IL-3体外造血支持效应的初步研究
作者：王红卫 缪竞诚 张澜生1p, http://www.100md.com
单位：苏州医学院基因工程研究室，江苏 苏州 2150071p, http://www.100md.com
关键词：IL-3；脐血；造血支持效应1p, http://www.100md.com
分类号分类号：R331.1：R331.2 文献标识码：A1p, http://www.100md.com
文章编号：1000-861(2000)02-0079-01The preliminary study on the supportive effect of IL-3 in υitro on hematopoiesis1p, http://www.100md.com
IL-3是早期多能生长因子，单独或与其它因子配伍,可以以促进多能干细胞自我更新及定向祖细胞的增殖[1]。骨髓基质细胞不能合成IL-3,已为一些学者证实[2]。因此，我们在成人骨髓基质细胞支持的培养体系中加入IL-3，探讨其对脐血造血细胞增殖分化的作用。1p, http://www.100md.com
1材料和方法1p, http://www.100md.com
1.1细胞的采集脐血采集后使用Ficoll分离，获得脐血NINCs。成人骨髓细胞用Eicoll分离后，制成适当浓度的细胞悬液。1p, http://www.100md.com
1.2基质细胞的培养成人骨髓MNCs按1×105/ml悬浮于5ml基质RPM11640培养液中，培养2～4周，形成单层后，用γ射线(15GY)辐照，胰酶消化后,按1×104/cm2的密度接种培养。1p, http://www.100md.com
表1脐血在长期培养中非粘附细胞数的动态变化1p, http://www.100md.com
1.3造血细胞的培养将5×106脐MNCs悬浮于5ml640培养基培养6周,每周半量换液(实验组加20ng/ml的IL-3),每周计数非粘附细胞，每2周取各实验组和对照组的1×103非附细胞接种一到含1.3%甲基纤维素的1640培养体系中(含IL325ng/ml，GM-CSF40ng/ml.G-CSF40ng/ml.EPO21U/ml).培养2～3周,计数CFC总数。1p, http://www.100md.com
1.4统计学处理数据用x-±s表示，两组间比较用配对t检验。1p, http://www.100md.com
2结果1p, http://www.100md.com
IL-3处理组和对照组非粘附细胞数及CFC产率的动态变化见表1、表2。由表可知,IL-3组1周、2周非粘附细胞数及2周CFC产率与对照组相比无显著差异。然而从1周以后IL-3组无论是非粘附细胞数还呈CFC产率均显著高于对照组。
Tab1Dynamicvariationoftotalcordbloodnonadherentcellsduringlongtermculturevaa, 百拇医药
*P<0.05;**P<0.01,Comparewithcontroln-5vaa, 百拇医药
表2脐血IL-3处理组和对照组2、4、6周CFC产率(10MNCs)的比较vaa, 百拇医药
Tab2Thecomparationof2，4，6weekCFCproduct(/106MNCs)betweenIL-3groupandcontrolgroupvaa, 百拇医药
n＝5vaa, 百拇医药
3讨论vaa, 百拇医药
实验结果显示IL-3组的早期造血活动与对照组无显著差别，然而从3周以后，IL-3组无论是非粘附细胞数还是CFC均显著高于对照组，这可能是由丁IL-3直接或与基质细胞分泌的其它生长因子协同作用的结果[1]，也可能是由于外源IL-3促进基质细胞改造的可分泌II-3的骨髓基质细胞同造血干、祖细胞混合移植给SCID小鼠，可以更长时间维持供者来源的造血干、祖细胞的造血活动，并改善造血重建的质量[4]。这都可能提示IL-3在亲缘和非亲缘供者的脐血干细胞移植中有着潜在的应用前景。vaa, 百拇医药
作者简介：王红卫(1970-)，男，河南商邱市人，硕士，主要从事细胞免疫和造血调控的研究。vaa, 百拇医药
参考文献：vaa, 百拇医药
[1]COUTINHO LH，WILL A，RADFORD H.Et al. Effects of recombinant human granulocyte colony-stimu-lating factor(CSF)，human granulocyte macrophage-CSF.And gibbon interleukin-3 on bemaropoiesis in hu-man long-term bone marrow culture[J].Blood.1990，75(11)；2118～2123.vaa, 百拇医药
[2]GUBA SC.SARTOR CI.GOTTSCHALK IR,et al.Bone marrow stromal fibroblasts secrete interlcukin-6 and granulocyte-macrophuge colony-stimulating factor in the absence of inflammarory stimulation：demons tration by serum-free bioassay，enzyme-linked im-munosorbent assay，and riverse transcriptase poly merase chain reaction[J].Blood.1992,80(5)：1190～1193.vaa, 百拇医药
[3]ROUGIER F，COMU E.PRALORAN V.Et al，IL-6 and IL-8 production by human bone marriw stromal ceils[J].Cytokine，1998，10(2)：93～98.vaa, 百拇医药
[4]DAO NA.PEPPER KA.NOLTA JA.Long-term cy tokine production from engineered primary human stromal cells influences human hematopoiesis in an in vivo enograft model[J].Stem Cells,1997.15:443～436.vaa, 百拇医药
收稿日期：1999-01-25vaa, 百拇医药
