基(MHB),由浙江军区后勤检验所提供,营养琼脂自配。菌种:临床分离的金葡菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌各7株。受试菌接种于MHB中,37 ℃过夜培养,用MHB将菌悬液稀释至107～108 cfu.ml-1[2],备用。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 MIC的测定 采用微量稀释法[1]。
1.2.2 PAE的测定 按简易棋盘法设计环丙沙星与庆大霉素联合使用方案,采用微量接种菌落计数法测定PAE。
将CPLX、GTM的贮备液以灭菌MHB分别配制成5,10,20,40倍于受试菌各菌株的最低抑菌浓度(MIC)的应用液。菌悬液以MHB稀释至106～107 cfu.ml-1。对照组:取菌悬液0.5 ml加至MHB 4.5 ml的试管中。试验组:(1) 单独用药组:将各浓度的CPLX、GTM 0.5 ml分别加至MHB 4.0 ml的试管中,再加入菌液0.5 ml。(2) 联合用药组:按简易棋盘法组合,将各个浓度的CPLX、GTM 0.5 ml分别加至MHB 3.5 ml的试管中,再加入菌悬液0.5 ml。旋涡混匀,使各管CPLX、GTM的最终浓度分别为0.5,1,2,4 MIC,菌液浓度为105～106 cfu.ml-1。将上述各组试管置37 ℃培养箱内培养1 h。采用离心沉淀法[3]洗涤3次,于最后一次洗涤后取样计数,此时为去除药物零时。各管继续37 ℃培养,每隔1 h取样计数,直至培养液出现明显混浊为止。
, 百拇医药
以实验组与对照组的cfu.ml-1比去除药物零时增加10倍所需的时间之差计为PAE。联合PAE的判断标准为:联合用药PAE比单用药PAE之和延长1 h以上为协同作用;联合用药PAE与单用药PAE之和接近为相加作用;联合用药PAE与两种单用药PAE的最大值相近为无关作用;联合用药PAE小于两种单用药PAE的最小值为拮抗作用[4]。
2 结果
2.1 CPLX和GTM对三种致病菌的MICs见表1。
2.2 CPLX和GTM对三种致病菌的PAE及联合PAE见表2。
表 1 CPLX和GTM对三种致病菌的MICS(μg.ml-1) 细 菌(株数)
, 百拇医药
药 物
MICR
MICM
金葡菌(7)
CPLX
0.031 3～8
0.23
GTM
1～8
1.49
大肠埃希氏菌(7)
CPLX
, 百拇医药
0.016～16
0.15
GTM
0.125～128
9.75
铜绿假单胞菌(7)
CPLX
0.062 5～0.5
0.093
GTM
0.5～32
1.0
, 百拇医药 注:MICR:MIC范围, MICM:MIC几何均数表 2 CPLX、GTM对三种细菌的PAE及联用的PAE(h,n=7) 药
物
菌
种
药 物 浓 度
0.5 MIC
1 MIC
2 MIC
4 MIC
GTM
1
, http://www.100md.com
0.6±0.4
0.6±0.4
1.1±0.7
2.1±0.9
2
0.2±0.3
0.6±0.6
0.9±0.8
1.4±0.9
3
0.1±0.1
0.6±0.5
, 百拇医药 0.8±0.6
1.2±0.8
CPLX
1
0.6±0.4
0.9±0.5
1.3±0.8
1.6±0.7
2
0.1±0.2
0.2±0.2
1.0±0.8
1.6±1.1
, 百拇医药
3
0.2±0.2
0.3±0.4
0.6±0.5
1.7±0.8
GTM
与
CPLX
1
1.1±1.1(A)
1.5±1.2(A)
2.5±1.4(A)
, http://www.100md.com 3.31.4(A)
2
0.4±0.3(A)
0.9±0.5(A)
1.9±0.9(A)
2.9±1.4(A)
3
0.2±0.1(I)
0.6±0.4(I)
1.4±0.8(A)
2.7±0.9(A)
注:A.相加作用;I.无关作用;1.金葡菌;2.大肠埃希氏菌;3.铜绿假单胞菌3 讨论
, 百拇医药
