云南白族系统性红斑狼疮与HLA-DR、DQ相关性的研究
作者：李峰 冒长峙 邵剑春 李学平 安肇璋 邓丹琪 胡大春 周晓鸿
单位：李峰 冒长峙 李学平 邓丹琪 周晓鸿 650101昆明医学院附属第二医院皮肤科；邵剑春 安肇璋 胡大春 昆明市第一人民医院检查科
关键词：
中华医学遗传学杂志990623
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的发病机理极为复杂。近年来研究表明，遗传因素在SLE的发病中起决定性的作用。HLA是迄今发现的最具多态性的遗传系统，它具有地区、种族、民族等的差异，其中HLA-DQ、DR等位基因的多态性与SLE易感性是近几年研究的热点。我们运用单克隆抗体微量淋巴毒试验(monoclonal antibodies microcytotoxicity assay)[1]，探讨云南白族SLE与HLA-DR、DQ的相关性。为进一步探讨SLE免疫学的发病机理提供重要的线索。
, 百拇医药
1 病例及方法
1.1 病例和对照 云南白族SLE患者30例，其中男3例，女27例，年龄18～56岁，平均33岁。所有SLE患者符合美国风湿病(1982)诊断标准。云南正常健康白族人30名，其中男4人，女26人，年龄18～53岁，平均33岁。白族SLE患者和白族正常健康人3代均为云南白族。所有SLE患者及正常健康人之间均无血缘关系。
1.2 单克隆抗体-微量淋巴毒试验
1.2.1 单克隆抗体-微量淋巴毒试验，单克隆抗体Ⅱ类干板(Lambda Monoclonal Dry TraymTM)，可确定的亚型有DR1、DR103、DR2、DR16、DR17、DR3、DR18、DR4、DR402、DR404、DR11、DR12、DR1301、DR1302、DR1303、DR1304、DR1305、DR1401-1410、DR7、DR8、DR9、DR10；DR51、DR52、DR53；DQ1、DQ6、DQ5、DQ7、DQ3(8、9)、DQ2、DQ4。
, 百拇医药
1.2.2 实验步骤 取静脉血10ml，加肝素1000U抗凝，分离淋巴细胞后，用尼龙棉方法分离B淋巴细胞，HLA-Ⅱ类单克李峰、冒长峙、李学平、邓丹琪、周晓鸿
1.3 统计方法 抗原频率(Af)为阳性抗原数除以检测例数，计算基因频率
Fisher精确概率法计算卡方值和P值，采用Bonferroni法校正P值(Pc)[2]，即：P值乘以试验系统所检测的抗原阳性数。用Woof或Haldane法计算RR并进行显著性检验[2]。显著性检验水平为α=0.05。
2 结果
白族HLA-DR、DQ多态性与SLE易感性的关系，60例分别进行Hardy-Weinberg拟合优度检验[2]，P>0.05。见表1，白族SLE患者DR15(2)抗原频率、基因频率(Af 66.66%,Gf 42.25%)明显高于正常人(Af 6.66%,Gf 3.38%)(Pc<0.001);DR11(5)抗原频率、基因频率(Af 6.66%，Gf3.33%)低于正常人(Af 53.33%,Gf31.68%),有非常显著性差异(Pc<0.005)；SLE患者DR4基因频率明显低于对照组(Pc<0.05)，DQ6(1)的抗原频率、基因频率(Af 66.66%,Gf42.25%)高于正常人(Af16.66%,Gf8.69%)，有显著性差异(Pc<0.005)；SLE患者DQ7(3)抗原频率、基因频率(Af16.66%,Gf8.69%)与正常人(Af76.66%,Gf51.68%)比较有显著性差异(Pc<0.05)。
, 百拇医药
表1 白族SLE患者与正常人HLA-DR、DQ的抗原频率和基因频率的分布 亚型
SLE组(30例)
对照组(30例)
阳性
抗原频率(Af)
基因频率(Gf)
阳性
抗原频率(Af)
基因频率(Gf)
DR1
3
0.1000
, http://www.100md.com
0.0513
3
0.1000
0.0513
DR2
2
0.0666
0.0338
2
0.0666
0.0338
DR15
20
, 百拇医药
0.6666
0.4225
2
0.0666
0.03381
DR16
DR3
2
0.0666
0.0338
1
0.0333
0.0167
, 百拇医药
DR18
8
0.2666
0.1436
6
0.2000
0.1055
DR4
2
0.0666
0.0338
12
0.4000
, 百拇医药
0.22542
DR11
2
0.0666
0.0338
16
0.5333
0.31683
DR12
1
0.0333
0.0167
, 百拇医药
5
0.1666
0.0869
DR6
1
0.0333
0.0167
1
0.0333
0.0167
DR7
6
0.2000
, http://www.100md.com
0.1055
5
0.1666
0.0869
DR8
3
0.1000
0.0513
4
0.1333
0.0690
DR9
10
, http://www.100md.com
0.3333
0.1834
10
0.1333
