海马学习记忆功能有关基因及六味地黄汤益智作用与基因表达关系的研究
作者：魏小龙
单位：魏小龙(军事医学科学院毒物药物研究所，北京100850)
关键词：学习；记忆；海马；基因；逆转录-多聚酶链反应；差异显示；六味地黄汤
生理科学进展000308 摘要 运用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术及学习记忆行为实验，通过快速老化模型小鼠(SAM)、氢化可的松处理小鼠及正常小鼠，研究发现海马糖皮质激素受体(GR)、盐皮质激素受体(MR)、bcl-2、c-fos、神经细胞粘附分子(NCAM)、早老蛋白-2(PS-2)及apoE与中枢学习记忆功能具有密切的关系。应用mRNA差异显示技术研究发现,SAM的快速老化亚系SAMP8和抗快速老化亚系SAMR1海马有6条明显差异的基因片段，其中二个为新基因。口服六味地黄汤(LW)对模型动物学习记忆功能衰退具有明显的改善作用，同时对海马基因表达异常具有明显纠正作用。应用胚胎大鼠原代培养的海马神经元研究发现皮质酮对学习记忆有关基因表达具有明显影响。上述结果提示，中枢学习记忆过程与海马多种基因表达存在密切的关系，纠正海马基因表达异常、调节下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的平衡是LW益智作用的重要机制之一。
, http://www.100md.com
学科分类号 R964
Studies on Learning and Memory Function-Related Genes in the Hippocampus and the Relationship Between the Cognitive Enhancing Effect of Liuwei Dihuang Decoction (LW) and Gene Expression
WEI Xiao-Long
(Beijing Institute of Pharmacology and Toxicology, Beijing 100850)
Abstract Our studies showed that the expressions of the genes including glucocorticoid receptor (GR), mineralocorticoid receptor (MR), bcl-2, c-fos, neural cell adhesion molecule (NCAM), presenilin-2 (PS-2) and apoE in the hippocampus were closely related to the central learning and memory function in senescence accelerated mice (SAM), hydrocortisone(HC)-treated mice and normal mice. The differential display technique was applied to compare mRNAs expression between SAM-prone/8 (SAMP8), and SAM-resistance/1 (SAMR1). Six differentially expressed cDNA bands were identified and two of them are unknown genes. Chronic oral administration of LW (5 g/kg), a traditional Chinese medicinal prescription, significantly ameliorated the deterioration of learning and memory ability in SAMP8 and HC-treated mice and corrected the abnormal expressions of hippocampal genes. Further studies showed that corticosterone significantly affected the gene expression in primary cultured hippocampal neurons. These results suggested that central learning and memory function is closely related to the expressions of hippocampal genes. The imbalance of hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis leads to the deterioration of learning and memory function and the abnormal expressions of hippocampal genes. Therefore, one of the important ways of the cognitive enhancing effect of LW is to correct the abnormal expressions of hippocampal genes.
, 百拇医药
Key words Learning and memory; Hippocampus; Genes; RT-PCR; Differential display; Liuwei dihuang decoction (LW)