3.1 PAE可用来评价抗菌药物联合用药的合理性,例如,庆大霉素与青霉素、阿米卡星与哌拉西林等三种β-内酰胺类联合用药后的PAE均呈协同作用[5],CPLX与GTM常联用治疗感染。为评价此两药联用的合理性,我们对其联用PAE进行了研究。研究结果首次证实,联合应用CPLX与GTM对临床分离的三种共21株细菌的PAE具有相加作用。两药联用对金葡菌、大肠埃希氏菌的PAE在不同浓度下(0.5～4 MIC)均呈相加作用,而对铜绿假单胞菌在低浓度时,联合PAE虽有所延长,但呈无关作用。随着试验浓度的增大,亦呈相加作用。上述结果与两药联用的药敏试验结果一致,进一步证实了此两药联用的合理性。
3.2 本文研究表明,CPLX和GTM单独用药时,随着剂量的增加,PAE逐渐延长,呈剂量依赖性;两种药物联用的PAE也具有明显的剂量依赖性。可以认为联合应用此两药PAE的剂量依赖性与其单独用药的剂量依赖性一致。
3.3 文献报道,PAE值与细菌对抗菌药物的敏感性有关。多数耐药菌的PAE值明显低于正常菌株,甚至不出现PAE[6]。我们的实验结果显示,1株耐CPLX的金葡菌和1株耐GTM的铜绿假单胞菌及2株耐CPLX和1株耐GTM的大肠埃希氏菌,对不同浓度的试验药物均未产生明显的PAE。CPLX、GTM分别在2,4 MIC浓度下联合应用时,对此3株大肠埃希氏菌均出现PAE相加作用,CPLX和GTM对耐药金葡菌和耐药铜绿假单胞菌的联合PAE为无关作用。
, http://www.100md.com
3.4 抗生素联用的PAE测定,与常用的联合药敏试验相比,不仅可以了解抗菌药物联用后的抗菌作用的变动情况,而且还可以反映抗菌药物的浓度、作用时间与抗菌效应之间的关系,有助于临床给药方案的设计。本试验结果表明,CPLX与GTM联合应用时抗菌作用增强,不仅为临床联合应用此两药提供了依据,也对制定治疗方案具有实际指导意义。
参考文献
1 娄永新,王金良主编.实用临床细菌学检验与进展.第1版.天津:天津科技翻译出版公司,1993:249
2 陈秀枢,李有武,孙长贵.体外抗菌素后效应的方法学及其对临床金黄色葡萄球菌的研究.临床检验杂志,1991,9(2):58
3 Renneberg J,Walder M.Postantibiotic effects of imipenem,norfloxacin,and amikacin in vitro and in vivo.Antimicrob Agents Chemother,1989,33(10):1714
, 百拇医药
4 王 睿,刘 卫.氧氟沙星与哌拉西林单用或联合应用的抗生素后效应.中国抗生素杂志,1993,18(5):383
5 Winstanley T G,Hastings J G M.Penicillin-aminoglycoside synergy and post-antibiotic effect for enterococci.J Antimicrob Chemother,1989,23:189
6 Hanel G G,Horban D J,Harding G K M.Postantibiotic effect:a review of in vitro and in vivo data.The Annals of Pharmacotherapy,1991,25:153
(1997年7月14日收稿), http://www.100md.com
单位：(葛洲坝集团公司中心医院 宜昌443002)
关键词：
中国医院药学杂志981106 应用抗生素后效应(Postantibiotic effect,PAE)可评价抗菌药的联合作用。氟喹诺酮类与氨基糖苷类在治疗感染时,常联合应用。为此,我们对环丙沙星(Ciprofloxacin,CPLX)和庆大霉素(Gentamicin,GTM)联用的PAE进行了研究,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料 抗菌药物:环丙沙星(上海第二制药厂,批号950602),庆大霉素(中国药品生物制品检定中心,批号3269112)。两种抗菌药均分别应用磷酸盐缓冲液配制成1 280 μg.ml-1的贮备液[1],冰箱保存备用。培养基:Mueller-Hinton肉汤培养基(MHB),由浙江军区后勤检验所提供,营养琼脂自配。菌种:临床分离的金葡菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌各7株。受试菌接种于MHB中,37 ℃过夜培养,用MHB将菌悬液稀释至107～108 cfu.ml-1[2],备用。
