甲型肝炎病毒感染者外周血T淋巴细胞亚群的变化研究
作者：刘近春 王勤英
单位：刘近春(山西医科大学第一医院 030001)；王勤英(山西医科大学第一医院 030001)
关键词：
山西医药杂志000333 近年来的研究表明，甲型肝炎病毒(HAV)感染后，肝细胞的损伤并非病毒对肝细胞的直接溶解、破坏所致，而是由机体对受感染的肝细胞的免疫应答所引起。本文应用抗人T淋巴细胞单克隆抗体，对30例HAV感染者外周血T淋巴细胞亚群进行了分析检测，现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
甲型肝炎患者30例，病程4～16周，为山西医科大学第一医院传染病科、太原市传染病院1997年11月至1998年4月期间的住院病人。诊断标准符合1990年全国病毒性肝炎学术会议修订的诊断方案，病人分别于急性期及肝功能恢复期采用外周血测T细胞亚群。急性期患者全部经抗HAV-IgM检测均为阳性；各项肝功能指标均明显异常，HBV检测均为阴性，恢复期以各项肝功能指标正常、临床症状消失为准。正常对照组年龄、性别与病人相近，均系山西省财经学院部分体检师生。全部经过HAV、HBV血清抗原、抗体检测，均为阴性。
, 百拇医药
1.2 主要试剂
1.2.1 抗人T淋巴细胞单克隆抗体致敏的红细胞花环冻干试剂CD6、CD4、CD8及阳性对照，购自武汉生物制品研究所。
1.2.2 抗HAV-IgM ELISA试剂盒以及HBsAg、抗HBc、HBeAg、抗HBe、抗HBc-IgM ELISA试剂盒均购自北京医科大学肝病研究所。
1.3 检测方法
1.3.1 外周血单个核细胞的分离：F：COU-HgPaue密度梯度离心分离单个核细胞，经Ca2+、Mg2+Hank′s液反复洗涤3次后，去除黏附细胞，经20%小牛血清Hank′s液调节细胞浓度至5×109细胞/L。
1.3.2 外周血T淋巴细胞的亚群的测定：用无菌的Hank′s液将冻干的花环试剂溶解并分装(1个月之内用完)。将上述细胞悬液50 μL/孔置于反应板中，分别取等量的CD3、CD4、CD8以及阳性对照红细胞悬液与反应板孔中的细胞悬液混合，500 r/min，10 min，室温下继续放置1 h，然后4 ℃过夜。次日将悬浮细胞悬液Giemsa染色1 min后，高倍镜下镜检，以细胞周围黏附3个或3个以上细胞者为阳性，共计数200个淋巴细胞。
, 百拇医药
1.4 统计学处理
采用t检验对急性期和恢复期患者外周血T细胞亚群CD3、CD4、CD8进行处理。
2 结 果
2.1 急性期与恢复期比较：CD3、CD4、CD8以及CD4/CD8比值均显著升高(P<0.05)见表1。
表1 HAV感染患者外周血T淋巴细胞亚群测定结果(
±s) 分组
例数
外周血T淋巴细胞亚群 %
CD3
CD4
, http://www.100md.com
CD8
CD4/CD8
急性期
30
75.4±6.51)
54.2±1.81)
31.2±1.41)
1.4±1.21)
恢复期
30
67.2±1.7
, http://www.100md.com
46.9±3.1
35.4±1.2
1.3±2.5
正常对照
30
75.4±6.5
54.2±1.8
31.2±1.4
1.4±1.2
1) 分别与恢复期和正常对照组比较P<0.05。
2.2 恢复期与正常对照组比较：CD3、CD4、CD8及CD4/CD8比值差异均无显著性(P<0.05)，见表1。
, 百拇医药
3 讨 论
近年来，国内外虽然对HAV的各种生物学特性研究较多。但对HAV感染后肝细胞的损伤机制认识并不多。一些研究认为，HAV的体外细胞培养并不对细胞产生病变[1]，肝细胞的病理损伤、病毒抗体几乎同时存在，并伴有排毒量减少，但粪便中的排毒早于酶值的升高[2]，这些证据提示HAV感染后，肝细胞的损伤主要是病理免疫的结果。此外有资料证明，在HAV原发感染中诱导产生的干扰素及具有自然杀伤活力的细胞在感染的控制方面发挥重要作用[3，4]。这些研究均支持HAV感染后肝细胞的损伤主要是机体对受感染肝细胞的免疫应答的结果。
