App17肽对糖尿病大鼠坐骨神经中钠-钾ATP酶活性的影响
作者：王昕 张人伶 孟卓 姬志娟 盛树力 晋志高
单位：王昕(中国中医研究院针灸研究所，北京100700)；张人伶(首都医科大学宣武医院 北京脑老化实验室，北京100053)；孟卓(中国中医研究院针灸研究所，北京100700)；姬志娟(首都医科大学宣武医院 北京脑老化实验室，北京100053)；盛树力(首都医科大学宣武医院 北京脑老化实验室，北京100053)；晋志高(中国中医研究院针灸研究所，北京100700)
关键词：
基础医学与临床000426 文章编号：1001-6352(2000)04-0030-01
App17肽是产生老年斑的主要成分b-淀粉样前体蛋白中具有促进神经轴突生长、突触形成作用的一个肽段。为探讨App17肽在治疗糖尿病大鼠神经病变中的作用，本研究用链脲佐菌素(STZ)诱发大鼠糖尿病，以坐骨神经中Na+-K+/ATPase作为检测手段，观察了App17肽对糖尿病大鼠的治疗效果。
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1 材料和方法
将Wistar大鼠24只，随机分为三组，正常组7只，糖尿病组9只，App17肽治疗组8只。除正常组外，其余均按60mg/kg体重的剂量腹腔注射链脲佐菌素(0.1mol/L柠檬酸缓冲液稀释为2%浓度)建立糖尿病模型。48h后，经血糖测定，浓度高于16.7mmol/L的被确定为造模成功的糖尿病大鼠。在饮水和饲料不加限制的情况下，把三组大鼠置于相同的条件下饲养和护理二个月后，每天经皮下给治疗组大鼠以App17肽(0.35mg/kg)治疗一个月。
大鼠在麻醉状态下，取出坐骨神经。三组大鼠的坐骨神经在同一条件下一批处理，按顺序放入10倍体积冷的匀浆液(pH 7.5，含0.2mol/L蔗糖，2.0mmol/L EDTA及0.02mol/L Tris-HCl中)，用医用高速组织匀浆机匀浆，15 000r/min直到充分磨匀。4℃ 100g离心5min，取出上清液以供测磷用。
A和B管最终反应混合液均为0.9mL，反应液成份(mmol/L)A管Tris-HCl 250，MgCl2 50，NaCl 100，KCl 150，哇巴因 10。B管中不加哇巴因，其余成份同A管。分别加入酶制备用100mL，于37 ℃预温10min，加入Na2ATP 40mmol/L，37 ℃温育10min，再加15% TCA终止反应，然后置冰浴10min，300g离心10min，取1mL上清液用波长700nm的光进行比色测磷。酶活性单位mmol Pi/mg Pr/h。
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2 结果与讨论
用链脲佐菌素导致大鼠糖尿病后，其坐骨神经中Na+-K+/ATPase活性显著低于正常组，分别为3.59±1.05(
±s, 下同)及7.27±0.45mmol Pi/mg Pr/h(P<0.01)。APP17肽治疗后，Na+-K+/ATPase恢复至近于正常为7.33±1.95mmol Pi/mg Pr/h，与糖尿病组比较P<0.01。
Na+-K+/ATPase广泛分布于各类细胞质膜上，它与神经肌肉兴奋性和传导性的保持，物质吸收和腺体的分泌等生理过程密切相关。大鼠在糖尿病时，都有“三多”现象，此时需要很多能量才能维持机体的平衡。因此能量消耗大大增加，致使ATP大量消耗，随着糖尿病持续到一定程度失代偿而使Na+-K+/ATPase活力降低。App17肽具有促进神经轴突生长、突触形成作用的一个肽段，用其直接作用于糖尿病大鼠，不仅可以改善末梢神经的脱髓鞘变，也必将对坐骨神经中Na+-K+/ATPase活性产生影响。从我们以往的实验证明，糖尿病大鼠背根神经节神经元胞浆内钙离子浓度较正常组大鼠明显升高，App17肽对这种上升有明显的抑制作用。因此我们推测防治Na+-K+/ATPase活性下降的作用与抑制钙离子上升也有关。对于其确切的作用途径尚有待于进一步探讨，以期为采用APP17肽治疗糖尿病的外周神经组织病变提供进一步的实验依据。
基金项目：北京市科委资助项目(No.951890600)
收稿日期：1999-10-26
