一株Th2样T细胞杂交瘤表型及胞内细胞因子的检测
作者：谢 鑫 金伯泉 张婷婷 苏 丽 刘雪松 朱 勇o+!q&, 百拇医药
单位：第四军医大学免疫学教研室，陕西 西安 710032o+!q&, 百拇医药
关键词：Th2；T细胞杂交瘤；胞内染色o+!q&, 百拇医药
分类号分类号： R392-33 文献标识码：Ao+!q&, 百拇医药
文章编号：1000-8861(2000)02-0160-01Dection of Surface markers and intracellular cytokines of a Th2-like T-hybridomao+!q&, 百拇医药
按照分泌细胞因子和介导免疫功能的不同，可将小鼠及人类的CD4-T细胞分为Th1和Th2两个亚群。本文应用膜表面和细胞内免疫荧光染色以及流式细胞仪分析，对一株人T细胞杂交瘤进行了检测，表明其是属于Th2样的T细胞杂交瘤。o+!q&, 百拇医药
1材料和方法o+!q&, 百拇医药
急性T淋巳细胞白血病细胞株CEM与活化T细胞融合而获得的T细胞杂交瘤47C7由澳大利来IMVSBURNS教授惠赠[1]。PMA、ionomycin、saponin、monensin及FITC标记的免抗鼠IgG抗体均购白美国Sigma公司。系列单抗均由本室制备。将处于对数生长期的T细胞杂交瘤47C7细胞调整细胞浓度为1×10细胞/ml加入PMA(10ng/ml)、iono-mycin(1μmol/L)刺激6h后将细胞浓度调至5×106细胞/ml，3μl表面标记单抗腹水+40μl细胞悬液+50μl1：20稀释的火活免血清4℃孵育30min，洗液洗涤2遍,加入FITC标记的二抗孵育30min，同上冼涤。固定液固定后FCM测定其膜分子表达水平。用于检测胞内细胞因子时，细胞以PMA(10ng/ml)、iononmycin(1μmol/L)及Monensin(3μmol/L)刺激6h后，以0.01mol/LPBS洗涤刺激细胞2遍，用新鲜配制4%多聚甲醛冰浴固定10min,洗涤2遍，0.01mol/LPBS/20%FCS1%Saponin冰浴30min，将细胞浓度调至5×105细胞/ml.3μl腹水+40μl细胞悬液+50μl11：20稀释的火活免血清4℃孵育30min，冼液洗涤2遍后加入FITC标记的二抗孵育30min，洗涤2次，FCM测定胞内细胞因子的表达。o+!q&, 百拇医药
2结果及讨论
T细胞杂交瘤47C7具有两种亲本细胞的某些特性。从刺激前(见图1左栏)、刺激后(见图1中栏)的膜表面标记及刺激后的胞内细胞因子(见图1右栏)结果可以看出：47C7获得了某些来白活化T细胞的膜表面分子，如PTAl(血小板和T细胞活化抗原1)[1]。9.1C3mAb可识别某种杀伤细胞抑制性受体,IF12是我室新近制备的识别某种广泛分布于淋巴细胞外于表面标记的单抗。这两种分子表达水平在活化前后无明显改变。活化后CD4的表达明显下调可能是由于PMA通过激活PKC而影响其合成。j2y0, http://www.100md.com
PMA和钙离了载体ionomycin是T细胞的活化剂；Monesin主要阻抑蛋白自由Golgi体向胞外的分泌，在胞内细胞因子的测定方面起了关键的作用[2]。分泌型和细胞内细胞因子蛋白折叠的空间结构上可能有一定差别，所以与相应单图1活化前后T细胞杂交瘤47C7的表型及胞内细胞因子的检测j2y0, http://www.100md.com
Fig1DetectionofsurfacemarkersandintracellularcytokinesofT-hvbridoma47C7before/afterj2y0, http://www.100md.com
aetivationj2y0, http://www.100md.com
抗的反应可能有所不同，如本文验2株IL-4单抗F6和2B9与分泌型的IL-4都有很高的亲和力，但胞内染色特性有迥然的差异。通过胞内细胞因子的测定，结果显示47C7T细胞杂文瘤内有较高水平的IL-4和IL-6，而IFNγ水平很低，属于Th2样。此结果可能为Th1/Th2的研究提供一个有用的模型。j2y0, http://www.100md.com
基金项目：国家自然科学基金资助(39870672)j2y0, http://www.100md.com
作者简介：谢 鑫(1975-)，男，河南驻马店人，助教，硕士，主要从事汉坦病毒核心蛋白的细胞免疫机理的研究。j2y0, http://www.100md.com
参考文献：j2y0, http://www.100md.com
[1]BURNS GF，TRIGLIA T，WERKMEISTER JA，et al.TliSA1.A human T lineage specific activation antigen involved in the differentiation of cytotoxic T lympho-cytes and anomalous killer cells from their precursors[J].J Exp Med，1985,161：1063～1078.j2y0, http://www.100md.com
[2]CARTER LL，SWAIN SL.Single cell analyses of cy-tokine production[J].Curr Opin Immunol，1997，9：177～182.j2y0, http://www.100md.com
收稿日期：1999-06-02j2y0, http://www.100md.com