0.0690
DR10
1
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DQ1
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0
0.0000
0.0000
3
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0.0513
DQ5
5
0.1666
0.0869
3
0.1000
0.0513
, http://www.100md.com
DQ6
20
0.7000
0.4522
5
0.1666
0.08694
DQ2
12
0.4000
0.2254
10
0.3333
, 百拇医药
0.1834
DQ3
3
0.1000
0.0513
3
0.1000
0.0513
DQ7
5
0.1666
0.0869
23
, 百拇医药
0.7666
0.51685
DQ4
13
0.4333
0.2472
16
0.5333
0.3168
1:χ2=25.45，Pc=0.001，RR=12.33；2:χ2=9.32，RR=0.1071；3:χ2=15.56，Pc=0.0018，RR=10.01；4:χ2=15.54，Pc=0.0025，RR=10.0；5:χ2=11.91，Pc=0.0168，RR=0.1478
, 百拇医药
3 讨论
近年来国内外许多学者研究表明，SLE与HLA-DR、DQ的相关性存在着种族和人群的差异。Reveille等[3]用血清学方法发现西欧白种人SLE与HLA-DR3相关，而中欧白种人、中国人、日本人及美国黑人与HLA-DR2相关。Arnertt等报道西欧白人SLE患者HLA-DR2和DR3表型频率增高，Hawkins等[4]对100例中国人系统性红斑狼疮患者进行HLA分型，HLA-DR2表型频率显著增高。孔繁华等[5]报道北方汉族SLE患者与HLA-DR2相关，Doherty等[6]报道华人SLE患者DRW15及DQW4频率显著增高，香港华人SLE患者DR2增高[7]，与本文白族SLE的HLA-DR15(2)频率增高结果一致。云南白族的SLE与DR15、DQ6(1)呈正相关，与DR11、DQ7(3)呈负相关。云南白族DQ6(1)(主要由DQAl*0102-DQB1*0610或*0602编码)抗原频率显著升高，而DQ7(3)(DQAl*0601-DQB1*0301编码)的抗原频率显著降低。孟炜等[8]报道中国南方汉族SLE患者的易感基因为DQA1*0102,保护基因为DQAl*0501、*0601以及潘星华和张咸宁等[9，10]报道中国人的易感基因为DQA1*0102、*0401，DQB1*0601，保护基因为DQAl*0501、*0601，DQB1*0301与我们报告的结果部分一致。综合国外部分资料白种人与DQA1*0501、DQAl*0201(英国)、DQAl*0401(美国)相关，黑人与DQAl*0401、0501相关。白人和黑人的易感基因在华人中为保护基因，白人和黑人DR3与DQAl*0501连锁，且其SLE的DR3基因频率升高。国内外众多研究资料表明DR、DQ与SLE的相关性存在种族和地区的差异。我们的研究结果亦证明这种差异的存在。
, 百拇医药
*现在200040上海华山医院皮肤科
参考文献
1 Takemoto S,Terasaki P.A review of HLA residue matching.ASHI Quarterly,1995,19(1):7-11.
2 赵桐茂主编.HLA的分型原理和运用.第1版，上海：科学与技术出版社，1982.155-157.
3 Reveille JD,Moulds JM,Arnett C.Major histocompatibility complex class Ⅱ and C4 alleles in Mexican Americans with systemic lupus erythematosus.Tissue Antigen,1995,45(2)∶91-97.
, 百拇医药
4 Hawkins BR,Wong RW.Strong association between the major histocompatibility complex and systemic lupus erythematosus in southern Chinese.J Rheumatol,1987,14(3)∶1128-1130.
5 孔繁华，施桂英，叶根耀，等.SLE与HLA抗原相关联研究.上海免疫学杂志，1992，12(1)∶50-51.
6 Doherty DG,Irenland A,Demaine AG,et al.Major histocompatibility complex and susceptibility to systemic lupus erythematosus in southern Chinese.Athritis Rheum,1992,35(6)∶641-643.
