维生素A缺乏对大鼠胚胎生长发育的影响樊建设
作者：朱清华
单位：同济医科大学公共卫生学院，武汉 430030
关键词：维生素A缺乏；大鼠胚胎；生长发育
维生素A缺乏对大鼠胚胎生长发育的影响摘要 本文观察了维生素A缺乏对大鼠胚胎生长发育的影响。结果显示：维生素A缺乏使胎鼠的体重，身长，尾长明显小于对照组，囟门明显大于对照组，且维生素A缺乏组第2、5、6胸骨残缺以及前爪骨化不完全者明显较多。脑淤血、脑水肿以及肾盂积水者也明显较多。维生素A缺乏严重地影响了大鼠胚胎的正常生长发育。
中图分类号 Q593.4 Q562
Effects of vitamin A deficiency on the development
and growth of rat embryos
, http://www.100md.com
Fan Jianshe,Zhu Qinghua
School of Public Health,Tongji Medical University，Wuhan 430030，China
Effects of vitamin A deficiency on the development and growth of rat embryos were studied.Serious vitamin A deficiency markedly reduce body weight,body length and tail length,and induce incomplete development of skeleton and induce pathological change of brain and kidney of rat fetus.It was concluded that the development and growth of the embryos was affected and the brain and the kidney of fetus were damaged in serious vitamin A deficient rats.
, 百拇医药
Key words: vitamin A deficiency,rat embryos,development and growth
维生素A(VA)在生长发育以及在维持机体正常生理功能方面都发挥重要作用。特别是与胚胎的形成发育密切相关[1]。它还能抑制恶性肿瘤细胞系的增殖，诱导某些细胞(如F9鼠胚胎瘤细胞、畸胎瘤干细胞及HL-60细胞系)的分化[2]。维生素A缺乏可导致暗适应力下降、夜盲症及干眼病等。近些年来的研究发现维生素A缺乏还可引起机体免疫力下降，感染性疾病增加，以及造血系统功能障碍等。严重的还导致胚胎畸形，主要累及的系统和器官包括眼、泌尿生殖道、膈、肺、神经系统等[3]。本实验主要是通过胎鼠的大体标本和骨骼标本观察维生素A缺乏对大鼠胚胎生长发育的影响，同时观察是否有畸形出现。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 动物模型及分组
采用清洁级Wistar雌性大鼠30只，雄性大鼠15只，体重55～65g,同济医科大学实验动物中心提供。全部采用不锈钢鼠笼喂养。常规适应性饲养一周后，将雌鼠按体重分层随机分为对照组(A组)和维生素A缺乏组(B组)。缺VA饲料按AOAC配方修改制成(见表1)。在以上饲料的基础上对照组每千克添加VA4000IU(1.2mg视黄醇)。雄鼠喂以普通饲料。各组自由进食进水，自然光照，湿度55%，室温20～25℃。每周观察维生素A缺乏组大鼠的一般表现，注意是否有维生素A缺乏症状。在实验第8周，按雌∶雄=2∶1合笼交配。第2天早晨查到阴栓或精子者记为怀孕的第0天。在怀孕的第21天，将孕鼠断头留取血标本，立刻剖腹取出胎鼠，计每只孕鼠的胚胎数、活胎数，观察有无畸胎；测量每只胎鼠的体重、身长、尾长、胎盘重量，分组进行统计分析。
表1 维生素A缺乏饲料配方
, 百拇医药
组分
百分含量(%)
酪蛋白(1)
20
玉米淀粉
65
玉米油
8
纤维素
1
维生素混合盐(2)
1
无机盐混合盐(3)
, 百拇医药
5
注：(1)无VA。(2)a:混合维生素配方(千克饲料含量)：VD3 1×105IU，VE 5×103IU，VB1 600mg，VB6 700mg，VB2 600mg，叶酸200mg，D-生物素20mg，VK 5mg,VB12 1mg，尼克酸3g，D-泛酸钙1.6g。
b:对照组饲料的混合维生素配方：除了a项内所有维生素外，包含VA 4000IU/kg饲料。
(3)混合无机盐配方(g/kg)：CaHPO4 500,NaCl 74,K3C6H5O7.12H2O 220,K2SO4 52,MnCO3(43%～48%)3.5,枸橼酸铁15，ZnCO3(70%)1.6，KIO3 0.01，CuCO3(53%～55Cu)0.3，Na2SeO3.5H2O 0.01，CrK(SO4)2.12H2O 0.55。
, 百拇医药
1.2 胎鼠骨骼、内脏标本的制作检查[4]
将每窝的半数胎鼠去皮、去内脏及颈背部脂肪，放入装有茜素红-S应用液的透明缸中染色6～48h，并轻摇1～2次/d，至头骨染红为宜，再放入透明液A中1～2d，然后放入透明液B中2～3d。待骨骼染红而软组织基本褪色时，将标本放入小平皿中，用透射光源在体视显微镜下作整体观察，然后逐步检查骨骼，包括头骨、囟门大小、胸骨、肋骨、脊椎、四肢骨。另一半胎鼠用Bouins溶液浸泡2～4周后，作内脏检验。
1.3 母鼠血清VA水平的测定
采用荧光法(日立公司F—3000型荧光分光光度计)测定孕鼠血清VA。VA标准购自Sigma公司。
1.4 统计处理