已有研究表明，多种基因及其产物与中枢学习记忆的生理过程存在密切的关系，如糖皮质激素受体(GR)、盐皮质激素受体(MR)、神经细胞粘附分子(NCAM)、c-fos、ependymin及GAP-43等[1，2]。衰老及阿尔采末病(Alzheimer's disease, AD)等神经退行性疾病的显著特征之一是中枢学习记忆功能障碍[3]，AD的发生与β-淀粉样蛋白的前体蛋白(APP)、早老蛋白(presenilin，PS)、apoE、tau等基因的突变或异常表达以及脑内多种细胞因子、补体、蛋白等介导的免疫炎性损伤存在密切关系[4～6]。近年来研究提示，衰老及AD等中枢学习记忆功能衰退与下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA)轴功能亢进和神经内分泌免疫调节(neuroendocrine-immune modulation, NIM)网络平衡失调具有密切的关系[7，8]。因此阐明影响中枢学习记忆的基因及其调控机制, 对从基因水平阐明中枢学习记忆功能的调控机制及益智药物的寻找均具有重要意义。
, 百拇医药
本研究首先探讨了与学习记忆功能有关的已知基因和未知基因，然后观察了六味地黄汤(LW)的益智作用与调节海马基因表达的关系，进而研究了糖皮质激素(GCs)对中枢学习记忆功能的作用与有关基因表达的关系。
一、海马与学习记忆功能有关基因的研究
(一) SAM学习记忆行为及其脑内有关基因表达的变化，快速老化模型小鼠(senescence accelerated mouse，SAM)，是一种出生后随增龄发生进行性快速老化的模型小鼠。SAMP8是SAM的亚系之一，其突出的特征是在增龄过程中中枢学习记忆功能明显衰退[9]，但发生机制尚不清楚。本研究首先对2、6、11、12月龄SAMP8学习记忆行为及脑内有关基因表达的动态过程进行了观察，结果表明，SAMP8从2月龄开始其被动及主动回避反应能力明显低于同龄抗快速老化亚系SAMR1；水迷宫实验结果表明其空间记忆能力随增龄发生明显衰退。此外，SAMP8海马PS-2的表达水平明显升高，GR、MR和apoE明显降低，bcl-2和NCAM由高变低，tau蛋白表达水平则由低变高，而TGF-β、IL-1α、TNF-β的表达水平无显著性变化。细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、急性相蛋白α-2-Macroglobulin (α2M)及MHCII Ia在本实验条件下检测均呈阴性。上述结果提示，在增龄过程中SAMP8中枢学习记忆功能的衰退与海马GR、MR、apoE表达水平的明显降低，PS-2、tau表达水平的升高及bcl-2和NCAM的由高变低具有密切关系。
, 百拇医药
，，(二) 学习记忆行为对海马基因表达的影响，在穿梭箱实验第1、5、10天小鼠海马学习记忆功能有关基因表达水平的动态变化。实验第1天，小鼠海马GR、bcl-2、c-fos、PS-2及tau的表达水平明显高于对照组，NCAM有升高的趋势，而MR、PS-1、apoE、APP的表达水平未发生明显变化。至实验第5天，GR、MR、bcl-2、c-fos、NCAM、PS-1、PS-2、tau和APP的表达水平均明显升高，而apoE的表达水平则明显降低。至实验第10天，GR、MR、c-fos、NCAM、PS-1、tau和APP的表达水平仍明显高于对照组，而bcl-2和PS-2则降至对照组水平。上述结果提示，海马基因表达的种类、变化程度和先后次序与学习记忆获得过程具有密切关系。
，，(三) SAM海马基因mRNA差异显示结果，通过对SAMR1和SAMP8海马基因进行mRNA差异显示分析，在海马约8 000个基因中，对其中三次重复实验均能重现的6个差异基因片段(W1,W2,W3,W4,W5,W6)进行了DNA测序。其中W2和W5主要存在于SAMR1海马内，而W1, W3, W4和W6则主要存在于SAMP8海马内。W2(106bp)和W3(152bp)分别与人天疱疮抗原基因及人糖原分解酶异构体1/2/3/4/6有89.2%和90.8%的同源性，初步判断为已知基因。W1(132bp)和W6(102bp) 分别与大鼠GTP交换蛋白(eIF-2B)及大鼠磷脂酶D有66.1% 和62.3% 的同源性。而W4(100bp)和W5(108bp)与其它基因同源性很低，初步判定为新基因。上述基因与SAM中枢学习记忆功能的关系有待于进一步研究。
, 百拇医药
二、LW益智作用与调节海马基因表达的关系
本室以往研究表明，LW对SAMP8学习记忆功能衰退具有明显改善作用，并可显著降低SAMP8血浆皮质酮(CORT)水平[10]。本研究结果表明，SAMP8在学习记忆功能明显衰退的同时，海马GR、MR的表达水平也明显降低,两者具有明显的平行关系，其它多种检测基因也表达异常。慢性口服给予LW(5 g/kg)使海马GR、MR表达水平低下得到明显改善，同时海马其它检测基因表达异常得到明显纠正。
SAMP8血浆CORT水平升高，与本实验所见海马GR、MR的表达水平明显降低相一致。因此，调节海马学习记忆有关基因的表达，恢复HPA轴的机能平衡可能是LW发挥益智作用的重要途径之一。
三、糖皮质激素对学习记忆的损伤作用与调节海马基因表达的关系