, http://www.100md.com
7 Wang KL,Hawkins BR,Wang RW.Immunogenetics in Chinese patients with SLE.Scand J Rheumtol,1991,20(2)∶110-115.
8 孟炜，沈福民，秦万章，等.中国南方汉族人群HLA-DQA1位点多态性与系统性红斑狼疮易感性分析.中华医学遗传学杂志，1994，11(6)∶325-328.
9 潘星华，陆建荣，猪子英俊.中国汉人HLA-DQA1基因对系统性红斑狼疮的遗传易感性研究.中华免疫学杂志，1995，11(1)∶19-22.
10 张咸宁，潘星华，朱定良，等.中国南方汉族人群HLA-DQB1基因对系统性红斑狼疮的易感性研究.中国免疫学杂志，1997，13(1)∶37-39.
(收稿：1999-04-20 修回：1999-07-07), http://www.100md.com
单位：李峰 冒长峙 李学平 邓丹琪 周晓鸿 650101昆明医学院附属第二医院皮肤科；邵剑春 安肇璋 胡大春 昆明市第一人民医院检查科
关键词：
中华医学遗传学杂志990623
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的发病机理极为复杂。近年来研究表明，遗传因素在SLE的发病中起决定性的作用。HLA是迄今发现的最具多态性的遗传系统，它具有地区、种族、民族等的差异，其中HLA-DQ、DR等位基因的多态性与SLE易感性是近几年研究的热点。我们运用单克隆抗体微量淋巴毒试验(monoclonal antibodies microcytotoxicity assay)[1]，探讨云南白族SLE与HLA-DR、DQ的相关性。为进一步探讨SLE免疫学的发病机理提供重要的线索。
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1 病例及方法
1.1 病例和对照 云南白族SLE患者30例，其中男3例，女27例，年龄18～56岁，平均33岁。所有SLE患者符合美国风湿病(1982)诊断标准。云南正常健康白族人30名，其中男4人，女26人，年龄18～53岁，平均33岁。白族SLE患者和白族正常健康人3代均为云南白族。所有SLE患者及正常健康人之间均无血缘关系。
1.2 单克隆抗体-微量淋巴毒试验
1.2.1 单克隆抗体-微量淋巴毒试验，单克隆抗体Ⅱ类干板(Lambda Monoclonal Dry TraymTM)，可确定的亚型有DR1、DR103、DR2、DR16、DR17、DR3、DR18、DR4、DR402、DR404、DR11、DR12、DR1301、DR1302、DR1303、DR1304、DR1305、DR1401-1410、DR7、DR8、DR9、DR10；DR51、DR52、DR53；DQ1、DQ6、DQ5、DQ7、DQ3(8、9)、DQ2、DQ4。
, 百拇医药
1.2.2 实验步骤 取静脉血10ml，加肝素1000U抗凝，分离淋巴细胞后，用尼龙棉方法分离B淋巴细胞，HLA-Ⅱ类单克李峰、冒长峙、李学平、邓丹琪、周晓鸿
1.3 统计方法 抗原频率(Af)为阳性抗原数除以检测例数，计算基因频率
Fisher精确概率法计算卡方值和P值，采用Bonferroni法校正P值(Pc)[2]，即：P值乘以试验系统所检测的抗原阳性数。用Woof或Haldane法计算RR并进行显著性检验[2]。显著性检验水平为α=0.05。2 结果
白族HLA-DR、DQ多态性与SLE易感性的关系，60例分别进行Hardy-Weinberg拟合优度检验[2]，P>0.05。见表1，白族SLE患者DR15(2)抗原频率、基因频率(Af 66.66%,Gf 42.25%)明显高于正常人(Af 6.66%,Gf 3.38%)(Pc<0.001);DR11(5)抗原频率、基因频率(Af 6.66%，Gf3.33%)低于正常人(Af 53.33%,Gf31.68%),有非常显著性差异(Pc<0.005)；SLE患者DR4基因频率明显低于对照组(Pc<0.05)，DQ6(1)的抗原频率、基因频率(Af 66.66%,Gf42.25%)高于正常人(Af16.66%,Gf8.69%)，有显著性差异(Pc<0.005)；SLE患者DQ7(3)抗原频率、基因频率(Af16.66%,Gf8.69%)与正常人(Af76.66%,Gf51.68%)比较有显著性差异(Pc<0.05)。
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表1 白族SLE患者与正常人HLA-DR、DQ的抗原频率和基因频率的分布 亚型
SLE组(30例)
对照组(30例)
阳性
抗原频率(Af)
基因频率(Gf)
阳性
抗原频率(Af)
基因频率(Gf)
DR1
3
0.1000
, http://www.100md.com
0.0513
3
0.1000
0.0513
DR2
2
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0.0338
2
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DR15
20
, 百拇医药
0.6666
0.4225
2
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DR16
DR3
2
0.0666
0.0338
1
0.0333
0.0167
, 百拇医药
DR18
8
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0.1055
DR4
2
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0.0338
12
0.4000
, 百拇医药
0.22542
DR11
2
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0.0338
16
0.5333
0.31683
DR12
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0.0167
, 百拇医药
5
