对乙酰氨基酚中毒快速检验——血清中对乙酰氨基酚薄层色谱扫描检测
作者：郑金平 王大利 刘力锋
单位：郑金平 (山西医科大学法医学系、卫生毒理教研室 太原030001)；王大利 (太原市公安局技术科) ；刘力锋 (中华医学会三门峡市分会)
关键词：对乙酰氨基酚；中毒；薄层色谱扫描；血清
中国医院药学杂志981115
克明 郑金平 王大利 刘力锋
摘要 目的:建立了血清中对乙酰氨基酚的提取和薄层色谱扫描定性和定量检测方法。方法:应用以上二种方法快速检测,并对2例可疑对乙酰氨基酚中毒者进行了检验。结果:血清中线性检测范围为2～64 μg.ml-1,最小检出浓度为1 μg.ml-1。一例口服10片泰克0.75～1 h血清对乙酰氨基酚含量为25.5 mg.L-1。一例白加黑过敏者血清中对乙酰氨基酚含量为8 mg.L-1。结论:本法快速、简便、定性定量准确,可用于对乙酰氨基酚中毒的快速诊断和体内药物浓度监测。
, 百拇医药
对乙酰氨基酚(Paracetamol,扑热息痛,醋氨酚,Acetaminophen,AAP)是临床常用的解热镇痛药。常用于感冒发热、关节痛、神经痛和偏头痛的治疗,有时会发生服药过量中毒或过敏[1]。需快速定性定量检测血中AAP。血中AAP的检测以分光光度法、UV法、GC法和HPLC法报道较多[2～5],但定性效果较差。本文从临床AAP中毒快速诊断需要出发,建立血清中对乙酰氨基酚的提取和薄层扫描定性定量检测方法,并应用AAP服药过量和白加黑过敏的诊断。
1 材料和方法
1.1 试剂和药品 对乙酰氨基酚对照品购自中国药品生物制品检定所,试剂均为分析纯。标准溶液:0.67,1 mg.ml-1对乙酰氨基酚对照品乙醇溶液,4 ℃冰箱保存。
1.2 主要仪器及检测条件 CS-930薄层扫描仪。光谱扫描:Difference扫描方式;色谱扫描:单波长锯齿形扫描,λ1为245 nm,λ2为310 nm,Sx=3,记录峰面积。
, 百拇医药
1.3 薄层层析条件 薄层板:HSGF25410×10 cm×0.25 mm;展开剂为正庚烷∶三氯甲烷∶无水乙醇∶乙酸乙醋∶乙酸(5∶2∶2∶1.5∶0.5),上行展开5～7 cm。
1.4 薄层扫描响应曲线和扫描精密度 对乙酰氨基酚0.67 mg.ml-1标准溶液点板,展开,扫描。建立的AAP薄层扫描响应曲线回归方程为Y=-668+12 420X,式中Y为斑点扫描面积积分值,X为斑点内AAP含量(μg/斑点)。线性响应范围为0.134～16.08 μg/斑点,r=0.999 5(P<0.05)。AAP(2.68 μg/斑点,5.36 μg/斑点和13.4 μg/斑点,n=5)的板内、板间、日内扫描精密度为2.6%～3.8%,3.7%～4.8%和4.4%～5.3%。
1.5 标本采集 中毒患者 取血3 ml立即送检,也可取第一遍洗胃液一同送检。
, 百拇医药
1.6 提取与检测 血清0.5 ml,加pH=6.8的磷酸盐缓冲液0.5 ml,用8 ml乙醚分二次萃取。同时取空白血清两份,分别加入AAP 10 μg和40 μg(1 mg.ml-1标准溶液),与检材平行萃取。萃取液40 ℃水浴氮气吹干,40 μl乙醇定容,10 μl点样,按前述方法展开。紫外灯下确定斑点位置,光谱扫描结合Rf值定性,色谱扫描外标两点法或工作曲线法定量。
1.7 工作曲线和提取回收率 空白血清10份,分别加入1 mg.ml-1 AAP标准溶液0.5,1,2,4,8,12,18,24,32,40 μl,按前述方法提取、展开和扫描,建立的血清AAP的标准曲线方程为:Y=-1.010 8+1.280 8×10-3X(r=0.998 2)。式中Y为检材内AAP含量(μg.ml-1),X为斑点扫描面积积分值。线性检测范围为2～64 μg.ml-1,最小检出浓度为1 μg.ml-1。工作曲线法定量,血清中AAP(5 μg/0.5 ml,10 μg/0.5 ml和20 μg/0.5 ml)的相对回收率为99.47±4.34%,97.5±3.63%和104.1±4.7%(
