抗解浸膏抗菌、抗病毒作用的观察
作者：包 旭 包定元 李建农 杨 艳 叶利民
单位：华西医科大学药学院 成都 610044
关键词：抗解浸膏；抗菌作用；抗病毒作用
四川生理科学杂志990105
提 要 体外抗菌试验表明，抗解浸膏对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、甲及乙型溶血链球菌等革兰氏阳性细菌的MIC为1.56～56.0mg(生药)/ml，对大肠杆菌、克氏肺炎杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌和嗜血流感杆菌的MIC50为3.12～50.0mg(生药)/ml，对绿脓杆菌、产气杆菌的抑菌活性较低，MIC50和MIC90分别为50.0～200.0mg(生药)/ml，抗解浸膏还有一定的杀菌作用，MBC多数是MIC的2～4倍。抗解浸膏1∶40的浓度对流感病毒A3型在体外具有明显的抑制作用。
, 百拇医药
The observe of anti-bacterium and anti-virus effect of Kan Jie extract
Bao Xu，Bao Dingyuan，Li Jiannong，Yang Yan，Ye Limin
(School of Pharmacy，West China University of Medical Sciences Chengdu 610044)
Abstract The experiment in vitro showed that the MIC of Kan Jie extract for Staphylococcus aureus，Staphylococcus epidermidis，Streptococcus pneumoniae was 1.56～50.0mg(crude drug)/ml，the MIC50 for Bacillus coli，Klebsiella pneumoniae、proteus、Bacillus dysenteriae and Haemophilus influenzae was 3.12～50.0mg(crude drug)/ml，the MIC50 and MIC90 for Pseudomonas aeruginosia，Bacteria gas-producing was 50.0～200.0mg(crude drug)/ml.The Kan Jie extract could kill the bacterium，the MBC was 2～4 times of MIC. The Kan Jie extract of 1∶40 concentration could in hibite influenzae virus A3 in vitro.
, http://www.100md.com
Key words Kan Jie extract；anti-bacterium；anti-virus
抗解浸膏是由金银花、黄柏、连翘、板兰根、蒲公英等10多味中药组成的临床经验方，经现代制剂工艺路线研制而成，临床发现本方具有清热解毒、清利湿热的功能，对风热感冒、高热、咽喉肿痛等有较好疗效，本研究观察其抗菌和抗病毒作用，现报告如下。
1 实验材料
1.1 药物 抗解浸膏，每克浸膏相当于原生药3.87g，由成都××制药有限公司提供，批号：940204。
1.2 试验菌株 均为四川地区收集的临床分离致病菌株及部分保存菌株。其中金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、克氏肺炎杆菌各10株、肺炎链球菌、嗜血流感杆菌、甲型溶血性链球菌、肠球菌各5株，乙型溶血性链球菌7株，变形杆菌11株，痢疾杆菌6株，绿脓杆菌13株，产气杆菌3株，共计13种100株细菌，质控菌为金黄色葡萄球菌ATCC25923和大肠杆菌ATCC25922。
, http://www.100md.com
1.3 试验病毒株 A3型流感病毒，A3/蜀防93-5，3代，EID50＝7.0，四川省卫生防疫站提供。
1.4 培养基 选用MH(Mueller-Hinton)培养基，链球菌属和嗜血流感杆菌加10%兔血。
2 实验方法与结果
2.1 抗解浸膏体外抗菌活性测定 采用试管二倍稀释法测定受试浸膏对所试菌株的最低抑菌浓度(MIC)，细菌接种量为104CFU/ml，受试浸膏终浓度为200、100……3.12、1.56、0.78、0.39mg/ml(以生药量计)，菌液与各浓度受试浸膏混合，经37℃培养18小时后，未见细菌生长的受试浸膏的最低浓度即为MIC，再将未见细菌生长管的培养液移种于不含受试浸膏的琼脂平皿表面，再经37℃培养18小时，仍未见细菌生长的最低受试浸膏的浓度为最低杀菌浓度(MBC)，试验结果见表1。
, 百拇医药
表1 抗解片体外抗菌活性测定(mg(生药)/ml) 试验菌株
(株数)
MIC
MBC
范围*
50*
90*
范围
50
90
金黄色葡萄球菌(10)
3.12～25.0
, 百拇医药
6.25
25.0
12.5～50.0
12.5
50.0
表皮葡萄球菌(10)
3.12～50.0
12.5
50.0
6.25～100.0
50.0
100.0
, http://www.100md.com 肺炎链球菌(5)
1.56～6.25
3.12
6.25
3.12～12.5
6.25
12.5
乙型溶血链球菌(7)
3.12～50.0
12.5
50.0
6.25～100.0
, 百拇医药
25.0
100.0
甲型溶血链球菌(5)
3.12～25.0