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1.2 方法
1.2.1 MIC的测定 采用微量稀释法[1]。
1.2.2 PAE的测定 按简易棋盘法设计环丙沙星与庆大霉素联合使用方案,采用微量接种菌落计数法测定PAE。
将CPLX、GTM的贮备液以灭菌MHB分别配制成5,10,20,40倍于受试菌各菌株的最低抑菌浓度(MIC)的应用液。菌悬液以MHB稀释至106～107 cfu.ml-1。对照组:取菌悬液0.5 ml加至MHB 4.5 ml的试管中。试验组:(1) 单独用药组:将各浓度的CPLX、GTM 0.5 ml分别加至MHB 4.0 ml的试管中,再加入菌液0.5 ml。(2) 联合用药组:按简易棋盘法组合,将各个浓度的CPLX、GTM 0.5 ml分别加至MHB 3.5 ml的试管中,再加入菌悬液0.5 ml。旋涡混匀,使各管CPLX、GTM的最终浓度分别为0.5,1,2,4 MIC,菌液浓度为105～106 cfu.ml-1。将上述各组试管置37 ℃培养箱内培养1 h。采用离心沉淀法[3]洗涤3次,于最后一次洗涤后取样计数,此时为去除药物零时。各管继续37 ℃培养,每隔1 h取样计数,直至培养液出现明显混浊为止。
, 百拇医药
以实验组与对照组的cfu.ml-1比去除药物零时增加10倍所需的时间之差计为PAE。联合PAE的判断标准为:联合用药PAE比单用药PAE之和延长1 h以上为协同作用;联合用药PAE与单用药PAE之和接近为相加作用;联合用药PAE与两种单用药PAE的最大值相近为无关作用;联合用药PAE小于两种单用药PAE的最小值为拮抗作用[4]。
2 结果
2.1 CPLX和GTM对三种致病菌的MICs见表1。
2.2 CPLX和GTM对三种致病菌的PAE及联合PAE见表2。
表 1 CPLX和GTM对三种致病菌的MICS(μg.ml-1) 细 菌(株数)
, 百拇医药
药 物
MICR
MICM
金葡菌(7)
CPLX
0.031 3～8
0.23
GTM
1～8
1.49
大肠埃希氏菌(7)
CPLX
, 百拇医药
0.016～16
0.15
GTM
0.125～128
9.75
铜绿假单胞菌(7)
CPLX
0.062 5～0.5
0.093
GTM
0.5～32
1.0
, 百拇医药 注:MICR:MIC范围, MICM:MIC几何均数表 2 CPLX、GTM对三种细菌的PAE及联用的PAE(h,n=7) 药
物
菌
种
药 物 浓 度
0.5 MIC
1 MIC
2 MIC
4 MIC
GTM
1
, http://www.100md.com
0.6±0.4
0.6±0.4
1.1±0.7
2.1±0.9
2
0.2±0.3
0.6±0.6
0.9±0.8
1.4±0.9
3
0.1±0.1
0.6±0.5
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1.2±0.8
CPLX
1
0.6±0.4
0.9±0.5
1.3±0.8
1.6±0.7
2
0.1±0.2
0.2±0.2
1.0±0.8
1.6±1.1
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3
0.2±0.2
0.3±0.4
0.6±0.5
1.7±0.8
GTM
与
CPLX
1
1.1±1.1(A)
1.5±1.2(A)
2.5±1.4(A)
, http://www.100md.com 3.31.4(A)