±s,n=5)。外标两点法测定斑点内AAP绝对含量,血清中AAP(5 μg/0.5 ml,10 μg/0.5 ml和20 μg/0.5 ml)的绝对回收率为86.2±2.8%,83.7±3.6%和78.9±3.9%(±s,n=5)。
, 百拇医药
2 结果与讨论
2.1 提取和薄层色谱 AAP 4 μg点板,展开,扫描。薄层层析图见图1,AAP Rf值为0.40。AAP光谱扫描图见图2,最大吸收波长为255 nm。色谱扫描图见图3,峰形对称,AAP与乙酰水杨酸(Rf=0.65)、双氯芬酸(Rf=0.88)和血液提取物中杂质分离完全。
图 1 AAP薄层层析图
1.AAP标准品 2.中毒患者血中AAP 3.空白血清中添加AAP A.AAP B.乙酰水杨酸 C.双氯芬酸
图 2 AAP光谱扫描图
1—— AAP标准品 2--- 中毒患者血中AAP
, 百拇医药
3—*— 空白血清添加AAP
图 3 AAP色谱扫描图
1.AAP标准品 2.中毒患者血提取物 A.AAP B.乙酰水杨酸 C.双氯芬酸
本文建立的AAP的提取和薄层扫描检测方法与文献[2～5]相比,具有操作简便快速、定性准确的特点。AAP色谱行为,斑点扫描精密度和线性扫描范围,检材内AAP提取检测线性范围、提取回收率、最小检出浓度均达到生物检材内药物检测和体内AAP浓度监测的要求[6],可用于AAP的体内浓度监测和AAP中毒的快速诊断。
2.2 病例检测 2例服药过量患者体内AAP
检测结果见表1。其斑点Rf值和光谱扫描图均与AAP一致(图1和图2)。一般认为,AAP的有效治疗血药浓度为10～20 μg.ml-1,血药浓度大于400 μg.ml-1时引起中毒[7]。病例1一次口服泰克10片,由于洗胃及时仅表现轻微消化道症状,血中AAP含量高于有效血药浓度上限,诊断为AAP轻度过量。病例2两天内服白加黑10片(白8片,黑2片),第3天卧床不起,听力丧失,背部红斑、水泡、表皮剥脱(水泡破裂),肾功衰竭,血中AAP浓度低于治疗浓度下限,可排除AAP过量,结合红斑、水泡和肾功衰竭的表现,诊断为白加黑过敏,抗过敏对症治疗痊愈出院。本方法全部定性定量检测可在1 h内完成,是服药过量中毒快速诊断的较好方法,也可协助AAP或白加黑过敏的诊断。
, 百拇医药
表 1 服药过量者体内AAP检出结果 病例
号
所服
药物
服药剂量
片
AAP量
g
采血时
间/h
血清AAP
浓度/mg.L-1
, 百拇医药
1
泰克
10
2.5
0.75～1
25.5
2
白加黑
10
3.25
3
8
注: 第3 d第3 h
, http://www.100md.com
作者单位：克明 郑金平 (山西医科大学法医学系、卫生毒理教研室 太原030001)
参考文献
1 皮东华,杨建新.白加黑感冒片过敏性休克1例.中国医院药学杂志,1997,17(6):284
2 周帮元,贾玉蓉,王炳南.10%扑热息痛注射液的药理及兔体内动力学研究.中国医院药学杂志,1987,7(2):49
3 史德懿,张南森,倪 岚.扑热息痛滴剂、酊剂和片剂在正常人的生物利用度.中国医院药学杂志,1992,12(8):345
4 Borin MT,Ayres JW.Single dose bioavailability of acetaminophon following oral administration.Int J Pharm,1989,54:199
5 谈恒山,殷振勇,蔡明红.反相高效液相色谱-电化学法研究对乙酰氨基酚生物利用度.中国医院药学杂志,1995,15(2):51
6 Lawren A.Bioanalytic consideration for pharmacokinetic and biopharmaceutic studies.J Clin Pharmacol,1986,26:332
7 M.cibald and D.perrier著.朱家壁译.药物动力学.第2版.北京:科学出版社,1982:452
(1997年12月29日收稿), 百拇医药
