血清、尿中日本血吸虫循环抗原水平动态的实验研究
作者：周艺彪 阳桂芬 杨美霞
单位：湖南省寄生虫病防治研究所 岳阳 414000
关键词：日本血吸虫；循环抗原；尿液
实用寄生虫病杂志990107 提要 本研究采用McAb-Dot-ELISA的方法，平行地对日本血吸虫病家兔血清和尿液中的日本血吸虫肠相关趋阴极抗原的水平动态进行检测。结果显示，家兔在感染血吸虫第4周后尿液中有28.6%(2/7)可检出CAg,10至12周达到高峰71.4%(5/7)；血清中CAg于感染后第2周可检出，8至10周达到高峰，以后缓慢下降。提示家兔在感染10周左右可能是尿液中CAg检出的理想时期。
DYNAMIC CHANGES OF CIRCULATING ANTIGEN OF
SCHISTOSOMIASIS JAPONICA IN SERUM AND URINE
, http://www.100md.com
OF EXPERIMENTAL INFECTED RABBITS
Zhou Yibiao et al.
Hunan Institute of Parasitic Diseases, Yueyang 414000 Hunan Institute of Parasitic Diseases, Yueyang 414000
ABSTRACT
McAb-Dot-ELISA has been used to parallelly detect the dynamic changes of circulatory cathodic antigen(CCA) of schistosomiasis japonica in serum and urine from experimental infected rabbits. The results showed that 28.6%(2/7) of the rabbits were CAg positive in the urine 4 weeks after infection,and then reached their peaks 71.4%(5/7) by the 10th to 12th week after infection, while in serum, the CAg became positive by the 2nd week after infection, and the titers reached the peak by the 8th to10th week after infection, and afterwards, the titers slowly declined. These hinted that the 10th week or so after infection might be the ideal time to detect the CAg in urine from the infected rabbits.
, 百拇医药
Key words: Schistosomiasis japonica, circulating antigen, urine
检测血吸虫循环抗原(CAg)不仅可以反映现症感染，考核疗效，而且可以监测疫苗的效果。因此，近年来许多学者致力于CAg检测研究，目前已采用了不同的样本(血清或尿液)[1-3]，通过多种检测方法对血吸虫循环抗原进行测定[4-6]。有关血清中血吸虫CAg的水平动态规律已有报道[7-9]，但对感染宿主尿中CAg以及同时对比检测血清和尿液中CAg水平消长的情况，尚未见阐明。尿液检测有无创伤性，尿样易得等诸多特点[10]，因此检测尿液CAg诊断血吸虫病具有较好的前景。本文用单克隆抗体3D8A作为探针，采用Dot-ELISA方法，对感染日本血吸虫家兔的血清和尿液的CAg进行了连续的检测。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 实验动物和感染 选择体重2.5-3.0kg/只的健康雄性家兔10只，随机分A、B、C 3组，A、B组各4只，分别经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴300条和500条，C组2只作正常对照。
1.2 样本的收集与处理 感染后每隔二周从家兔耳缘静脉采血2ml，分离血清，-20℃冻存备用。同时自然收集尿液10ml，置于76℃烘箱中加热蒸发1h去除干扰蛋白，并使尿液浓缩5倍取上清液测定。连续观察14周后，解剖所有感染家兔，用冲洗法收集每只家兔的成虫并计数。
1.3 检测方法 采用McAb-Dot-ELISA法，试剂盒由中国预防医科院寄生虫病研究所提供，按照严氏方法操作进行[1]。
2 结果
2.1 尿液中CAg出现的时间 家兔感染后第4周在尿中可检出CAg，其检出率为28.6%(2/7)，在10、12周检出率达到高峰。检出率均为71.4%(5/7)，其中未检出的两只均为A组，第14周开始下降(图1)。
, 百拇医药
图1.感染兔尿液中循环抗原检出率
Fig 1.Detectable rate of CAg in urine from infected rabbits