6.25
25.0
6.25～100.0
25.0
100.0
肠球菌菌(5)
12.5～25.0
25.0
, 百拇医药
25.0
50.0～200.0
100.0
200.0
大肠杆菌(10)
3.12～25.0
6.25
25.0
6.25～100.0
12.5
50.0
克氏肺炎杆菌(10)
, 百拇医药
3.12～50.0
25.0
50.0
6.25～200.0
50.0
100.0
变形杆菌(11)
1.56～200.0
12.5
200.0
3.12～200.0
50.0
, 百拇医药
200.0
痢疾杆菌(6)
1.56～12.5
3.12
12.5
3.12～25.0
3.12
25.0
绿脓杆菌(13)
12.5～100.0
50.0
100.0
, 百拇医药
25.0～>200.0
100.0
>200.0
产气杆菌(3)
100.0～200.0
200.0
200.0
≥200.0
200.0
>200.0
嗜血流感杆菌(5)
25.0～100.0
, http://www.100md.com
25.0
100.0
100.0～200.0
100.0
200.0
* MIC(MBC)范围，MIC50(MBC50)、MIC90(MBC90)分别表示最低抑(杀)菌药物浓度范围和累积抑制(杀)50%和90%菌株的MIC(MBC)值。
表1的结果显示，抗解浸膏对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌及甲、乙型溶血性链球菌等革兰氏阳性致病菌均呈现较强的抑菌活性，最低抑菌浓度(MIC)的范围在1.56～50mg(生药)/ml的浓度；而3.12～50mg(生药)/ml的浓度可抑制50%以上所试验的大肠杆菌、克氏肺炎杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌和嗜血流感杆菌；但对绿脓杆菌和产气杆菌的抗菌作用较弱，MIC50分别为50mg(生药)/ml和200.0mg(生药)/ml。抗解浸膏对所试验的100株细菌亦呈现杀菌作用，最低杀菌浓度(MBC)与最低抑菌浓度的比值约为2～4倍。
, 百拇医药
2.2 抗解浸膏的体外抗病毒试验 将抗解浸膏的磷酸缓冲液(pH7.4)作对倍稀释成1∶10、1∶20、1∶40、1∶80的浓度，分别与每毫升含有107的流感病毒悬液(约为流感病毒半数感量)等量混匀，于37℃放置1.0小时，再以生理盐水稀释5倍，以0.2ml注入鸡胚尿囊腔中，每个浓度注射4个鸡胚，并以抗解浸膏稀释液(1∶10)和流感病毒稀释液同法注射作为对照，于37℃孵育48小时，收集各活胚尿囊液混合后作血凝试验，其结果见表2。表2 抗解片抗流感病毒试验 组 别
药物最终稀释度
鸡胚号
1
2
3
4
, 百拇医药
抗解片
1∶10
-
-
-
-
1∶20
-
-
-
-
1∶40
-
-
, http://www.100md.com
-
-
1∶80
-
＃
＃
＃
病毒对照(100EID50)
＃
＃
＃
＃
药物对照
, 百拇医药
1∶10
-
-
-
-
药物对照指未混合病毒的单一抗解片药液，“＃”表示病毒已繁殖，血凝与阳性。
由表2结果表明，抗解片在1∶40的浓度对100EID50 A3型流感病毒有明显的抑制作用，而抗解片对鸡胚发育无毒性作用。
3 讨论
病原微生物是引起传染、感染、感染变态反应等里热证候的条件，里热证是一个重要而常见的中医证型，主要包括现代医学的多种急性传染、感染性疾病，也包括了许多重要的非感染性疾病，其病因多为病原微生物所致急性感染，而许多清热药对多种病毒、细菌、真菌、螺旋体、原虫等均有不同程度的抑制作用，抗解片主要功能是清热解毒，为此观察其抗菌、抗病毒作用是颇有意义的，通过本实验观察，抗解浸膏确具有相当强度的体外抑菌作用，包括革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌，并且在高浓度时还可观察到其具有杀菌作用，这是由于药物的配伍或组成复方抗生作用范围可以互补、扩大以致协同增效[1]，所以它具有较为广谱的体外抗菌活性和一定的杀菌作用，我们也曾观察到每日给药一次，连续4次，抗解浸膏对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌感染小鼠有一定的保护作用。据报导[2]蒲公英等药味可破坏细菌的超微结构而影响其感染过程。另外实验研究也证明其在1∶40的稀释度以鸡胚法观察到它能抑制A3型流感病毒的生长，这可能与此方中含有黄柏、连翘等药味有关。
致谢：本研究得到张淑华副研、高巽坤教授、欧真容同志的帮助。
参考文献
[1] 王本祥，主编.现代中药药理学.天津科学技术出版社，1997∶199
[2] 刘锡光，等.大蒜、黄连、蒲公英对金黄色葡萄球菌作用的超微结构观察.中西医结合杂志，1986；6(12)∶373, 百拇医药
单位：华西医科大学药学院 成都 610044
关键词：抗解浸膏；抗菌作用；抗病毒作用
四川生理科学杂志990105
提 要 体外抗菌试验表明，抗解浸膏对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、甲及乙型溶血链球菌等革兰氏阳性细菌的MIC为1.56～56.0mg(生药)/ml，对大肠杆菌、克氏肺炎杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌和嗜血流感杆菌的MIC50为3.12～50.0mg(生药)/ml，对绿脓杆菌、产气杆菌的抑菌活性较低，MIC50和MIC90分别为50.0～200.0mg(生药)/ml，抗解浸膏还有一定的杀菌作用，MBC多数是MIC的2～4倍。抗解浸膏1∶40的浓度对流感病毒A3型在体外具有明显的抑制作用。
