CHAK：一种新型的免疫杀伤细胞CHAK：A NEW KIND OF KILLER CELL
作者：成 军 杨守纯*7{)1e?, 百拇医药
单位：解放军302医院传染病研究所基因治疗研究中心 北京 100039*7{)1e?, 百拇医药
关键词：趋化因子 趋化因子激活的杀伤细胞 免疫调节 免疫治疗*7{)1e?, 百拇医药
免疫学杂志990422摘 要 趋化因子分为CXC、CC、C和CX3C 4种。CC趋化因子可以诱导具有免疫杀伤活性的效应细胞，称为CHAK。CHAK的诱导与激活过程，与趋化因子受体介导的一系列信号转导过程有关。CHAK细胞作为一种新型的免疫杀伤细胞，在免疫调节、抗肿瘤免疫治疗中可能具有广阔的应用前景。*7{)1e?, 百拇医药
趋化因子(chemokine)是由一系列分子量为8～10KDa、蛋白质一级结构同源性在20%～90%之间、对各种炎症细胞具有趋化作用的细胞因子组成的一个超家族[1]。在炎症过程中，趋化因子的主要功能就是选择性趋化和激活炎性细胞，引导其准确到达炎症发生位点，并发挥其生物学作用[2]。近年来的研究表明：某些类型的趋化因子还能够诱导杀伤细胞的活性。与淋巴细胞激活的杀伤(LAK)细胞相对应，Maghazachi等[3]形象地将趋化因子激活的杀伤细胞称为CHAK(Chemokine-activated killer)。CHAK细胞将在抗肿瘤、抗病毒免疫中发挥重要作用，已成为一种新型的免疫杀伤细胞。*7{)1e?, 百拇医药
1 诱导CHAK细胞的趋化因子种类*7{)1e?, 百拇医药
在趋化因子的蛋白质一级结构中，有4个位点上的半胱氨酸残基是高度保守的，根据趋化因子一级结构中半胱氨酸残基的位点及其周围的结构特点，将趋化因子分为4类[4]：第一类趋化因子称为CXC或α趋化因子，其一级结构中氨基端的2个半胱氨酸残基之间存在着一个氨基酸残基；第二类趋化因子称为CC或β趋化因子，其一级结构中氨基末端的2个半胱氨酸相邻；第三类趋化因子称为C型趋化因子，其一级结构中只保留了趋化因子分子结构中4个保守的半胱氨酸残基的第2和第4个，目前仅发现了淋巴趋化素(lymphotactin)一种趋化因子符合这一结构特点[5]；最后一种称为CX3C趋化因子，也就是说在其氨基末端的2个半胱氨酸之间有3个氨基酸残基，目前也仅发现一种CX3C趋化因子[6]。各类趋化因子如表1所示。*7{)1e?, 百拇医药
表1 趋化因子分类
Tab 1 Classification of chemokines.ky, 百拇医药
CXC.ky, 百拇医药
CC.ky, 百拇医药
C.ky, 百拇医药
CX3C.ky, 百拇医药
IL-8.ky, 百拇医药
RANTES.ky, 百拇医药
Lymphotactin.ky, 百拇医药
Fractalkine.ky, 百拇医药
NAP-2.ky, 百拇医药
I309(TCA3).ky, 百拇医药
ENA-78.ky, 百拇医药
MIP-1α.ky, 百拇医药
GROα.ky, 百拇医药
HCC1.ky, 百拇医药
GROβ.ky, 百拇医药
MIP-1β.ky, 百拇医药
GRO γ.ky, 百拇医药
MCP-1.ky, 百拇医药
IP-10.ky, 百拇医药
Eotaxin.ky, 百拇医药
GCP-2.ky, 百拇医药
MCP-2.ky, 百拇医药
SDF-1.ky, 百拇医药
MCP-3.ky, 百拇医药
PF4.ky, 百拇医药
M1G.ky, 百拇医药