本文对30例HAV感染者外周血淋巴细胞亚群分期检测的结果表明，急性期伴有较严重的细胞免疫功能紊乱，表现为CD3、CD4、CD8以及CD4/CD8比值的显著升高。作为宿主对病毒感染的肝细胞的细胞免疫应答结果，CD3细胞的增多，反映了机体细胞免疫功能的增强，对控制感染有一定作用。而显著的CD4细胞的增高，虽然主要是辅助性T细胞的增高，它在辅助B细胞使之产生中和抗体以及提高诱导T细胞活化、加强其杀伤能力方面起积极作用。CD4细胞的增高，主要是细胞毒性T细胞，它通过识别病毒感染性抗原，在清除病毒的同时也不可避免地造成肝细胞的一过性损伤。
, http://www.100md.com
本文对恢复期患者外周血CD3、CD4、CD8以及CD4/CD8比值与正常对照组进行比较，未发现有统计学差异。这表明HAV感染后，肝细胞损伤是一过性的，随着机体的免疫应答对病毒性抗原的不断清除，肝细胞的损伤亦趋于减弱，紊乱的细胞免疫功能状态也渐恢复正常，T细胞亚群的改变可帮助我们了解HAV感染的临床过程以及预后、转归。总之，本文的结果亦证明甲型肝炎病毒感染时，机体的免疫系统在清除病毒、控制感染的同时亦参与了肝细胞的损伤。
作者简介：刘近春，女，1962年1月生，副主任医师，山西医科大学第一医院，030001
参考文献
1，黄贞祥，主编.病毒性肝炎研究进展.北京：北京科技出版社，1986.1-8
2，胡孟冬.甲型肝炎病毒的研究进展.国外医学流行病学传染病学分册，1988，4：145-148
3，Zachoval R,Abb J,Zachoval V,et al.Circulating interferon in patients with acute hepatitis A.J Infect Dis,1986,153(6):1174-1175
4，Maier K,Vallbracht A,Gabriel P,et al.Cell-mediated cytotoxicity in hepatitis a virus infection.Hepatology,1986,6(6):1308-1314
(收稿日期：2000-03-21), http://www.100md.com
单位：刘近春(山西医科大学第一医院 030001)；王勤英(山西医科大学第一医院 030001)
关键词：
山西医药杂志000333 近年来的研究表明，甲型肝炎病毒(HAV)感染后，肝细胞的损伤并非病毒对肝细胞的直接溶解、破坏所致，而是由机体对受感染的肝细胞的免疫应答所引起。本文应用抗人T淋巴细胞单克隆抗体，对30例HAV感染者外周血T淋巴细胞亚群进行了分析检测，现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
甲型肝炎患者30例，病程4～16周，为山西医科大学第一医院传染病科、太原市传染病院1997年11月至1998年4月期间的住院病人。诊断标准符合1990年全国病毒性肝炎学术会议修订的诊断方案，病人分别于急性期及肝功能恢复期采用外周血测T细胞亚群。急性期患者全部经抗HAV-IgM检测均为阳性；各项肝功能指标均明显异常，HBV检测均为阴性，恢复期以各项肝功能指标正常、临床症状消失为准。正常对照组年龄、性别与病人相近，均系山西省财经学院部分体检师生。全部经过HAV、HBV血清抗原、抗体检测，均为阴性。
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1.2 主要试剂
1.2.1 抗人T淋巴细胞单克隆抗体致敏的红细胞花环冻干试剂CD6、CD4、CD8及阳性对照，购自武汉生物制品研究所。
1.2.2 抗HAV-IgM ELISA试剂盒以及HBsAg、抗HBc、HBeAg、抗HBe、抗HBc-IgM ELISA试剂盒均购自北京医科大学肝病研究所。
1.3 检测方法
1.3.1 外周血单个核细胞的分离：F：COU-HgPaue密度梯度离心分离单个核细胞，经Ca2+、Mg2+Hank′s液反复洗涤3次后，去除黏附细胞，经20%小牛血清Hank′s液调节细胞浓度至5×109细胞/L。
1.3.2 外周血T淋巴细胞的亚群的测定：用无菌的Hank′s液将冻干的花环试剂溶解并分装(1个月之内用完)。将上述细胞悬液50 μL/孔置于反应板中，分别取等量的CD3、CD4、CD8以及阳性对照红细胞悬液与反应板孔中的细胞悬液混合，500 r/min，10 min，室温下继续放置1 h，然后4 ℃过夜。次日将悬浮细胞悬液Giemsa染色1 min后，高倍镜下镜检，以细胞周围黏附3个或3个以上细胞者为阳性，共计数200个淋巴细胞。