2.2 血清、尿液中CAg的动态水平变化 血清中CAg在第2周即可检出，在第8、10周达到高峰，以后开始下降。尿中CAg检出时间比血清中略晚，第4周开始检出，至10、12周到达高峰，以后缓慢下降，并且CAg滴度远低于血清中的滴度(图2)。对照组均为阴性。
图2.感染家兔血清及尿中CAg的水平动态变化
Fig 2.Kinetic changes of CAg levels in sera and urine of infected rabbits
, 百拇医药
2.3 感染家兔解剖结果 除1兔于感染1周后死亡未解剖之外，其余都在实验结束后解剖，肝脏明显肿大，肉眼可见虫卵结节，压片镜检均有血吸虫卵，经冲洗检虫，A组平均虫荷数为163.5±26.6条，B组平均虫荷数为311.3±37.9条。
3 讨论 目前检测日本血吸虫病CAg的方法有多种，其检测的敏感性和特异性也各异。本研究采用检测效果较好的McAb-Dot-ELISA法[11，12]，平行地对感染日本血吸虫家兔中血清和尿液中CAg进行检测，发现家兔在感染日本血吸虫第2周后血清中即可检出CAg，在4周全部能检出CAg，以后CAg水平升降结果与文献[7，9]报道基本一致。家兔尿液在感染4周后有28.6%(2/7)发生弱阳性反应，8至第10周检出率达到高峰均为71.4%(5/7)，平均滴度为1∶3。以后下降缓慢。提示家兔在感染血吸虫后第10周可能是尿液中CAg检出的理想时期。但检出效果不如血清中的那么理想，说明尿液中 CAg的含量远比血清中CAg少。
, 百拇医药
基金项目：湖南省卫生厅资助项目。
The project received the financial support from the Bureau of Public Health of Hunan Province.
注释：WHO湖区血吸虫病防治中心
WHO Center for Schistosomiasis in Lake Region
4 参考文献
1 严自助，等.单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1990；8(3)∶161-164.
2 Deelder AM,et al.Quantitative diagnosis of Schistosoma infections by measurement of circulating antigens in serum and urine.Trop Geogr Med 1994;46(4)∶233.
, 百拇医药
3 Van Lieshout L,et al.Improved diagnostic performance of circulating antigen assay in human schistosomiasis by parallel testing for circulating anodic and cathodic antigen in serum and urine.Am J Trop Med Hyg 1992;47(4)∶463.
4 Gundersen SG,et al.Quantitative detection of schistosomal circulating anodic antigen by a magnetic bead antigen capture enzymelinked immunosorbent assay(MBAC-EIA) before and after mass chemotherapy.Trans R Soc Trop Med Hyg 1992;86(2)∶175.
, 百拇医药
5 王勇，等.McAb-RIHA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的效果.实用寄生虫病杂志 1998；6(2)∶45-50.
6 陆萍，等.试剂条双夹心酶联免疫吸附试验检测日本血吸虫感染者经尿液排泄的循环趋阴极抗原.中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1996；14(4)∶253-256.
7 石佑恩，等.日本血吸虫循环抗原的检测及其消长动态的研究.寄生虫与医学昆虫学报 1993；11∶278.
8 何永康，等.日本血吸虫感染动物血清中CAb,CAg及CIC水平的动态.中国血吸虫病防治杂志 1995；7(2)∶87-90.
9 刘世国，等.日本血吸虫循环抗原动态消长的实验研究.中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1998；16(4)∶283-286.
10 刘晓明，等.检测日本血吸虫病家兔尿中循环抗原的实验研究.实用寄生虫病杂志 1996；4(2)∶73-74.
11 孙乐平，等.检测血液中循环抗原和抗体诊断血吸虫病应用价值的研究.中国血吸虫病防治杂志 1994；6(6)∶353-354.
12 严自助，等.血吸虫循环抗原检测的现场试验.中国血吸虫病防治杂志 1992；4(5)∶275-277.