各组数据用平均数±标准差(x±s)表示，用t检验分析，对齐性检验不齐的资料进行t′检验。显著水平α=0.05。
, 百拇医药
2 实验结果
实验末期缺VA组(B)大鼠出现皮毛干枯、反应淡漠、少食少动、胡须脱落等维生素A缺乏症状。从表2可见，维生素A缺乏组孕鼠血清维生素A水平明显低于对照组(A)(P<0.01)。其胎儿体重、身长、尾长均明显小于对照组(P<0.05)。胎盘重量无显著性差异 。
表2 维生素A缺乏对孕鼠血清及胎儿体重、身长、尾长的影响
组别
孕鼠血清VA
胎鼠
n C/μmol.L-1
n
体重(g)
, 百拇医药
身长(cm)
尾长(cm)
胎盘重(g)
A
8
1.51±0.45
87
3.40±0.24
3.46±0.43
1.33±0.16
0.54±0.09
B
, http://www.100md.com 8
0.32±0.05
82
2.69±0.39
3.26±0.19
1.11±0.13
0.54±0.08
表3 维生素A缺乏与胎儿骨骼发育
组别
n
囟门大小
(cm2)
, http://www.100md.com
胸骨变化例数
前爪骨化变化例数
缺Ⅱ
缺Ⅴ
缺Ⅵ
正常
3个骨化点
正常
A
43
0.26×0.24
6
9
, 百拇医药
8
28
4
39
B
41
0.42×0.29
26
35
22
3
30
11
从表3可见，缺VA胎鼠的骨骼发育明显滞后于对照组，骨骼发育不良胎仔数明显多于对照组。表4 维生素A缺乏对脑肾的影响
, 百拇医药
组别
n
脑
肾
淤血
水肿
正常
肾盂积水
正常
A
44
4
0
40
, 百拇医药
2
42
B
41
15
8
18
18
23
从表4可见，缺VA组胎鼠的脑积水、脑淤血、肾孟积水明显多于对照组。提示：VA缺乏可能对脑，肾组织有影响。腭、舌、唇、眼、脊髓、心、肺、肝、生殖器官、膀胱，肉眼未检查出明显异常。
3 讨论
, http://www.100md.com 维生素A对于维持正常的视觉功能、生长发育、细胞分化、生殖及免疫系统的完整性是必不可少的。维生素A缺乏会导致暗适应力下降、生长迟滞、睾丸、卵巢等器官萎缩、上皮细胞角化过度等[5]。母体维生素A供应不足时，胎儿发育不良，严重的维生素A供应不足则可导致胎儿流产或吸收，甚至可致不孕。严重的维生素A缺乏会导致一系列畸形：如小眼或无眼、前肢畸形裂面上腭发育不全等等。但是，这些影响在实验室条件下很难观察到[1]。
哺乳动物通过对母体维生素A水平的调节来避免胎儿的缺乏。当维生素A供应不足时，母体储存的维生素A不会下降到一个非常低水平直至耗竭自身来满足胎儿。本实验结果表明：长期维生素A缺乏或不足，可致大鼠胚胎生长发育不良，骨骼发育不全甚至影响内脏发育，提示孕妇应该适量注意补充维生素A。
*国家“九.五”攻关课题(子课题，编号：96-904-06-06)
, 百拇医药
作者简介：樊建设，男，硕士，副教授
参考文献
1.Morriss-Kay,G.M.,Sokolova,N.Embryonic development and pattern formation.FASEB J，1996,10(9):961—968
2.雷薇，吴闵.维甲酸对增殖分化调节的分子机制.国外医学*分子生物学分册，1994，16(2)：83—86
3.Zile MH.Vitamin A and embryonic development.J Nutr.1998,128(2):452—455
4.GB 15193.14—94 致畸实验
5.付中滇.视黄醇类对细胞生长的调节.国外医学*卫生学分册，1985，3：150—153
1999-01-11收稿, 百拇医药
单位：同济医科大学公共卫生学院，武汉 430030
关键词：维生素A缺乏；大鼠胚胎；生长发育
维生素A缺乏对大鼠胚胎生长发育的影响摘要 本文观察了维生素A缺乏对大鼠胚胎生长发育的影响。结果显示：维生素A缺乏使胎鼠的体重，身长，尾长明显小于对照组，囟门明显大于对照组，且维生素A缺乏组第2、5、6胸骨残缺以及前爪骨化不完全者明显较多。脑淤血、脑水肿以及肾盂积水者也明显较多。维生素A缺乏严重地影响了大鼠胚胎的正常生长发育。
中图分类号 Q593.4 Q562
Effects of vitamin A deficiency on the development
and growth of rat embryos
, http://www.100md.com
Fan Jianshe,Zhu Qinghua
School of Public Health,Tongji Medical University，Wuhan 430030，China
Effects of vitamin A deficiency on the development and growth of rat embryos were studied.Serious vitamin A deficiency markedly reduce body weight,body length and tail length,and induce incomplete development of skeleton and induce pathological change of brain and kidney of rat fetus.It was concluded that the development and growth of the embryos was affected and the brain and the kidney of fetus were damaged in serious vitamin A deficient rats.