单位：郑金平 (山西医科大学法医学系、卫生毒理教研室 太原030001)；王大利 (太原市公安局技术科) ；刘力锋 (中华医学会三门峡市分会)
关键词：对乙酰氨基酚；中毒；薄层色谱扫描；血清
中国医院药学杂志981115
克明 郑金平 王大利 刘力锋摘要 目的:建立了血清中对乙酰氨基酚的提取和薄层色谱扫描定性和定量检测方法。方法:应用以上二种方法快速检测,并对2例可疑对乙酰氨基酚中毒者进行了检验。结果:血清中线性检测范围为2～64 μg.ml-1,最小检出浓度为1 μg.ml-1。一例口服10片泰克0.75～1 h血清对乙酰氨基酚含量为25.5 mg.L-1。一例白加黑过敏者血清中对乙酰氨基酚含量为8 mg.L-1。结论:本法快速、简便、定性定量准确,可用于对乙酰氨基酚中毒的快速诊断和体内药物浓度监测。
, 百拇医药
对乙酰氨基酚(Paracetamol,扑热息痛,醋氨酚,Acetaminophen,AAP)是临床常用的解热镇痛药。常用于感冒发热、关节痛、神经痛和偏头痛的治疗,有时会发生服药过量中毒或过敏[1]。需快速定性定量检测血中AAP。血中AAP的检测以分光光度法、UV法、GC法和HPLC法报道较多[2～5],但定性效果较差。本文从临床AAP中毒快速诊断需要出发,建立血清中对乙酰氨基酚的提取和薄层扫描定性定量检测方法,并应用AAP服药过量和白加黑过敏的诊断。
1 材料和方法
1.1 试剂和药品 对乙酰氨基酚对照品购自中国药品生物制品检定所,试剂均为分析纯。标准溶液:0.67,1 mg.ml-1对乙酰氨基酚对照品乙醇溶液,4 ℃冰箱保存。
1.2 主要仪器及检测条件 CS-930薄层扫描仪。光谱扫描:Difference扫描方式;色谱扫描:单波长锯齿形扫描,λ1为245 nm,λ2为310 nm,Sx=3,记录峰面积。
, 百拇医药
1.3 薄层层析条件 薄层板:HSGF25410×10 cm×0.25 mm;展开剂为正庚烷∶三氯甲烷∶无水乙醇∶乙酸乙醋∶乙酸(5∶2∶2∶1.5∶0.5),上行展开5～7 cm。
1.4 薄层扫描响应曲线和扫描精密度 对乙酰氨基酚0.67 mg.ml-1标准溶液点板,展开,扫描。建立的AAP薄层扫描响应曲线回归方程为Y=-668+12 420X,式中Y为斑点扫描面积积分值,X为斑点内AAP含量(μg/斑点)。线性响应范围为0.134～16.08 μg/斑点,r=0.999 5(P<0.05)。AAP(2.68 μg/斑点,5.36 μg/斑点和13.4 μg/斑点,n=5)的板内、板间、日内扫描精密度为2.6%～3.8%,3.7%～4.8%和4.4%～5.3%。
1.5 标本采集 中毒患者 取血3 ml立即送检,也可取第一遍洗胃液一同送检。
, 百拇医药
1.6 提取与检测 血清0.5 ml,加pH=6.8的磷酸盐缓冲液0.5 ml,用8 ml乙醚分二次萃取。同时取空白血清两份,分别加入AAP 10 μg和40 μg(1 mg.ml-1标准溶液),与检材平行萃取。萃取液40 ℃水浴氮气吹干,40 μl乙醇定容,10 μl点样,按前述方法展开。紫外灯下确定斑点位置,光谱扫描结合Rf值定性,色谱扫描外标两点法或工作曲线法定量。
1.7 工作曲线和提取回收率 空白血清10份,分别加入1 mg.ml-1 AAP标准溶液0.5,1,2,4,8,12,18,24,32,40 μl,按前述方法提取、展开和扫描,建立的血清AAP的标准曲线方程为:Y=-1.010 8+1.280 8×10-3X(r=0.998 2)。式中Y为检材内AAP含量(μg.ml-1),X为斑点扫描面积积分值。线性检测范围为2～64 μg.ml-1,最小检出浓度为1 μg.ml-1。工作曲线法定量,血清中AAP(5 μg/0.5 ml,10 μg/0.5 ml和20 μg/0.5 ml)的相对回收率为99.47±4.34%,97.5±3.63%和104.1±4.7%(
±s,n=5)。外标两点法测定斑点内AAP绝对含量,血清中AAP(5 μg/0.5 ml,10 μg/0.5 ml和20 μg/0.5 ml)的绝对回收率为86.2±2.8%,83.7±3.6%和78.9±3.9%(±s,n=5)。, 百拇医药