13 娄文娴.血吸虫循环抗原研究近况.国外医学寄生虫病分册 1987；1∶5-8., http://www.100md.com
单位：湖南省寄生虫病防治研究所 岳阳 414000
关键词：日本血吸虫；循环抗原；尿液
实用寄生虫病杂志990107 提要 本研究采用McAb-Dot-ELISA的方法，平行地对日本血吸虫病家兔血清和尿液中的日本血吸虫肠相关趋阴极抗原的水平动态进行检测。结果显示，家兔在感染血吸虫第4周后尿液中有28.6%(2/7)可检出CAg,10至12周达到高峰71.4%(5/7)；血清中CAg于感染后第2周可检出，8至10周达到高峰，以后缓慢下降。提示家兔在感染10周左右可能是尿液中CAg检出的理想时期。
DYNAMIC CHANGES OF CIRCULATING ANTIGEN OF
SCHISTOSOMIASIS JAPONICA IN SERUM AND URINE
, http://www.100md.com
OF EXPERIMENTAL INFECTED RABBITS
Zhou Yibiao et al.
Hunan Institute of Parasitic Diseases, Yueyang 414000 Hunan Institute of Parasitic Diseases, Yueyang 414000
ABSTRACT
McAb-Dot-ELISA has been used to parallelly detect the dynamic changes of circulatory cathodic antigen(CCA) of schistosomiasis japonica in serum and urine from experimental infected rabbits. The results showed that 28.6%(2/7) of the rabbits were CAg positive in the urine 4 weeks after infection,and then reached their peaks 71.4%(5/7) by the 10th to 12th week after infection, while in serum, the CAg became positive by the 2nd week after infection, and the titers reached the peak by the 8th to10th week after infection, and afterwards, the titers slowly declined. These hinted that the 10th week or so after infection might be the ideal time to detect the CAg in urine from the infected rabbits.
, 百拇医药
Key words: Schistosomiasis japonica, circulating antigen, urine
检测血吸虫循环抗原(CAg)不仅可以反映现症感染，考核疗效，而且可以监测疫苗的效果。因此，近年来许多学者致力于CAg检测研究，目前已采用了不同的样本(血清或尿液)[1-3]，通过多种检测方法对血吸虫循环抗原进行测定[4-6]。有关血清中血吸虫CAg的水平动态规律已有报道[7-9]，但对感染宿主尿中CAg以及同时对比检测血清和尿液中CAg水平消长的情况，尚未见阐明。尿液检测有无创伤性，尿样易得等诸多特点[10]，因此检测尿液CAg诊断血吸虫病具有较好的前景。本文用单克隆抗体3D8A作为探针，采用Dot-ELISA方法，对感染日本血吸虫家兔的血清和尿液的CAg进行了连续的检测。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 实验动物和感染 选择体重2.5-3.0kg/只的健康雄性家兔10只，随机分A、B、C 3组，A、B组各4只，分别经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴300条和500条，C组2只作正常对照。
1.2 样本的收集与处理 感染后每隔二周从家兔耳缘静脉采血2ml，分离血清，-20℃冻存备用。同时自然收集尿液10ml，置于76℃烘箱中加热蒸发1h去除干扰蛋白，并使尿液浓缩5倍取上清液测定。连续观察14周后，解剖所有感染家兔，用冲洗法收集每只家兔的成虫并计数。
1.3 检测方法 采用McAb-Dot-ELISA法，试剂盒由中国预防医科院寄生虫病研究所提供，按照严氏方法操作进行[1]。
2 结果
2.1 尿液中CAg出现的时间 家兔感染后第4周在尿中可检出CAg，其检出率为28.6%(2/7)，在10、12周检出率达到高峰。检出率均为71.4%(5/7)，其中未检出的两只均为A组，第14周开始下降(图1)。
, 百拇医药
图1.感染兔尿液中循环抗原检出率