腹腔注射HC(15 mg/kg)连续3周, 学习记忆功能尚无明显改变, 但海马基因的表达水平已发生了明显变化,GR、MR、NCAM、PS-2、apoE明显降低, c-fos、tau 明显升高。继续给HC至8周, 学习记忆受到一定程度的损害, c-fos由高变低, GR、MR、NCAM、PS-2、apoE仍处于低水平。 给予较大剂量HC(30 mg/kg)连续2周, 学习记忆受到明显的损害, 海马GR、MR、c-fos、NCAM、PS-2、apoE明显低于对照组。继续给HC至4周, 上述变化更为明显。HC引起的海马基因表达的变化早于学习记忆功能障碍的出现，提示HC引起的学习记忆功能障碍与海马上述基因的异常表达具有密切关系。LW对HC引起的学习记忆功能障碍具有一定的改善作用，同时对HC引起的海马基因表达异常具有明显的纠正作用。
, 百拇医药
进而我们观察了CORT对胚胎大鼠原代培养的海马神经元基因表达的影响。结果表明，CORT与海马神经元作用1h、6h和12h，MR、bcl-2、c-fos、NCAM、tau和APP的表达水平发生了明显变化。 MR、bcl-2的表达水平明显降低，tau的表达水平明显升高。c-fos、NCAM和APP的表达水平则先升后降。在本实验条件下，GR、PS-1、PS-2、apoE检测呈阴性。结果提示，GCs对神经元的损伤作用与上述基因表达异常尤其与MR具有密切的关系，基因表达水平的变化要早于神经元的损伤。
四、结语
本研究结果表明，SAMP8在增龄过程中学习记忆功能衰退与其海马多种基因表达异常密切相关，正常小鼠学习记忆行为变化与上述基因表达也存在一定的关系。给予外源性GCs，既可引起海马多种基因表达异常并损伤中枢学习记忆功能，又可直接引起胚胎大鼠原代培养的海马神经元内某些基因表达异常。LW对SAMP8及HC处理小鼠的中枢学习记忆功能衰退具有一定的改善作用，同时对其海马基因的异常表达具有明显的纠正作用。GR、MR、NCAM、PS-2和apoE的表达在SAMP8和HC处理小鼠海马内有共同的变化趋势。上述结果提示，中枢学习记忆的生理和病理过程与海马多种基因的表达具有密切关系，基因表达的变化早于学习记忆功能的变化，是糖皮质激素、LW等影响中枢学习记忆功能重要中介过程之一。
, 百拇医药
国家重点基础研究发展规划项目(G1999054401)，国家自然科学基金重点资助课题(39830450)
及“九五”国家攀登计划预选项目资助课题
魏小龙，男，药理学专业。导师：周金黄研究员、张永祥研究员。论文答辩日期：1999年6月21日，答辩委员会主席：张均田研究员。
参考文献
1，Oitzl MS, Fluttert M, de kloet ER. Acute blockade of hippocampal glucocorticoid receptors facilitates spatial learning in rats. Brain Res, 1998, 797∶159～162.
2，Paylor R, Johnson RS, Papaioannou V, et al. Behavioral assessment of c-fos mutant mice. Brain Res, 1994, 651∶275～282.
, 百拇医药
3，Reisberg B, Ferris SH, de Leon MJ, et al. Stage-specific behavioral, cognitive and in vivo changes in community residing subjects with age related memory impairment and primary degenerative dementia of the Alzheimer's disease. Drug Dev Res, 1988, 15∶101～114.
4，Poirier J. Apolipoprotein E in animal models of CNS injury and in Alzheimer's disease. Trends Neurosci, 1994, 17∶525～530.
5，Mandelkow EM, Biernat J, Drewes G, et al. Microtubule-associated protein tau, paired helical filaments, and phosphorylation. Ann NY Acad Sci, 1993, 695∶209～216.
, http://www.100md.com
6，魏小龙，张永祥. 自身免疫反应与中枢学习记忆功能障碍. 中国药理学通报，1998, 14∶289～293.
7，O'Brien JT, Ames D, Schweitzer I, et al. Enhanced adrenal sensitivity to adrenocorticotrophic hormone (ACTH) is evidence of HPA axis hyperactivity in Alzheimer's disease. Psychol Med, 1996, 26∶7～14.
8，Balldin J, Blennow K, Gottfries CG, et al. Relationship between mental impairment and HPA axis activity in dementia disorders. Dementia, 1994, 5∶252～256.
, http://www.100md.com
9，Takeda T. Senescence-accelerated mouse (SAM): with special reference to age-associated pathologies and their modulation. Nippon Eiseigaku Zasski, 1996, 51∶569～578.