, 百拇医药
The observe of anti-bacterium and anti-virus effect of Kan Jie extract
Bao Xu，Bao Dingyuan，Li Jiannong，Yang Yan，Ye Limin
(School of Pharmacy，West China University of Medical Sciences Chengdu 610044)
Abstract The experiment in vitro showed that the MIC of Kan Jie extract for Staphylococcus aureus，Staphylococcus epidermidis，Streptococcus pneumoniae was 1.56～50.0mg(crude drug)/ml，the MIC50 for Bacillus coli，Klebsiella pneumoniae、proteus、Bacillus dysenteriae and Haemophilus influenzae was 3.12～50.0mg(crude drug)/ml，the MIC50 and MIC90 for Pseudomonas aeruginosia，Bacteria gas-producing was 50.0～200.0mg(crude drug)/ml.The Kan Jie extract could kill the bacterium，the MBC was 2～4 times of MIC. The Kan Jie extract of 1∶40 concentration could in hibite influenzae virus A3 in vitro.
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Key words Kan Jie extract；anti-bacterium；anti-virus
抗解浸膏是由金银花、黄柏、连翘、板兰根、蒲公英等10多味中药组成的临床经验方，经现代制剂工艺路线研制而成，临床发现本方具有清热解毒、清利湿热的功能，对风热感冒、高热、咽喉肿痛等有较好疗效，本研究观察其抗菌和抗病毒作用，现报告如下。
1 实验材料
1.1 药物 抗解浸膏，每克浸膏相当于原生药3.87g，由成都××制药有限公司提供，批号：940204。
1.2 试验菌株 均为四川地区收集的临床分离致病菌株及部分保存菌株。其中金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、克氏肺炎杆菌各10株、肺炎链球菌、嗜血流感杆菌、甲型溶血性链球菌、肠球菌各5株，乙型溶血性链球菌7株，变形杆菌11株，痢疾杆菌6株，绿脓杆菌13株，产气杆菌3株，共计13种100株细菌，质控菌为金黄色葡萄球菌ATCC25923和大肠杆菌ATCC25922。
, http://www.100md.com
1.3 试验病毒株 A3型流感病毒，A3/蜀防93-5，3代，EID50＝7.0，四川省卫生防疫站提供。
1.4 培养基 选用MH(Mueller-Hinton)培养基，链球菌属和嗜血流感杆菌加10%兔血。
2 实验方法与结果
2.1 抗解浸膏体外抗菌活性测定 采用试管二倍稀释法测定受试浸膏对所试菌株的最低抑菌浓度(MIC)，细菌接种量为104CFU/ml，受试浸膏终浓度为200、100……3.12、1.56、0.78、0.39mg/ml(以生药量计)，菌液与各浓度受试浸膏混合，经37℃培养18小时后，未见细菌生长的受试浸膏的最低浓度即为MIC，再将未见细菌生长管的培养液移种于不含受试浸膏的琼脂平皿表面，再经37℃培养18小时，仍未见细菌生长的最低受试浸膏的浓度为最低杀菌浓度(MBC)，试验结果见表1。
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表1 抗解片体外抗菌活性测定(mg(生药)/ml) 试验菌株
(株数)
MIC
MBC
范围*
50*
90*
范围
50
90
金黄色葡萄球菌(10)
3.12～25.0
, 百拇医药
6.25
25.0
12.5～50.0
12.5
50.0
表皮葡萄球菌(10)
3.12～50.0
12.5
50.0
6.25～100.0
50.0
100.0
, http://www.100md.com 肺炎链球菌(5)
1.56～6.25
3.12
6.25
3.12～12.5
6.25
12.5
乙型溶血链球菌(7)
3.12～50.0
12.5
50.0
6.25～100.0
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25.0
100.0
甲型溶血链球菌(5)
3.12～25.0
6.25
25.0
6.25～100.0
25.0
100.0
肠球菌菌(5)
12.5～25.0
25.0
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25.0
50.0～200.0
100.0
200.0
大肠杆菌(10)
3.12～25.0
6.25
25.0
6.25～100.0
12.5
50.0
克氏肺炎杆菌(10)
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3.12～50.0