Fig 1.Detectable rate of CAg in urine from infected rabbits
2.2 血清、尿液中CAg的动态水平变化 血清中CAg在第2周即可检出，在第8、10周达到高峰，以后开始下降。尿中CAg检出时间比血清中略晚，第4周开始检出，至10、12周到达高峰，以后缓慢下降，并且CAg滴度远低于血清中的滴度(图2)。对照组均为阴性。
图2.感染家兔血清及尿中CAg的水平动态变化
Fig 2.Kinetic changes of CAg levels in sera and urine of infected rabbits
, 百拇医药
2.3 感染家兔解剖结果 除1兔于感染1周后死亡未解剖之外，其余都在实验结束后解剖，肝脏明显肿大，肉眼可见虫卵结节，压片镜检均有血吸虫卵，经冲洗检虫，A组平均虫荷数为163.5±26.6条，B组平均虫荷数为311.3±37.9条。
3 讨论 目前检测日本血吸虫病CAg的方法有多种，其检测的敏感性和特异性也各异。本研究采用检测效果较好的McAb-Dot-ELISA法[11，12]，平行地对感染日本血吸虫家兔中血清和尿液中CAg进行检测，发现家兔在感染日本血吸虫第2周后血清中即可检出CAg，在4周全部能检出CAg，以后CAg水平升降结果与文献[7，9]报道基本一致。家兔尿液在感染4周后有28.6%(2/7)发生弱阳性反应，8至第10周检出率达到高峰均为71.4%(5/7)，平均滴度为1∶3。以后下降缓慢。提示家兔在感染血吸虫后第10周可能是尿液中CAg检出的理想时期。但检出效果不如血清中的那么理想，说明尿液中 CAg的含量远比血清中CAg少。
, 百拇医药
基金项目：湖南省卫生厅资助项目。
The project received the financial support from the Bureau of Public Health of Hunan Province.
注释：WHO湖区血吸虫病防治中心
WHO Center for Schistosomiasis in Lake Region
4 参考文献
1 严自助，等.单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1990；8(3)∶161-164.
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, 百拇医药
3 Van Lieshout L,et al.Improved diagnostic performance of circulating antigen assay in human schistosomiasis by parallel testing for circulating anodic and cathodic antigen in serum and urine.Am J Trop Med Hyg 1992;47(4)∶463.
4 Gundersen SG,et al.Quantitative detection of schistosomal circulating anodic antigen by a magnetic bead antigen capture enzymelinked immunosorbent assay(MBAC-EIA) before and after mass chemotherapy.Trans R Soc Trop Med Hyg 1992;86(2)∶175.
, 百拇医药
5 王勇，等.McAb-RIHA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的效果.实用寄生虫病杂志 1998；6(2)∶45-50.
6 陆萍，等.试剂条双夹心酶联免疫吸附试验检测日本血吸虫感染者经尿液排泄的循环趋阴极抗原.中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1996；14(4)∶253-256.
7 石佑恩，等.日本血吸虫循环抗原的检测及其消长动态的研究.寄生虫与医学昆虫学报 1993；11∶278.
8 何永康，等.日本血吸虫感染动物血清中CAb,CAg及CIC水平的动态.中国血吸虫病防治杂志 1995；7(2)∶87-90.
9 刘世国，等.日本血吸虫循环抗原动态消长的实验研究.中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1998；16(4)∶283-286.
10 刘晓明，等.检测日本血吸虫病家兔尿中循环抗原的实验研究.实用寄生虫病杂志 1996；4(2)∶73-74.
11 孙乐平，等.检测血液中循环抗原和抗体诊断血吸虫病应用价值的研究.中国血吸虫病防治杂志 1994；6(6)∶353-354.
12 严自助，等.血吸虫循环抗原检测的现场试验.中国血吸虫病防治杂志 1992；4(5)∶275-277.
13 娄文娴.血吸虫循环抗原研究近况.国外医学寄生虫病分册 1987；1∶5-8., http://www.100md.com