10，Zhou JZ, Zhang YX, Zhou JH. Increased corticosterone levels in plasma and hippocampus and their relationship with hippocampal ATP depletion in senescence accelerated mice. Chin J Pharmacol Toxicol, 1998, 12∶12～15., 百拇医药
单位：魏小龙(军事医学科学院毒物药物研究所，北京100850)
关键词：学习；记忆；海马；基因；逆转录-多聚酶链反应；差异显示；六味地黄汤
生理科学进展000308 摘要 运用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术及学习记忆行为实验，通过快速老化模型小鼠(SAM)、氢化可的松处理小鼠及正常小鼠，研究发现海马糖皮质激素受体(GR)、盐皮质激素受体(MR)、bcl-2、c-fos、神经细胞粘附分子(NCAM)、早老蛋白-2(PS-2)及apoE与中枢学习记忆功能具有密切的关系。应用mRNA差异显示技术研究发现,SAM的快速老化亚系SAMP8和抗快速老化亚系SAMR1海马有6条明显差异的基因片段，其中二个为新基因。口服六味地黄汤(LW)对模型动物学习记忆功能衰退具有明显的改善作用，同时对海马基因表达异常具有明显纠正作用。应用胚胎大鼠原代培养的海马神经元研究发现皮质酮对学习记忆有关基因表达具有明显影响。上述结果提示，中枢学习记忆过程与海马多种基因表达存在密切的关系，纠正海马基因表达异常、调节下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的平衡是LW益智作用的重要机制之一。
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学科分类号 R964
Studies on Learning and Memory Function-Related Genes in the Hippocampus and the Relationship Between the Cognitive Enhancing Effect of Liuwei Dihuang Decoction (LW) and Gene Expression
WEI Xiao-Long
(Beijing Institute of Pharmacology and Toxicology, Beijing 100850)
Abstract Our studies showed that the expressions of the genes including glucocorticoid receptor (GR), mineralocorticoid receptor (MR), bcl-2, c-fos, neural cell adhesion molecule (NCAM), presenilin-2 (PS-2) and apoE in the hippocampus were closely related to the central learning and memory function in senescence accelerated mice (SAM), hydrocortisone(HC)-treated mice and normal mice. The differential display technique was applied to compare mRNAs expression between SAM-prone/8 (SAMP8), and SAM-resistance/1 (SAMR1). Six differentially expressed cDNA bands were identified and two of them are unknown genes. Chronic oral administration of LW (5 g/kg), a traditional Chinese medicinal prescription, significantly ameliorated the deterioration of learning and memory ability in SAMP8 and HC-treated mice and corrected the abnormal expressions of hippocampal genes. Further studies showed that corticosterone significantly affected the gene expression in primary cultured hippocampal neurons. These results suggested that central learning and memory function is closely related to the expressions of hippocampal genes. The imbalance of hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis leads to the deterioration of learning and memory function and the abnormal expressions of hippocampal genes. Therefore, one of the important ways of the cognitive enhancing effect of LW is to correct the abnormal expressions of hippocampal genes.
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Key words Learning and memory; Hippocampus; Genes; RT-PCR; Differential display; Liuwei dihuang decoction (LW)