2 结果与讨论
2.1 提取和薄层色谱 AAP 4 μg点板,展开,扫描。薄层层析图见图1,AAP Rf值为0.40。AAP光谱扫描图见图2,最大吸收波长为255 nm。色谱扫描图见图3,峰形对称,AAP与乙酰水杨酸(Rf=0.65)、双氯芬酸(Rf=0.88)和血液提取物中杂质分离完全。
图 1 AAP薄层层析图
1.AAP标准品 2.中毒患者血中AAP 3.空白血清中添加AAP A.AAP B.乙酰水杨酸 C.双氯芬酸
图 2 AAP光谱扫描图
1—— AAP标准品 2--- 中毒患者血中AAP
, 百拇医药
3—*— 空白血清添加AAP
图 3 AAP色谱扫描图
1.AAP标准品 2.中毒患者血提取物 A.AAP B.乙酰水杨酸 C.双氯芬酸
本文建立的AAP的提取和薄层扫描检测方法与文献[2～5]相比,具有操作简便快速、定性准确的特点。AAP色谱行为,斑点扫描精密度和线性扫描范围,检材内AAP提取检测线性范围、提取回收率、最小检出浓度均达到生物检材内药物检测和体内AAP浓度监测的要求[6],可用于AAP的体内浓度监测和AAP中毒的快速诊断。
2.2 病例检测 2例服药过量患者体内AAP
检测结果见表1。其斑点Rf值和光谱扫描图均与AAP一致(图1和图2)。一般认为,AAP的有效治疗血药浓度为10～20 μg.ml-1,血药浓度大于400 μg.ml-1时引起中毒[7]。病例1一次口服泰克10片,由于洗胃及时仅表现轻微消化道症状,血中AAP含量高于有效血药浓度上限,诊断为AAP轻度过量。病例2两天内服白加黑10片(白8片,黑2片),第3天卧床不起,听力丧失,背部红斑、水泡、表皮剥脱(水泡破裂),肾功衰竭,血中AAP浓度低于治疗浓度下限,可排除AAP过量,结合红斑、水泡和肾功衰竭的表现,诊断为白加黑过敏,抗过敏对症治疗痊愈出院。本方法全部定性定量检测可在1 h内完成,是服药过量中毒快速诊断的较好方法,也可协助AAP或白加黑过敏的诊断。
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表 1 服药过量者体内AAP检出结果 病例
号
所服
药物
服药剂量
片
AAP量
g
采血时
间/h
血清AAP
浓度/mg.L-1
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1
泰克
10
2.5
0.75～1
25.5
2
白加黑
10
3.25
3
8
注: 第3 d第3 h
, http://www.100md.com
作者单位：
克明 郑金平 (山西医科大学法医学系、卫生毒理教研室 太原030001)参考文献
1 皮东华,杨建新.白加黑感冒片过敏性休克1例.中国医院药学杂志,1997,17(6):284
2 周帮元,贾玉蓉,王炳南.10%扑热息痛注射液的药理及兔体内动力学研究.中国医院药学杂志,1987,7(2):49
3 史德懿,张南森,倪 岚.扑热息痛滴剂、酊剂和片剂在正常人的生物利用度.中国医院药学杂志,1992,12(8):345
4 Borin MT,Ayres JW.Single dose bioavailability of acetaminophon following oral administration.Int J Pharm,1989,54:199
5 谈恒山,殷振勇,蔡明红.反相高效液相色谱-电化学法研究对乙酰氨基酚生物利用度.中国医院药学杂志,1995,15(2):51
6 Lawren A.Bioanalytic consideration for pharmacokinetic and biopharmaceutic studies.J Clin Pharmacol,1986,26:332
7 M.cibald and D.perrier著.朱家壁译.药物动力学.第2版.北京:科学出版社,1982:452
(1997年12月29日收稿), 百拇医药