能够诱导CHAK细胞的趋化因子可能是多种多样的，但目前关于能够诱导免疫细胞激活、产生CHAK细胞的趋化因子却主要集中在CC趋化因子，即β趋化因子，如RANTES、MIP-1α、MIP-1β、MCP-1和TCA3等方面。Maghazachi等[3]应用MIP-1α、MIP-1β、MCP-1和RANTES等CC趋化因子进行诱导，能够产生与LAK细胞不同的细胞毒效应细胞并首次提出CHAK这一新概念。Taub等[7]也同样以MIP-1α、MIP-1β、RANTES和MCP-1等CC趋化因子诱导成功CHAK细胞活性。但与前者不同的是：其不仅诱导出自然杀伤(NK)细胞的CHAK活性，而且还提高了细胞毒T淋巴细胞(CTL)的细胞毒性，但对于LAK细胞以及抗体依赖的细胞毒性(ATCC)则没有影响。Taub等[8]和Murphy等[9]的研究表明：CC趋化因子MCP-1、MIP-1α、MIP-1β和RANTES的确可以激活T淋巴细胞。除了这些趋化因子之外，MCP-2、MCP-3、I309(TCA3)等CC趋化因子以及IL-8、IP-10等CXC趋化因子对NK细胞也具有激活作用。作为C趋化因子类型中唯一成员的淋巴趋化素(lptn)，可以促进CD4+淋巴细胞对肿瘤组织的浸润，虽然lptn自身不具备抗肿瘤的生物活性，但与白细胞介素-2(IL-2)协同可以产生更强的抗肿瘤活性[10]。
2 CHAK细胞激活的机制x#7.:(, http://www.100md.com
在炎症和组织损伤位点中，炎性细胞的参与是一个重要的环节，不仅在数目上增多，而且由静止状态转变为激活状态。炎性细胞数目的增多，一方面是由于趋化因子的表达，吸引血流中的炎性细胞移行、聚集到炎症和组织损伤位点上，另一方面也是由受到一些生长因子的刺激作用，从而促进效应细胞的增殖，使其数目进一步增多。Turner等[11]从人的外周血中纯化到T淋巴细胞，以抗-CD3和CHO-B7+分别或共同进行刺激：抗-CD3、CHO-B7+分别进行刺激时，上清中分泌CC趋化因子RANTES的水平都没有明显的升高；但以抗-CD3、CHO-B7+共同刺激时，T细胞培养上清中的RANTES表达水平显著上升，而且T细胞[3H]胸腺嘧啶的掺入水平也相应显著升高。但以抗RANTES的特异性抗体对受到抗-CD3和CHO-B7+刺激的T细胞培养上清中所产生的RANTES进行中和以后，T淋巴细胞受到抗-CD3、CHO-B7+共刺激以后的增殖反应则受到显著的抑制。这一研究表明，CC趋化因子RANTES对T淋巴细胞的增殖具有显著的促进作用。Taub等[8]的研究结果也表明，MIP-1α、MIP-1β、MCP-1和RANTES等具有促进人T细胞增殖的作用，但这些T细胞必须事先受到抗-CD3抗体的激活，而对于受到PMA刺激的人T细胞则没有增殖促进作用。x#7.:(, http://www.100md.com
Ca2+作为第二信使，在细胞的激活过程中发挥着十分重要的作用。在CC趋化因子激活的杀伤细胞的形成过程中，细胞内Ca2+浓度的变化也是一个关键的环节。Turner等[12]以人的单核细胞和THP-1细胞系作为靶细胞，研究了受到MCP-1这种CC趋化因子的刺激时细胞中Ca2+水平的变化。结果表明：人单核细胞与THP-1细胞系受到MCP-1刺激以后，细胞内Ca2+水平即显著升高，而且Ca2+水平的升高也是MCP-1剂量依赖性的。Loetscher等[13]的研究结果表明：MCP-1、MCP-2、MCP-3、MIP-1α、MIP-1β和RANTES所有这些CC趋化因子都能引起NK细胞内快速、短暂的细胞内Ca2+水平升高，其中MCP趋化作用因子诱导细胞内Ca2+水平变化的能力更强，而I309、IL-8和IP-10则无此作用效果。另外，Saito等[14]的研究结果表明：嗜酸性粒细胞受到RANTES的作用以后，可以导致Ca2+激活的K+离子通道的开放。