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1.4 统计学处理
采用t检验对急性期和恢复期患者外周血T细胞亚群CD3、CD4、CD8进行处理。
2 结 果
2.1 急性期与恢复期比较：CD3、CD4、CD8以及CD4/CD8比值均显著升高(P<0.05)见表1。
表1 HAV感染患者外周血T淋巴细胞亚群测定结果(
±s) 分组例数
外周血T淋巴细胞亚群 %
CD3
CD4
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CD8
CD4/CD8
急性期
30
75.4±6.51)
54.2±1.81)
31.2±1.41)
1.4±1.21)
恢复期
30
67.2±1.7
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46.9±3.1
35.4±1.2
1.3±2.5
正常对照
30
75.4±6.5
54.2±1.8
31.2±1.4
1.4±1.2
1) 分别与恢复期和正常对照组比较P<0.05。
2.2 恢复期与正常对照组比较：CD3、CD4、CD8及CD4/CD8比值差异均无显著性(P<0.05)，见表1。
, 百拇医药
3 讨 论
近年来，国内外虽然对HAV的各种生物学特性研究较多。但对HAV感染后肝细胞的损伤机制认识并不多。一些研究认为，HAV的体外细胞培养并不对细胞产生病变[1]，肝细胞的病理损伤、病毒抗体几乎同时存在，并伴有排毒量减少，但粪便中的排毒早于酶值的升高[2]，这些证据提示HAV感染后，肝细胞的损伤主要是病理免疫的结果。此外有资料证明，在HAV原发感染中诱导产生的干扰素及具有自然杀伤活力的细胞在感染的控制方面发挥重要作用[3，4]。这些研究均支持HAV感染后肝细胞的损伤主要是机体对受感染肝细胞的免疫应答的结果。
本文对30例HAV感染者外周血淋巴细胞亚群分期检测的结果表明，急性期伴有较严重的细胞免疫功能紊乱，表现为CD3、CD4、CD8以及CD4/CD8比值的显著升高。作为宿主对病毒感染的肝细胞的细胞免疫应答结果，CD3细胞的增多，反映了机体细胞免疫功能的增强，对控制感染有一定作用。而显著的CD4细胞的增高，虽然主要是辅助性T细胞的增高，它在辅助B细胞使之产生中和抗体以及提高诱导T细胞活化、加强其杀伤能力方面起积极作用。CD4细胞的增高，主要是细胞毒性T细胞，它通过识别病毒感染性抗原，在清除病毒的同时也不可避免地造成肝细胞的一过性损伤。
, http://www.100md.com
本文对恢复期患者外周血CD3、CD4、CD8以及CD4/CD8比值与正常对照组进行比较，未发现有统计学差异。这表明HAV感染后，肝细胞损伤是一过性的，随着机体的免疫应答对病毒性抗原的不断清除，肝细胞的损伤亦趋于减弱，紊乱的细胞免疫功能状态也渐恢复正常，T细胞亚群的改变可帮助我们了解HAV感染的临床过程以及预后、转归。总之，本文的结果亦证明甲型肝炎病毒感染时，机体的免疫系统在清除病毒、控制感染的同时亦参与了肝细胞的损伤。
作者简介：刘近春，女，1962年1月生，副主任医师，山西医科大学第一医院，030001
参考文献
1，黄贞祥，主编.病毒性肝炎研究进展.北京：北京科技出版社，1986.1-8
2，胡孟冬.甲型肝炎病毒的研究进展.国外医学流行病学传染病学分册，1988，4：145-148
3，Zachoval R,Abb J,Zachoval V,et al.Circulating interferon in patients with acute hepatitis A.J Infect Dis,1986,153(6):1174-1175
4，Maier K,Vallbracht A,Gabriel P,et al.Cell-mediated cytotoxicity in hepatitis a virus infection.Hepatology,1986,6(6):1308-1314
(收稿日期：2000-03-21), http://www.100md.com