修稿日期：1999-09-14(谢 鑫 金伯泉 张婷婷 苏 丽 刘雪松 朱 勇)
单位：第四军医大学免疫学教研室，陕西 西安 710032o+!q&, 百拇医药
关键词：Th2；T细胞杂交瘤；胞内染色o+!q&, 百拇医药
分类号分类号： R392-33 文献标识码：Ao+!q&, 百拇医药
文章编号：1000-8861(2000)02-0160-01Dection of Surface markers and intracellular cytokines of a Th2-like T-hybridomao+!q&, 百拇医药
按照分泌细胞因子和介导免疫功能的不同，可将小鼠及人类的CD4-T细胞分为Th1和Th2两个亚群。本文应用膜表面和细胞内免疫荧光染色以及流式细胞仪分析，对一株人T细胞杂交瘤进行了检测，表明其是属于Th2样的T细胞杂交瘤。o+!q&, 百拇医药
1材料和方法o+!q&, 百拇医药
急性T淋巳细胞白血病细胞株CEM与活化T细胞融合而获得的T细胞杂交瘤47C7由澳大利来IMVSBURNS教授惠赠[1]。PMA、ionomycin、saponin、monensin及FITC标记的免抗鼠IgG抗体均购白美国Sigma公司。系列单抗均由本室制备。将处于对数生长期的T细胞杂交瘤47C7细胞调整细胞浓度为1×10细胞/ml加入PMA(10ng/ml)、iono-mycin(1μmol/L)刺激6h后将细胞浓度调至5×106细胞/ml，3μl表面标记单抗腹水+40μl细胞悬液+50μl1：20稀释的火活免血清4℃孵育30min，洗液洗涤2遍,加入FITC标记的二抗孵育30min，同上冼涤。固定液固定后FCM测定其膜分子表达水平。用于检测胞内细胞因子时，细胞以PMA(10ng/ml)、iononmycin(1μmol/L)及Monensin(3μmol/L)刺激6h后，以0.01mol/LPBS洗涤刺激细胞2遍，用新鲜配制4%多聚甲醛冰浴固定10min,洗涤2遍，0.01mol/LPBS/20%FCS1%Saponin冰浴30min，将细胞浓度调至5×105细胞/ml.3μl腹水+40μl细胞悬液+50μl11：20稀释的火活免血清4℃孵育30min，冼液洗涤2遍后加入FITC标记的二抗孵育30min，洗涤2次，FCM测定胞内细胞因子的表达。o+!q&, 百拇医药
2结果及讨论
T细胞杂交瘤47C7具有两种亲本细胞的某些特性。从刺激前(见图1左栏)、刺激后(见图1中栏)的膜表面标记及刺激后的胞内细胞因子(见图1右栏)结果可以看出：47C7获得了某些来白活化T细胞的膜表面分子，如PTAl(血小板和T细胞活化抗原1)[1]。9.1C3mAb可识别某种杀伤细胞抑制性受体,IF12是我室新近制备的识别某种广泛分布于淋巴细胞外于表面标记的单抗。这两种分子表达水平在活化前后无明显改变。活化后CD4的表达明显下调可能是由于PMA通过激活PKC而影响其合成。j2y0, http://www.100md.com
PMA和钙离了载体ionomycin是T细胞的活化剂；Monesin主要阻抑蛋白自由Golgi体向胞外的分泌，在胞内细胞因子的测定方面起了关键的作用[2]。分泌型和细胞内细胞因子蛋白折叠的空间结构上可能有一定差别，所以与相应单图1活化前后T细胞杂交瘤47C7的表型及胞内细胞因子的检测j2y0, http://www.100md.com
Fig1DetectionofsurfacemarkersandintracellularcytokinesofT-hvbridoma47C7before/afterj2y0, http://www.100md.com
aetivationj2y0, http://www.100md.com
抗的反应可能有所不同，如本文验2株IL-4单抗F6和2B9与分泌型的IL-4都有很高的亲和力，但胞内染色特性有迥然的差异。通过胞内细胞因子的测定，结果显示47C7T细胞杂文瘤内有较高水平的IL-4和IL-6，而IFNγ水平很低，属于Th2样。此结果可能为Th1/Th2的研究提供一个有用的模型。j2y0, http://www.100md.com
基金项目：国家自然科学基金资助(39870672)j2y0, http://www.100md.com
作者简介：谢 鑫(1975-)，男，河南驻马店人，助教，硕士，主要从事汉坦病毒核心蛋白的细胞免疫机理的研究。j2y0, http://www.100md.com
参考文献：j2y0, http://www.100md.com
[1]BURNS GF，TRIGLIA T，WERKMEISTER JA，et al.TliSA1.A human T lineage specific activation antigen involved in the differentiation of cytotoxic T lympho-cytes and anomalous killer cells from their precursors[J].J Exp Med，1985,161：1063～1078.j2y0, http://www.100md.com
[2]CARTER LL，SWAIN SL.Single cell analyses of cy-tokine production[J].Curr Opin Immunol，1997，9：177～182.j2y0, http://www.100md.com
收稿日期：1999-06-02j2y0, http://www.100md.com
修稿日期：1999-09-14(谢 鑫 金伯泉 张婷婷 苏 丽 刘雪松 朱 勇)