CC趋化因子能够结合的受体分子类型有交叉和重叠，包括CC CKR1、CC CKR2B、CC CKR5、DARC以及HCMV US28等[4]。CC趋化因子所产生的刺激信号就是通过这些7段跨膜受体转导进入细胞的，而这些受体分子又都是G-蛋白相关性的受体分子。因此，CC趋化因子对效应细胞的激活、CHAK细胞的形成，都与G蛋白的信号通路有关[15]。G-蛋白是由鸟嘌呤核苷调节的蛋白的大型超家族的一部分，主要由α、β、γ3个亚单位组成，每种G-蛋白分子的差别就是α亚单位结构的不同。到目前为止，共发现了20余种不同的Gα蛋白形式：分为对腺苷酸环化酶具有激活作用的Gs、对腺苷酸环化酶具有抑制作用的Gi，对Ca2+、Cl-或K+离子通道具有激活作用的有Go，还有Gg、Gz等[16]。AI-Aoukaty等[17]的研究表明，不同的CC趋化因子通过不同的CC趋化因子受体，对不同的G-蛋白进行调节。以抗-Gs、抗-Go和抗-Gz的抗体，可以阻断IL-2激活的NK(IANK)细胞对趋化因子MIP-1α、MIP-1β，以及RANTES等刺激作用的应答。抗-Gi抗体可以阻断IANK细胞对MCP-1或RANTES的应答，但不影响IANK细胞对MIP-1α的应答。IANK细胞膜以抗-Gs、抗-Go和抗-Gz预处理，可以抑制IANK细胞膜受到MIP-1α、MCP-1或RANTES的刺激时的GTP结合和GTPase的活性。抗-Gi抗体仅能抑制MCP-1和RANTES刺激时的GTP结合和GTPase的活性，但却不影响MIP-1α诱导的G-蛋白信号转导。以抗G-蛋白抗体所识别的合成多肽，则可以逆转抗G-蛋白抗体的这些抑制作用。这些结果表明，MCP-1和RANTES受体与多种G蛋白的功能相偶联，MIP-1α受体与Gs、Go和Gz蛋白偶联，而与Gi无关。Luo等[18]的研究结果也表明，CC趋化因子TCA3对平滑肌细胞的激活过程中也与Gαi有关。RANTES对嗜酸性细胞Eol-1细胞系膜上的Ca2+、K+通道的开放作用，也与G蛋白的激活和相关的信号转导有关[14]。?mto, 百拇医药
Smith等[14]发现磷脂酶C(PLC)的抑制剂U73122十分有效地阻断THP-1细胞系及人单核细胞在受到MCP-1刺激时的细胞内Ca2+水平升高，而与U73122结构类似的U73343，却不能抑制PLC活性，同时也不影响细胞在受到MCP-1刺激时细胞内Ca2+水平的升高。因而认为磷酸肌醇的代谢在细胞受到CC趋化因子刺激以后的信号转导过程中具有十分重要的作用。THP-1和单核细胞在受到MCP-1刺激之后，磷酸肌醇3-激酶(PI-3K)的活性升高，同时，PI-3K所催化的产物磷脂酰肌醇(3，4，5)二磷酸盐[PI(3，4)P2]以及磷脂酰肌醇(3，4，5)三磷酸盐[PI(3，4，5)P3]都是时间依赖性和剂量依赖性的方式升高。同时，受到MCP-1刺激以后，细胞内磷脂(PtdoH)水平也发生了显著的变化，这些都是PLC和磷脂酶D(PLD)等激活的结果。进一步的研究表明：PtdoH的变化与细胞内Ca2+浓度的变化是平行的，因而认为主要是PLC发挥着重要调节作用。所以MCP-1趋化因子的信号转导通路至少包括PLC和PI-3K两条不同的路径。
粒细胞与单核细胞受到CXC和CC趋化因子的刺激以后，释放颗粒酶的胞吐(exocytosis)作用是一种重要的应答方式。Loetscher等[13]研究了人外周血NK和CD8+T细胞受到MCP-1和RANTES等刺激时的颗粒酶A和N-乙酰-β-D葡糖胺酶的胞吐过程。当细胞受到MCP-1和RANTES的刺激后，两种胞吐颗粒酶的迅速释放上升，5min内达到高峰。CHAK细胞的细胞毒作用，在很大程度上也依赖于颗粒酶的胞吐作用。np!+^fx, 百拇医药