25.0
50.0
6.25～200.0
50.0
100.0
变形杆菌(11)
1.56～200.0
12.5
200.0
3.12～200.0
50.0
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200.0
痢疾杆菌(6)
1.56～12.5
3.12
12.5
3.12～25.0
3.12
25.0
绿脓杆菌(13)
12.5～100.0
50.0
100.0
, 百拇医药
25.0～>200.0
100.0
>200.0
产气杆菌(3)
100.0～200.0
200.0
200.0
≥200.0
200.0
>200.0
嗜血流感杆菌(5)
25.0～100.0
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25.0
100.0
100.0～200.0
100.0
200.0
* MIC(MBC)范围，MIC50(MBC50)、MIC90(MBC90)分别表示最低抑(杀)菌药物浓度范围和累积抑制(杀)50%和90%菌株的MIC(MBC)值。
表1的结果显示，抗解浸膏对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌及甲、乙型溶血性链球菌等革兰氏阳性致病菌均呈现较强的抑菌活性，最低抑菌浓度(MIC)的范围在1.56～50mg(生药)/ml的浓度；而3.12～50mg(生药)/ml的浓度可抑制50%以上所试验的大肠杆菌、克氏肺炎杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌和嗜血流感杆菌；但对绿脓杆菌和产气杆菌的抗菌作用较弱，MIC50分别为50mg(生药)/ml和200.0mg(生药)/ml。抗解浸膏对所试验的100株细菌亦呈现杀菌作用，最低杀菌浓度(MBC)与最低抑菌浓度的比值约为2～4倍。
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2.2 抗解浸膏的体外抗病毒试验 将抗解浸膏的磷酸缓冲液(pH7.4)作对倍稀释成1∶10、1∶20、1∶40、1∶80的浓度，分别与每毫升含有107的流感病毒悬液(约为流感病毒半数感量)等量混匀，于37℃放置1.0小时，再以生理盐水稀释5倍，以0.2ml注入鸡胚尿囊腔中，每个浓度注射4个鸡胚，并以抗解浸膏稀释液(1∶10)和流感病毒稀释液同法注射作为对照，于37℃孵育48小时，收集各活胚尿囊液混合后作血凝试验，其结果见表2。表2 抗解片抗流感病毒试验 组 别
药物最终稀释度
鸡胚号
1
2
3
4
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抗解片
1∶10
-
-
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-
1∶20
-
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1∶40
-
-
, http://www.100md.com
-
-
1∶80
-
＃
＃
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病毒对照(100EID50)
＃
＃
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药物对照
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1∶10
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药物对照指未混合病毒的单一抗解片药液，“＃”表示病毒已繁殖，血凝与阳性。
由表2结果表明，抗解片在1∶40的浓度对100EID50 A3型流感病毒有明显的抑制作用，而抗解片对鸡胚发育无毒性作用。
3 讨论
病原微生物是引起传染、感染、感染变态反应等里热证候的条件，里热证是一个重要而常见的中医证型，主要包括现代医学的多种急性传染、感染性疾病，也包括了许多重要的非感染性疾病，其病因多为病原微生物所致急性感染，而许多清热药对多种病毒、细菌、真菌、螺旋体、原虫等均有不同程度的抑制作用，抗解片主要功能是清热解毒，为此观察其抗菌、抗病毒作用是颇有意义的，通过本实验观察，抗解浸膏确具有相当强度的体外抑菌作用，包括革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌，并且在高浓度时还可观察到其具有杀菌作用，这是由于药物的配伍或组成复方抗生作用范围可以互补、扩大以致协同增效[1]，所以它具有较为广谱的体外抗菌活性和一定的杀菌作用，我们也曾观察到每日给药一次，连续4次，抗解浸膏对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌感染小鼠有一定的保护作用。据报导[2]蒲公英等药味可破坏细菌的超微结构而影响其感染过程。另外实验研究也证明其在1∶40的稀释度以鸡胚法观察到它能抑制A3型流感病毒的生长，这可能与此方中含有黄柏、连翘等药味有关。
致谢：本研究得到张淑华副研、高巽坤教授、欧真容同志的帮助。
参考文献
[1] 王本祥，主编.现代中药药理学.天津科学技术出版社，1997∶199
[2] 刘锡光，等.大蒜、黄连、蒲公英对金黄色葡萄球菌作用的超微结构观察.中西医结合杂志，1986；6(12)∶373, 百拇医药