已有研究表明，多种基因及其产物与中枢学习记忆的生理过程存在密切的关系，如糖皮质激素受体(GR)、盐皮质激素受体(MR)、神经细胞粘附分子(NCAM)、c-fos、ependymin及GAP-43等[1，2]。衰老及阿尔采末病(Alzheimer's disease, AD)等神经退行性疾病的显著特征之一是中枢学习记忆功能障碍[3]，AD的发生与β-淀粉样蛋白的前体蛋白(APP)、早老蛋白(presenilin，PS)、apoE、tau等基因的突变或异常表达以及脑内多种细胞因子、补体、蛋白等介导的免疫炎性损伤存在密切关系[4～6]。近年来研究提示，衰老及AD等中枢学习记忆功能衰退与下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA)轴功能亢进和神经内分泌免疫调节(neuroendocrine-immune modulation, NIM)网络平衡失调具有密切的关系[7，8]。因此阐明影响中枢学习记忆的基因及其调控机制, 对从基因水平阐明中枢学习记忆功能的调控机制及益智药物的寻找均具有重要意义。
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本研究首先探讨了与学习记忆功能有关的已知基因和未知基因，然后观察了六味地黄汤(LW)的益智作用与调节海马基因表达的关系，进而研究了糖皮质激素(GCs)对中枢学习记忆功能的作用与有关基因表达的关系。
一、海马与学习记忆功能有关基因的研究
(一) SAM学习记忆行为及其脑内有关基因表达的变化，快速老化模型小鼠(senescence accelerated mouse，SAM)，是一种出生后随增龄发生进行性快速老化的模型小鼠。SAMP8是SAM的亚系之一，其突出的特征是在增龄过程中中枢学习记忆功能明显衰退[9]，但发生机制尚不清楚。本研究首先对2、6、11、12月龄SAMP8学习记忆行为及脑内有关基因表达的动态过程进行了观察，结果表明，SAMP8从2月龄开始其被动及主动回避反应能力明显低于同龄抗快速老化亚系SAMR1；水迷宫实验结果表明其空间记忆能力随增龄发生明显衰退。此外，SAMP8海马PS-2的表达水平明显升高，GR、MR和apoE明显降低，bcl-2和NCAM由高变低，tau蛋白表达水平则由低变高，而TGF-β、IL-1α、TNF-β的表达水平无显著性变化。细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、急性相蛋白α-2-Macroglobulin (α2M)及MHCII Ia在本实验条件下检测均呈阴性。上述结果提示，在增龄过程中SAMP8中枢学习记忆功能的衰退与海马GR、MR、apoE表达水平的明显降低，PS-2、tau表达水平的升高及bcl-2和NCAM的由高变低具有密切关系。
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，，(二) 学习记忆行为对海马基因表达的影响，在穿梭箱实验第1、5、10天小鼠海马学习记忆功能有关基因表达水平的动态变化。实验第1天，小鼠海马GR、bcl-2、c-fos、PS-2及tau的表达水平明显高于对照组，NCAM有升高的趋势，而MR、PS-1、apoE、APP的表达水平未发生明显变化。至实验第5天，GR、MR、bcl-2、c-fos、NCAM、PS-1、PS-2、tau和APP的表达水平均明显升高，而apoE的表达水平则明显降低。至实验第10天，GR、MR、c-fos、NCAM、PS-1、tau和APP的表达水平仍明显高于对照组，而bcl-2和PS-2则降至对照组水平。上述结果提示，海马基因表达的种类、变化程度和先后次序与学习记忆获得过程具有密切关系。
，，(三) SAM海马基因mRNA差异显示结果，通过对SAMR1和SAMP8海马基因进行mRNA差异显示分析，在海马约8 000个基因中，对其中三次重复实验均能重现的6个差异基因片段(W1,W2,W3,W4,W5,W6)进行了DNA测序。其中W2和W5主要存在于SAMR1海马内，而W1, W3, W4和W6则主要存在于SAMP8海马内。W2(106bp)和W3(152bp)分别与人天疱疮抗原基因及人糖原分解酶异构体1/2/3/4/6有89.2%和90.8%的同源性，初步判断为已知基因。W1(132bp)和W6(102bp) 分别与大鼠GTP交换蛋白(eIF-2B)及大鼠磷脂酶D有66.1% 和62.3% 的同源性。而W4(100bp)和W5(108bp)与其它基因同源性很低，初步判定为新基因。上述基因与SAM中枢学习记忆功能的关系有待于进一步研究。
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二、LW益智作用与调节海马基因表达的关系
本室以往研究表明，LW对SAMP8学习记忆功能衰退具有明显改善作用，并可显著降低SAMP8血浆皮质酮(CORT)水平[10]。本研究结果表明，SAMP8在学习记忆功能明显衰退的同时，海马GR、MR的表达水平也明显降低,两者具有明显的平行关系，其它多种检测基因也表达异常。慢性口服给予LW(5 g/kg)使海马GR、MR表达水平低下得到明显改善，同时海马其它检测基因表达异常得到明显纠正。
SAMP8血浆CORT水平升高，与本实验所见海马GR、MR的表达水平明显降低相一致。因此，调节海马学习记忆有关基因的表达，恢复HPA轴的机能平衡可能是LW发挥益智作用的重要途径之一。
三、糖皮质激素对学习记忆的损伤作用与调节海马基因表达的关系
腹腔注射HC(15 mg/kg)连续3周, 学习记忆功能尚无明显改变, 但海马基因的表达水平已发生了明显变化,GR、MR、NCAM、PS-2、apoE明显降低, c-fos、tau 明显升高。继续给HC至8周, 学习记忆受到一定程度的损害, c-fos由高变低, GR、MR、NCAM、PS-2、apoE仍处于低水平。 给予较大剂量HC(30 mg/kg)连续2周, 学习记忆受到明显的损害, 海马GR、MR、c-fos、NCAM、PS-2、apoE明显低于对照组。继续给HC至4周, 上述变化更为明显。HC引起的海马基因表达的变化早于学习记忆功能障碍的出现，提示HC引起的学习记忆功能障碍与海马上述基因的异常表达具有密切关系。LW对HC引起的学习记忆功能障碍具有一定的改善作用，同时对HC引起的海马基因表达异常具有明显的纠正作用。