3 CHAK细胞的应用前景np!+^fx, 百拇医药
作为一种新型的免疫杀伤细胞，CHAK将在免疫调节、抗肿瘤免疫和抗病毒免疫应答中发挥重要作用。Maghazachi等[3]以MIP-1α、MIP-1β、MCP-1或RANTES等诱导人外周血单个核细胞成为新型的CHAK细胞，这种CHAK细胞对于NK敏感的K562靶细胞以及NK不感染的Raji细胞具有杀伤作用，而且这种杀伤作用与IL-2诱导的LAK细胞的杀伤活性相似。IL-2主要是激活CD4+和CD8+细胞而成为LAK细胞，但在这项研究中发现：趋化因子对这两种细胞没有诱导杀伤细胞的活性。MIP-1α、MCP-1和RANTES等CC趋化因子对CD56+细胞具有很强的诱导作用，而且CHAK细胞的杀伤活性也主要是CD56+细胞激活以后的杀伤活性。np!+^fx, 百拇医药
CHAK细胞类型却不仅仅限于NK细胞的激活，CC趋化因子也可以诱导CD8+T细胞，成为CHAK细胞。以小鼠H-2kb反应性CTL克隆30和人CD8+T细胞克隆C6B9作为效应细胞，经CC趋化因子MIP-1α、MCP-1和RANTES诱导以后，分别可以杀伤带有kb抗原表位的小鼠EL-4和人M548细胞等肿瘤细胞系。诱导的CHAK细胞的杀伤活性是趋化因子剂量依赖性的，其有效作用范围是1～100ng/ml。CHAK细胞在抗肿瘤免疫治疗中可能具有广阔的实际应用前景。 第一作者：男，35岁，博士，副主任医师np!+^fx, 百拇医药
参考文献np!+^fx, 百拇医药
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(1998-04-22收稿；1998-11-30修回)(成 军 杨守纯)
单位：解放军302医院传染病研究所基因治疗研究中心 北京 100039*7{)1e?, 百拇医药
关键词：趋化因子 趋化因子激活的杀伤细胞 免疫调节 免疫治疗*7{)1e?, 百拇医药
免疫学杂志990422摘 要 趋化因子分为CXC、CC、C和CX3C 4种。CC趋化因子可以诱导具有免疫杀伤活性的效应细胞，称为CHAK。CHAK的诱导与激活过程，与趋化因子受体介导的一系列信号转导过程有关。CHAK细胞作为一种新型的免疫杀伤细胞，在免疫调节、抗肿瘤免疫治疗中可能具有广阔的应用前景。*7{)1e?, 百拇医药
趋化因子(chemokine)是由一系列分子量为8～10KDa、蛋白质一级结构同源性在20%～90%之间、对各种炎症细胞具有趋化作用的细胞因子组成的一个超家族[1]。在炎症过程中，趋化因子的主要功能就是选择性趋化和激活炎性细胞，引导其准确到达炎症发生位点，并发挥其生物学作用[2]。近年来的研究表明：某些类型的趋化因子还能够诱导杀伤细胞的活性。与淋巴细胞激活的杀伤(LAK)细胞相对应，Maghazachi等[3]形象地将趋化因子激活的杀伤细胞称为CHAK(Chemokine-activated killer)。CHAK细胞将在抗肿瘤、抗病毒免疫中发挥重要作用，已成为一种新型的免疫杀伤细胞。*7{)1e?, 百拇医药
1 诱导CHAK细胞的趋化因子种类*7{)1e?, 百拇医药