修稿日期：1999-07-09(王红卫 缪竞诚 张澜生)
单位：苏州医学院基因工程研究室，江苏 苏州 2150071p, http://www.100md.com
关键词：IL-3；脐血；造血支持效应1p, http://www.100md.com
分类号分类号：R331.1：R331.2 文献标识码：A1p, http://www.100md.com
文章编号：1000-861(2000)02-0079-01The preliminary study on the supportive effect of IL-3 in υitro on hematopoiesis1p, http://www.100md.com
IL-3是早期多能生长因子，单独或与其它因子配伍,可以以促进多能干细胞自我更新及定向祖细胞的增殖[1]。骨髓基质细胞不能合成IL-3,已为一些学者证实[2]。因此，我们在成人骨髓基质细胞支持的培养体系中加入IL-3，探讨其对脐血造血细胞增殖分化的作用。1p, http://www.100md.com
1材料和方法1p, http://www.100md.com
1.1细胞的采集脐血采集后使用Ficoll分离，获得脐血NINCs。成人骨髓细胞用Eicoll分离后，制成适当浓度的细胞悬液。1p, http://www.100md.com
1.2基质细胞的培养成人骨髓MNCs按1×105/ml悬浮于5ml基质RPM11640培养液中，培养2～4周，形成单层后，用γ射线(15GY)辐照，胰酶消化后,按1×104/cm2的密度接种培养。1p, http://www.100md.com
表1脐血在长期培养中非粘附细胞数的动态变化1p, http://www.100md.com
1.3造血细胞的培养将5×106脐MNCs悬浮于5ml640培养基培养6周,每周半量换液(实验组加20ng/ml的IL-3),每周计数非粘附细胞，每2周取各实验组和对照组的1×103非附细胞接种一到含1.3%甲基纤维素的1640培养体系中(含IL325ng/ml，GM-CSF40ng/ml.G-CSF40ng/ml.EPO21U/ml).培养2～3周,计数CFC总数。1p, http://www.100md.com
1.4统计学处理数据用x-±s表示，两组间比较用配对t检验。1p, http://www.100md.com
2结果1p, http://www.100md.com
IL-3处理组和对照组非粘附细胞数及CFC产率的动态变化见表1、表2。由表可知,IL-3组1周、2周非粘附细胞数及2周CFC产率与对照组相比无显著差异。然而从1周以后IL-3组无论是非粘附细胞数还呈CFC产率均显著高于对照组。
Tab1Dynamicvariationoftotalcordbloodnonadherentcellsduringlongtermculturevaa, 百拇医药
*P<0.05;**P<0.01,Comparewithcontroln-5vaa, 百拇医药
表2脐血IL-3处理组和对照组2、4、6周CFC产率(10MNCs)的比较vaa, 百拇医药
Tab2Thecomparationof2，4，6weekCFCproduct(/106MNCs)betweenIL-3groupandcontrolgroupvaa, 百拇医药
n＝5vaa, 百拇医药
3讨论vaa, 百拇医药
实验结果显示IL-3组的早期造血活动与对照组无显著差别，然而从3周以后，IL-3组无论是非粘附细胞数还是CFC均显著高于对照组，这可能是由丁IL-3直接或与基质细胞分泌的其它生长因子协同作用的结果[1]，也可能是由于外源IL-3促进基质细胞改造的可分泌II-3的骨髓基质细胞同造血干、祖细胞混合移植给SCID小鼠，可以更长时间维持供者来源的造血干、祖细胞的造血活动，并改善造血重建的质量[4]。这都可能提示IL-3在亲缘和非亲缘供者的脐血干细胞移植中有着潜在的应用前景。vaa, 百拇医药
作者简介：王红卫(1970-)，男，河南商邱市人，硕士，主要从事细胞免疫和造血调控的研究。vaa, 百拇医药
参考文献：vaa, 百拇医药
[1]COUTINHO LH，WILL A，RADFORD H.Et al. Effects of recombinant human granulocyte colony-stimu-lating factor(CSF)，human granulocyte macrophage-CSF.And gibbon interleukin-3 on bemaropoiesis in hu-man long-term bone marrow culture[J].Blood.1990，75(11)；2118～2123.vaa, 百拇医药
[2]GUBA SC.SARTOR CI.GOTTSCHALK IR,et al.Bone marrow stromal fibroblasts secrete interlcukin-6 and granulocyte-macrophuge colony-stimulating factor in the absence of inflammarory stimulation：demons tration by serum-free bioassay，enzyme-linked im-munosorbent assay，and riverse transcriptase poly merase chain reaction[J].Blood.1992,80(5)：1190～1193.vaa, 百拇医药
[3]ROUGIER F，COMU E.PRALORAN V.Et al，IL-6 and IL-8 production by human bone marriw stromal ceils[J].Cytokine，1998，10(2)：93～98.vaa, 百拇医药
[4]DAO NA.PEPPER KA.NOLTA JA.Long-term cy tokine production from engineered primary human stromal cells influences human hematopoiesis in an in vivo enograft model[J].Stem Cells,1997.15:443～436.vaa, 百拇医药
收稿日期：1999-01-25vaa, 百拇医药
修稿日期：1999-07-09(王红卫 缪竞诚 张澜生)