, 百拇医药
Key words: vitamin A deficiency,rat embryos,development and growth
维生素A(VA)在生长发育以及在维持机体正常生理功能方面都发挥重要作用。特别是与胚胎的形成发育密切相关[1]。它还能抑制恶性肿瘤细胞系的增殖，诱导某些细胞(如F9鼠胚胎瘤细胞、畸胎瘤干细胞及HL-60细胞系)的分化[2]。维生素A缺乏可导致暗适应力下降、夜盲症及干眼病等。近些年来的研究发现维生素A缺乏还可引起机体免疫力下降，感染性疾病增加，以及造血系统功能障碍等。严重的还导致胚胎畸形，主要累及的系统和器官包括眼、泌尿生殖道、膈、肺、神经系统等[3]。本实验主要是通过胎鼠的大体标本和骨骼标本观察维生素A缺乏对大鼠胚胎生长发育的影响，同时观察是否有畸形出现。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 动物模型及分组
采用清洁级Wistar雌性大鼠30只，雄性大鼠15只，体重55～65g,同济医科大学实验动物中心提供。全部采用不锈钢鼠笼喂养。常规适应性饲养一周后，将雌鼠按体重分层随机分为对照组(A组)和维生素A缺乏组(B组)。缺VA饲料按AOAC配方修改制成(见表1)。在以上饲料的基础上对照组每千克添加VA4000IU(1.2mg视黄醇)。雄鼠喂以普通饲料。各组自由进食进水，自然光照，湿度55%，室温20～25℃。每周观察维生素A缺乏组大鼠的一般表现，注意是否有维生素A缺乏症状。在实验第8周，按雌∶雄=2∶1合笼交配。第2天早晨查到阴栓或精子者记为怀孕的第0天。在怀孕的第21天，将孕鼠断头留取血标本，立刻剖腹取出胎鼠，计每只孕鼠的胚胎数、活胎数，观察有无畸胎；测量每只胎鼠的体重、身长、尾长、胎盘重量，分组进行统计分析。
表1 维生素A缺乏饲料配方
, 百拇医药
组分
百分含量(%)
酪蛋白(1)
20
玉米淀粉
65
玉米油
8
纤维素
1
维生素混合盐(2)
1
无机盐混合盐(3)
, 百拇医药
5
注：(1)无VA。(2)a:混合维生素配方(千克饲料含量)：VD3 1×105IU，VE 5×103IU，VB1 600mg，VB6 700mg，VB2 600mg，叶酸200mg，D-生物素20mg，VK 5mg,VB12 1mg，尼克酸3g，D-泛酸钙1.6g。
b:对照组饲料的混合维生素配方：除了a项内所有维生素外，包含VA 4000IU/kg饲料。
(3)混合无机盐配方(g/kg)：CaHPO4 500,NaCl 74,K3C6H5O7.12H2O 220,K2SO4 52,MnCO3(43%～48%)3.5,枸橼酸铁15，ZnCO3(70%)1.6，KIO3 0.01，CuCO3(53%～55Cu)0.3，Na2SeO3.5H2O 0.01，CrK(SO4)2.12H2O 0.55。
, 百拇医药
1.2 胎鼠骨骼、内脏标本的制作检查[4]
将每窝的半数胎鼠去皮、去内脏及颈背部脂肪，放入装有茜素红-S应用液的透明缸中染色6～48h，并轻摇1～2次/d，至头骨染红为宜，再放入透明液A中1～2d，然后放入透明液B中2～3d。待骨骼染红而软组织基本褪色时，将标本放入小平皿中，用透射光源在体视显微镜下作整体观察，然后逐步检查骨骼，包括头骨、囟门大小、胸骨、肋骨、脊椎、四肢骨。另一半胎鼠用Bouins溶液浸泡2～4周后，作内脏检验。
1.3 母鼠血清VA水平的测定
采用荧光法(日立公司F—3000型荧光分光光度计)测定孕鼠血清VA。VA标准购自Sigma公司。
1.4 统计处理