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进而我们观察了CORT对胚胎大鼠原代培养的海马神经元基因表达的影响。结果表明，CORT与海马神经元作用1h、6h和12h，MR、bcl-2、c-fos、NCAM、tau和APP的表达水平发生了明显变化。 MR、bcl-2的表达水平明显降低，tau的表达水平明显升高。c-fos、NCAM和APP的表达水平则先升后降。在本实验条件下，GR、PS-1、PS-2、apoE检测呈阴性。结果提示，GCs对神经元的损伤作用与上述基因表达异常尤其与MR具有密切的关系，基因表达水平的变化要早于神经元的损伤。
四、结语
本研究结果表明，SAMP8在增龄过程中学习记忆功能衰退与其海马多种基因表达异常密切相关，正常小鼠学习记忆行为变化与上述基因表达也存在一定的关系。给予外源性GCs，既可引起海马多种基因表达异常并损伤中枢学习记忆功能，又可直接引起胚胎大鼠原代培养的海马神经元内某些基因表达异常。LW对SAMP8及HC处理小鼠的中枢学习记忆功能衰退具有一定的改善作用，同时对其海马基因的异常表达具有明显的纠正作用。GR、MR、NCAM、PS-2和apoE的表达在SAMP8和HC处理小鼠海马内有共同的变化趋势。上述结果提示，中枢学习记忆的生理和病理过程与海马多种基因的表达具有密切关系，基因表达的变化早于学习记忆功能的变化，是糖皮质激素、LW等影响中枢学习记忆功能重要中介过程之一。
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及“九五”国家攀登计划预选项目资助课题
魏小龙，男，药理学专业。导师：周金黄研究员、张永祥研究员。论文答辩日期：1999年6月21日，答辩委员会主席：张均田研究员。
参考文献
1，Oitzl MS, Fluttert M, de kloet ER. Acute blockade of hippocampal glucocorticoid receptors facilitates spatial learning in rats. Brain Res, 1998, 797∶159～162.
2，Paylor R, Johnson RS, Papaioannou V, et al. Behavioral assessment of c-fos mutant mice. Brain Res, 1994, 651∶275～282.
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3，Reisberg B, Ferris SH, de Leon MJ, et al. Stage-specific behavioral, cognitive and in vivo changes in community residing subjects with age related memory impairment and primary degenerative dementia of the Alzheimer's disease. Drug Dev Res, 1988, 15∶101～114.
4，Poirier J. Apolipoprotein E in animal models of CNS injury and in Alzheimer's disease. Trends Neurosci, 1994, 17∶525～530.
5，Mandelkow EM, Biernat J, Drewes G, et al. Microtubule-associated protein tau, paired helical filaments, and phosphorylation. Ann NY Acad Sci, 1993, 695∶209～216.
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6，魏小龙，张永祥. 自身免疫反应与中枢学习记忆功能障碍. 中国药理学通报，1998, 14∶289～293.
7，O'Brien JT, Ames D, Schweitzer I, et al. Enhanced adrenal sensitivity to adrenocorticotrophic hormone (ACTH) is evidence of HPA axis hyperactivity in Alzheimer's disease. Psychol Med, 1996, 26∶7～14.
8，Balldin J, Blennow K, Gottfries CG, et al. Relationship between mental impairment and HPA axis activity in dementia disorders. Dementia, 1994, 5∶252～256.
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9，Takeda T. Senescence-accelerated mouse (SAM): with special reference to age-associated pathologies and their modulation. Nippon Eiseigaku Zasski, 1996, 51∶569～578.
10，Zhou JZ, Zhang YX, Zhou JH. Increased corticosterone levels in plasma and hippocampus and their relationship with hippocampal ATP depletion in senescence accelerated mice. Chin J Pharmacol Toxicol, 1998, 12∶12～15., 百拇医药