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DR6
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1
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DR8
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DR9
10
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DR10
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DQ1
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DQ5
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DQ6
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10
0.3333
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DQ3
3
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3
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DQ7
5
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3 讨论
近年来国内外许多学者研究表明，SLE与HLA-DR、DQ的相关性存在着种族和人群的差异。Reveille等[3]用血清学方法发现西欧白种人SLE与HLA-DR3相关，而中欧白种人、中国人、日本人及美国黑人与HLA-DR2相关。Arnertt等报道西欧白人SLE患者HLA-DR2和DR3表型频率增高，Hawkins等[4]对100例中国人系统性红斑狼疮患者进行HLA分型，HLA-DR2表型频率显著增高。孔繁华等[5]报道北方汉族SLE患者与HLA-DR2相关，Doherty等[6]报道华人SLE患者DRW15及DQW4频率显著增高，香港华人SLE患者DR2增高[7]，与本文白族SLE的HLA-DR15(2)频率增高结果一致。云南白族的SLE与DR15、DQ6(1)呈正相关，与DR11、DQ7(3)呈负相关。云南白族DQ6(1)(主要由DQAl*0102-DQB1*0610或*0602编码)抗原频率显著升高，而DQ7(3)(DQAl*0601-DQB1*0301编码)的抗原频率显著降低。孟炜等[8]报道中国南方汉族SLE患者的易感基因为DQA1*0102,保护基因为DQAl*0501、*0601以及潘星华和张咸宁等[9，10]报道中国人的易感基因为DQA1*0102、*0401，DQB1*0601，保护基因为DQAl*0501、*0601，DQB1*0301与我们报告的结果部分一致。综合国外部分资料白种人与DQA1*0501、DQAl*0201(英国)、DQAl*0401(美国)相关，黑人与DQAl*0401、0501相关。白人和黑人的易感基因在华人中为保护基因，白人和黑人DR3与DQAl*0501连锁，且其SLE的DR3基因频率升高。国内外众多研究资料表明DR、DQ与SLE的相关性存在种族和地区的差异。我们的研究结果亦证明这种差异的存在。
, 百拇医药
*现在200040上海华山医院皮肤科
参考文献
1 Takemoto S,Terasaki P.A review of HLA residue matching.ASHI Quarterly,1995,19(1):7-11.
2 赵桐茂主编.HLA的分型原理和运用.第1版，上海：科学与技术出版社，1982.155-157.
3 Reveille JD,Moulds JM,Arnett C.Major histocompatibility complex class Ⅱ and C4 alleles in Mexican Americans with systemic lupus erythematosus.Tissue Antigen,1995,45(2)∶91-97.
, 百拇医药
4 Hawkins BR,Wong RW.Strong association between the major histocompatibility complex and systemic lupus erythematosus in southern Chinese.J Rheumatol,1987,14(3)∶1128-1130.
5 孔繁华，施桂英，叶根耀，等.SLE与HLA抗原相关联研究.上海免疫学杂志，1992，12(1)∶50-51.
6 Doherty DG,Irenland A,Demaine AG,et al.Major histocompatibility complex and susceptibility to systemic lupus erythematosus in southern Chinese.Athritis Rheum,1992,35(6)∶641-643.
, http://www.100md.com
7 Wang KL,Hawkins BR,Wang RW.Immunogenetics in Chinese patients with SLE.Scand J Rheumtol,1991,20(2)∶110-115.
8 孟炜，沈福民，秦万章，等.中国南方汉族人群HLA-DQA1位点多态性与系统性红斑狼疮易感性分析.中华医学遗传学杂志，1994，11(6)∶325-328.
9 潘星华，陆建荣，猪子英俊.中国汉人HLA-DQA1基因对系统性红斑狼疮的遗传易感性研究.中华免疫学杂志，1995，11(1)∶19-22.
10 张咸宁，潘星华，朱定良，等.中国南方汉族人群HLA-DQB1基因对系统性红斑狼疮的易感性研究.中国免疫学杂志，1997，13(1)∶37-39.
(收稿：1999-04-20 修回：1999-07-07), http://www.100md.com