在趋化因子的蛋白质一级结构中，有4个位点上的半胱氨酸残基是高度保守的，根据趋化因子一级结构中半胱氨酸残基的位点及其周围的结构特点，将趋化因子分为4类[4]：第一类趋化因子称为CXC或α趋化因子，其一级结构中氨基端的2个半胱氨酸残基之间存在着一个氨基酸残基；第二类趋化因子称为CC或β趋化因子，其一级结构中氨基末端的2个半胱氨酸相邻；第三类趋化因子称为C型趋化因子，其一级结构中只保留了趋化因子分子结构中4个保守的半胱氨酸残基的第2和第4个，目前仅发现了淋巴趋化素(lymphotactin)一种趋化因子符合这一结构特点[5]；最后一种称为CX3C趋化因子，也就是说在其氨基末端的2个半胱氨酸之间有3个氨基酸残基，目前也仅发现一种CX3C趋化因子[6]。各类趋化因子如表1所示。*7{)1e?, 百拇医药
表1 趋化因子分类
Tab 1 Classification of chemokines.ky, 百拇医药
CXC.ky, 百拇医药
CC.ky, 百拇医药
C.ky, 百拇医药
CX3C.ky, 百拇医药
IL-8.ky, 百拇医药
RANTES.ky, 百拇医药
Lymphotactin.ky, 百拇医药
Fractalkine.ky, 百拇医药
NAP-2.ky, 百拇医药
I309(TCA3).ky, 百拇医药
ENA-78.ky, 百拇医药
MIP-1α.ky, 百拇医药
GROα.ky, 百拇医药
HCC1.ky, 百拇医药
GROβ.ky, 百拇医药
MIP-1β.ky, 百拇医药
GRO γ.ky, 百拇医药
MCP-1.ky, 百拇医药
IP-10.ky, 百拇医药
Eotaxin.ky, 百拇医药
GCP-2.ky, 百拇医药
MCP-2.ky, 百拇医药
SDF-1.ky, 百拇医药
MCP-3.ky, 百拇医药
PF4.ky, 百拇医药
M1G.ky, 百拇医药
能够诱导CHAK细胞的趋化因子可能是多种多样的，但目前关于能够诱导免疫细胞激活、产生CHAK细胞的趋化因子却主要集中在CC趋化因子，即β趋化因子，如RANTES、MIP-1α、MIP-1β、MCP-1和TCA3等方面。Maghazachi等[3]应用MIP-1α、MIP-1β、MCP-1和RANTES等CC趋化因子进行诱导，能够产生与LAK细胞不同的细胞毒效应细胞并首次提出CHAK这一新概念。Taub等[7]也同样以MIP-1α、MIP-1β、RANTES和MCP-1等CC趋化因子诱导成功CHAK细胞活性。但与前者不同的是：其不仅诱导出自然杀伤(NK)细胞的CHAK活性，而且还提高了细胞毒T淋巴细胞(CTL)的细胞毒性，但对于LAK细胞以及抗体依赖的细胞毒性(ATCC)则没有影响。Taub等[8]和Murphy等[9]的研究表明：CC趋化因子MCP-1、MIP-1α、MIP-1β和RANTES的确可以激活T淋巴细胞。除了这些趋化因子之外，MCP-2、MCP-3、I309(TCA3)等CC趋化因子以及IL-8、IP-10等CXC趋化因子对NK细胞也具有激活作用。作为C趋化因子类型中唯一成员的淋巴趋化素(lptn)，可以促进CD4+淋巴细胞对肿瘤组织的浸润，虽然lptn自身不具备抗肿瘤的生物活性，但与白细胞介素-2(IL-2)协同可以产生更强的抗肿瘤活性[10]。
2 CHAK细胞激活的机制x#7.:(, http://www.100md.com
在炎症和组织损伤位点中，炎性细胞的参与是一个重要的环节，不仅在数目上增多，而且由静止状态转变为激活状态。炎性细胞数目的增多，一方面是由于趋化因子的表达，吸引血流中的炎性细胞移行、聚集到炎症和组织损伤位点上，另一方面也是由受到一些生长因子的刺激作用，从而促进效应细胞的增殖，使其数目进一步增多。Turner等[11]从人的外周血中纯化到T淋巴细胞，以抗-CD3和CHO-B7+分别或共同进行刺激：抗-CD3、CHO-B7+分别进行刺激时，上清中分泌CC趋化因子RANTES的水平都没有明显的升高；但以抗-CD3、CHO-B7+共同刺激时，T细胞培养上清中的RANTES表达水平显著上升，而且T细胞[3H]胸腺嘧啶的掺入水平也相应显著升高。