修回日期：2000-02-17, http://www.100md.com
单位：王昕(中国中医研究院针灸研究所，北京100700)；张人伶(首都医科大学宣武医院 北京脑老化实验室，北京100053)；孟卓(中国中医研究院针灸研究所，北京100700)；姬志娟(首都医科大学宣武医院 北京脑老化实验室，北京100053)；盛树力(首都医科大学宣武医院 北京脑老化实验室，北京100053)；晋志高(中国中医研究院针灸研究所，北京100700)
关键词：
基础医学与临床000426 文章编号：1001-6352(2000)04-0030-01
App17肽是产生老年斑的主要成分b-淀粉样前体蛋白中具有促进神经轴突生长、突触形成作用的一个肽段。为探讨App17肽在治疗糖尿病大鼠神经病变中的作用，本研究用链脲佐菌素(STZ)诱发大鼠糖尿病，以坐骨神经中Na+-K+/ATPase作为检测手段，观察了App17肽对糖尿病大鼠的治疗效果。
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1 材料和方法
将Wistar大鼠24只，随机分为三组，正常组7只，糖尿病组9只，App17肽治疗组8只。除正常组外，其余均按60mg/kg体重的剂量腹腔注射链脲佐菌素(0.1mol/L柠檬酸缓冲液稀释为2%浓度)建立糖尿病模型。48h后，经血糖测定，浓度高于16.7mmol/L的被确定为造模成功的糖尿病大鼠。在饮水和饲料不加限制的情况下，把三组大鼠置于相同的条件下饲养和护理二个月后，每天经皮下给治疗组大鼠以App17肽(0.35mg/kg)治疗一个月。
大鼠在麻醉状态下，取出坐骨神经。三组大鼠的坐骨神经在同一条件下一批处理，按顺序放入10倍体积冷的匀浆液(pH 7.5，含0.2mol/L蔗糖，2.0mmol/L EDTA及0.02mol/L Tris-HCl中)，用医用高速组织匀浆机匀浆，15 000r/min直到充分磨匀。4℃ 100g离心5min，取出上清液以供测磷用。
A和B管最终反应混合液均为0.9mL，反应液成份(mmol/L)A管Tris-HCl 250，MgCl2 50，NaCl 100，KCl 150，哇巴因 10。B管中不加哇巴因，其余成份同A管。分别加入酶制备用100mL，于37 ℃预温10min，加入Na2ATP 40mmol/L，37 ℃温育10min，再加15% TCA终止反应，然后置冰浴10min，300g离心10min，取1mL上清液用波长700nm的光进行比色测磷。酶活性单位mmol Pi/mg Pr/h。
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2 结果与讨论
用链脲佐菌素导致大鼠糖尿病后，其坐骨神经中Na+-K+/ATPase活性显著低于正常组，分别为3.59±1.05(
±s, 下同)及7.27±0.45mmol Pi/mg Pr/h(P<0.01)。APP17肽治疗后，Na+-K+/ATPase恢复至近于正常为7.33±1.95mmol Pi/mg Pr/h，与糖尿病组比较P<0.01。Na+-K+/ATPase广泛分布于各类细胞质膜上，它与神经肌肉兴奋性和传导性的保持，物质吸收和腺体的分泌等生理过程密切相关。大鼠在糖尿病时，都有“三多”现象，此时需要很多能量才能维持机体的平衡。因此能量消耗大大增加，致使ATP大量消耗，随着糖尿病持续到一定程度失代偿而使Na+-K+/ATPase活力降低。App17肽具有促进神经轴突生长、突触形成作用的一个肽段，用其直接作用于糖尿病大鼠，不仅可以改善末梢神经的脱髓鞘变，也必将对坐骨神经中Na+-K+/ATPase活性产生影响。从我们以往的实验证明，糖尿病大鼠背根神经节神经元胞浆内钙离子浓度较正常组大鼠明显升高，App17肽对这种上升有明显的抑制作用。因此我们推测防治Na+-K+/ATPase活性下降的作用与抑制钙离子上升也有关。对于其确切的作用途径尚有待于进一步探讨，以期为采用APP17肽治疗糖尿病的外周神经组织病变提供进一步的实验依据。
基金项目：北京市科委资助项目(No.951890600)
收稿日期：1999-10-26
修回日期：2000-02-17, http://www.100md.com