2
0.4±0.3(A)
0.9±0.5(A)
1.9±0.9(A)
2.9±1.4(A)
3
0.2±0.1(I)
0.6±0.4(I)
1.4±0.8(A)
2.7±0.9(A)
注:A.相加作用;I.无关作用;1.金葡菌;2.大肠埃希氏菌;3.铜绿假单胞菌3 讨论
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3.1 PAE可用来评价抗菌药物联合用药的合理性,例如,庆大霉素与青霉素、阿米卡星与哌拉西林等三种β-内酰胺类联合用药后的PAE均呈协同作用[5],CPLX与GTM常联用治疗感染。为评价此两药联用的合理性,我们对其联用PAE进行了研究。研究结果首次证实,联合应用CPLX与GTM对临床分离的三种共21株细菌的PAE具有相加作用。两药联用对金葡菌、大肠埃希氏菌的PAE在不同浓度下(0.5～4 MIC)均呈相加作用,而对铜绿假单胞菌在低浓度时,联合PAE虽有所延长,但呈无关作用。随着试验浓度的增大,亦呈相加作用。上述结果与两药联用的药敏试验结果一致,进一步证实了此两药联用的合理性。
3.2 本文研究表明,CPLX和GTM单独用药时,随着剂量的增加,PAE逐渐延长,呈剂量依赖性;两种药物联用的PAE也具有明显的剂量依赖性。可以认为联合应用此两药PAE的剂量依赖性与其单独用药的剂量依赖性一致。
3.3 文献报道,PAE值与细菌对抗菌药物的敏感性有关。多数耐药菌的PAE值明显低于正常菌株,甚至不出现PAE[6]。我们的实验结果显示,1株耐CPLX的金葡菌和1株耐GTM的铜绿假单胞菌及2株耐CPLX和1株耐GTM的大肠埃希氏菌,对不同浓度的试验药物均未产生明显的PAE。CPLX、GTM分别在2,4 MIC浓度下联合应用时,对此3株大肠埃希氏菌均出现PAE相加作用,CPLX和GTM对耐药金葡菌和耐药铜绿假单胞菌的联合PAE为无关作用。
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3.4 抗生素联用的PAE测定,与常用的联合药敏试验相比,不仅可以了解抗菌药物联用后的抗菌作用的变动情况,而且还可以反映抗菌药物的浓度、作用时间与抗菌效应之间的关系,有助于临床给药方案的设计。本试验结果表明,CPLX与GTM联合应用时抗菌作用增强,不仅为临床联合应用此两药提供了依据,也对制定治疗方案具有实际指导意义。
参考文献
1 娄永新,王金良主编.实用临床细菌学检验与进展.第1版.天津:天津科技翻译出版公司,1993:249
2 陈秀枢,李有武,孙长贵.体外抗菌素后效应的方法学及其对临床金黄色葡萄球菌的研究.临床检验杂志,1991,9(2):58
3 Renneberg J,Walder M.Postantibiotic effects of imipenem,norfloxacin,and amikacin in vitro and in vivo.Antimicrob Agents Chemother,1989,33(10):1714
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4 王 睿,刘 卫.氧氟沙星与哌拉西林单用或联合应用的抗生素后效应.中国抗生素杂志,1993,18(5):383
5 Winstanley T G,Hastings J G M.Penicillin-aminoglycoside synergy and post-antibiotic effect for enterococci.J Antimicrob Chemother,1989,23:189
6 Hanel G G,Horban D J,Harding G K M.Postantibiotic effect:a review of in vitro and in vivo data.The Annals of Pharmacotherapy,1991,25:153
(1997年7月14日收稿), http://www.100md.com