但以抗RANTES的特异性抗体对受到抗-CD3和CHO-B7+刺激的T细胞培养上清中所产生的RANTES进行中和以后，T淋巴细胞受到抗-CD3、CHO-B7+共刺激以后的增殖反应则受到显著的抑制。这一研究表明，CC趋化因子RANTES对T淋巴细胞的增殖具有显著的促进作用。Taub等[8]的研究结果也表明，MIP-1α、MIP-1β、MCP-1和RANTES等具有促进人T细胞增殖的作用，但这些T细胞必须事先受到抗-CD3抗体的激活，而对于受到PMA刺激的人T细胞则没有增殖促进作用。x#7.:(, http://www.100md.com
Ca2+作为第二信使，在细胞的激活过程中发挥着十分重要的作用。在CC趋化因子激活的杀伤细胞的形成过程中，细胞内Ca2+浓度的变化也是一个关键的环节。Turner等[12]以人的单核细胞和THP-1细胞系作为靶细胞，研究了受到MCP-1这种CC趋化因子的刺激时细胞中Ca2+水平的变化。结果表明：人单核细胞与THP-1细胞系受到MCP-1刺激以后，细胞内Ca2+水平即显著升高，而且Ca2+水平的升高也是MCP-1剂量依赖性的。Loetscher等[13]的研究结果表明：MCP-1、MCP-2、MCP-3、MIP-1α、MIP-1β和RANTES所有这些CC趋化因子都能引起NK细胞内快速、短暂的细胞内Ca2+水平升高，其中MCP趋化作用因子诱导细胞内Ca2+水平变化的能力更强，而I309、IL-8和IP-10则无此作用效果。另外，Saito等[14]的研究结果表明：嗜酸性粒细胞受到RANTES的作用以后，可以导致Ca2+激活的K+离子通道的开放。
CC趋化因子能够结合的受体分子类型有交叉和重叠，包括CC CKR1、CC CKR2B、CC CKR5、DARC以及HCMV US28等[4]。CC趋化因子所产生的刺激信号就是通过这些7段跨膜受体转导进入细胞的，而这些受体分子又都是G-蛋白相关性的受体分子。因此，CC趋化因子对效应细胞的激活、CHAK细胞的形成，都与G蛋白的信号通路有关[15]。G-蛋白是由鸟嘌呤核苷调节的蛋白的大型超家族的一部分，主要由α、β、γ3个亚单位组成，每种G-蛋白分子的差别就是α亚单位结构的不同。到目前为止，共发现了20余种不同的Gα蛋白形式：分为对腺苷酸环化酶具有激活作用的Gs、对腺苷酸环化酶具有抑制作用的Gi，对Ca2+、Cl-或K+离子通道具有激活作用的有Go，还有Gg、Gz等[16]。AI-Aoukaty等[17]的研究表明，不同的CC趋化因子通过不同的CC趋化因子受体，对不同的G-蛋白进行调节。以抗-Gs、抗-Go和抗-Gz的抗体，可以阻断IL-2激活的NK(IANK)细胞对趋化因子MIP-1α、MIP-1β，以及RANTES等刺激作用的应答。抗-Gi抗体可以阻断IANK细胞对MCP-1或RANTES的应答，但不影响IANK细胞对MIP-1α的应答。IANK细胞膜以抗-Gs、抗-Go和抗-Gz预处理，可以抑制IANK细胞膜受到MIP-1α、MCP-1或RANTES的刺激时的GTP结合和GTPase的活性。抗-Gi抗体仅能抑制MCP-1和RANTES刺激时的GTP结合和GTPase的活性，但却不影响MIP-1α诱导的G-蛋白信号转导。以抗G-蛋白抗体所识别的合成多肽，则可以逆转抗G-蛋白抗体的这些抑制作用。这些结果表明，MCP-1和RANTES受体与多种G蛋白的功能相偶联，MIP-1α受体与Gs、Go和Gz蛋白偶联，而与Gi无关。Luo等[18]的研究结果也表明，CC趋化因子TCA3对平滑肌细胞的激活过程中也与Gαi有关。RANTES对嗜酸性细胞Eol-1细胞系膜上的Ca2+、K+通道的开放作用，也与G蛋白的激活和相关的信号转导有关[14]。?mto, 百拇医药