各组数据用平均数±标准差(x±s)表示，用t检验分析，对齐性检验不齐的资料进行t′检验。显著水平α=0.05。
, 百拇医药
2 实验结果
实验末期缺VA组(B)大鼠出现皮毛干枯、反应淡漠、少食少动、胡须脱落等维生素A缺乏症状。从表2可见，维生素A缺乏组孕鼠血清维生素A水平明显低于对照组(A)(P<0.01)。其胎儿体重、身长、尾长均明显小于对照组(P<0.05)。胎盘重量无显著性差异 。
表2 维生素A缺乏对孕鼠血清及胎儿体重、身长、尾长的影响
组别
孕鼠血清VA
胎鼠
n C/μmol.L-1
n
体重(g)
, 百拇医药
身长(cm)
尾长(cm)
胎盘重(g)
A
8
1.51±0.45
87
3.40±0.24
3.46±0.43
1.33±0.16
0.54±0.09
B
, http://www.100md.com 8
0.32±0.05
82
2.69±0.39
3.26±0.19
1.11±0.13
0.54±0.08
表3 维生素A缺乏与胎儿骨骼发育
组别
n
囟门大小
(cm2)
, http://www.100md.com
胸骨变化例数
前爪骨化变化例数
缺Ⅱ
缺Ⅴ
缺Ⅵ
正常
3个骨化点
正常
A
43
0.26×0.24
6
9
, 百拇医药
8
28
4
39
B
41
0.42×0.29
26
35
22
3
30
11
从表3可见，缺VA胎鼠的骨骼发育明显滞后于对照组，骨骼发育不良胎仔数明显多于对照组。表4 维生素A缺乏对脑肾的影响
, 百拇医药
组别
n
脑
肾
淤血
水肿
正常
肾盂积水
正常
A
44
4
0
40
, 百拇医药
2
42
B
41
15
8
18
18
23
从表4可见，缺VA组胎鼠的脑积水、脑淤血、肾孟积水明显多于对照组。提示：VA缺乏可能对脑，肾组织有影响。腭、舌、唇、眼、脊髓、心、肺、肝、生殖器官、膀胱，肉眼未检查出明显异常。
3 讨论
, http://www.100md.com 维生素A对于维持正常的视觉功能、生长发育、细胞分化、生殖及免疫系统的完整性是必不可少的。维生素A缺乏会导致暗适应力下降、生长迟滞、睾丸、卵巢等器官萎缩、上皮细胞角化过度等[5]。母体维生素A供应不足时，胎儿发育不良，严重的维生素A供应不足则可导致胎儿流产或吸收，甚至可致不孕。严重的维生素A缺乏会导致一系列畸形：如小眼或无眼、前肢畸形裂面上腭发育不全等等。但是，这些影响在实验室条件下很难观察到[1]。
哺乳动物通过对母体维生素A水平的调节来避免胎儿的缺乏。当维生素A供应不足时，母体储存的维生素A不会下降到一个非常低水平直至耗竭自身来满足胎儿。本实验结果表明：长期维生素A缺乏或不足，可致大鼠胚胎生长发育不良，骨骼发育不全甚至影响内脏发育，提示孕妇应该适量注意补充维生素A。
*国家“九.五”攻关课题(子课题，编号：96-904-06-06)
, 百拇医药
作者简介：樊建设，男，硕士，副教授
参考文献
1.Morriss-Kay,G.M.,Sokolova,N.Embryonic development and pattern formation.FASEB J，1996,10(9):961—968
2.雷薇，吴闵.维甲酸对增殖分化调节的分子机制.国外医学*分子生物学分册，1994，16(2)：83—86
3.Zile MH.Vitamin A and embryonic development.J Nutr.1998,128(2):452—455
4.GB 15193.14—94 致畸实验
5.付中滇.视黄醇类对细胞生长的调节.国外医学*卫生学分册，1985，3：150—153
1999-01-11收稿, 百拇医药