Smith等[14]发现磷脂酶C(PLC)的抑制剂U73122十分有效地阻断THP-1细胞系及人单核细胞在受到MCP-1刺激时的细胞内Ca2+水平升高，而与U73122结构类似的U73343，却不能抑制PLC活性，同时也不影响细胞在受到MCP-1刺激时细胞内Ca2+水平的升高。因而认为磷酸肌醇的代谢在细胞受到CC趋化因子刺激以后的信号转导过程中具有十分重要的作用。THP-1和单核细胞在受到MCP-1刺激之后，磷酸肌醇3-激酶(PI-3K)的活性升高，同时，PI-3K所催化的产物磷脂酰肌醇(3，4，5)二磷酸盐[PI(3，4)P2]以及磷脂酰肌醇(3，4，5)三磷酸盐[PI(3，4，5)P3]都是时间依赖性和剂量依赖性的方式升高。同时，受到MCP-1刺激以后，细胞内磷脂(PtdoH)水平也发生了显著的变化，这些都是PLC和磷脂酶D(PLD)等激活的结果。进一步的研究表明：PtdoH的变化与细胞内Ca2+浓度的变化是平行的，因而认为主要是PLC发挥着重要调节作用。所以MCP-1趋化因子的信号转导通路至少包括PLC和PI-3K两条不同的路径。
粒细胞与单核细胞受到CXC和CC趋化因子的刺激以后，释放颗粒酶的胞吐(exocytosis)作用是一种重要的应答方式。Loetscher等[13]研究了人外周血NK和CD8+T细胞受到MCP-1和RANTES等刺激时的颗粒酶A和N-乙酰-β-D葡糖胺酶的胞吐过程。当细胞受到MCP-1和RANTES的刺激后，两种胞吐颗粒酶的迅速释放上升，5min内达到高峰。CHAK细胞的细胞毒作用，在很大程度上也依赖于颗粒酶的胞吐作用。np!+^fx, 百拇医药
3 CHAK细胞的应用前景np!+^fx, 百拇医药
作为一种新型的免疫杀伤细胞，CHAK将在免疫调节、抗肿瘤免疫和抗病毒免疫应答中发挥重要作用。Maghazachi等[3]以MIP-1α、MIP-1β、MCP-1或RANTES等诱导人外周血单个核细胞成为新型的CHAK细胞，这种CHAK细胞对于NK敏感的K562靶细胞以及NK不感染的Raji细胞具有杀伤作用，而且这种杀伤作用与IL-2诱导的LAK细胞的杀伤活性相似。IL-2主要是激活CD4+和CD8+细胞而成为LAK细胞，但在这项研究中发现：趋化因子对这两种细胞没有诱导杀伤细胞的活性。MIP-1α、MCP-1和RANTES等CC趋化因子对CD56+细胞具有很强的诱导作用，而且CHAK细胞的杀伤活性也主要是CD56+细胞激活以后的杀伤活性。np!+^fx, 百拇医药
CHAK细胞类型却不仅仅限于NK细胞的激活，CC趋化因子也可以诱导CD8+T细胞，成为CHAK细胞。以小鼠H-2kb反应性CTL克隆30和人CD8+T细胞克隆C6B9作为效应细胞，经CC趋化因子MIP-1α、MCP-1和RANTES诱导以后，分别可以杀伤带有kb抗原表位的小鼠EL-4和人M548细胞等肿瘤细胞系。诱导的CHAK细胞的杀伤活性是趋化因子剂量依赖性的，其有效作用范围是1～100ng/ml。CHAK细胞在抗肿瘤免疫治疗中可能具有广阔的实际应用前景。 第一作者：男，35岁，博士，副主任医师np!+^fx, 百拇医药
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(1998-04-22收稿；1998-11-30修回)(成 军 杨守纯)