酸浆果多糖的提取及含量测定
作者：周静 李艳 薛梅 鲁建江 孙萍
单位：周静(石河子大学医学院药学系 石河子832002)；李艳(石河子大学医学院药学系 石河子832002)；薛梅(石河子大学医学院药学系 石河子832002)；鲁建江(石河子大学医学院药学系 石河子832002)；孙萍(石河子大学医学院药学系 石河子832002)
关键词：
数理医药学杂志000333
中图分类号：TQ 464.1 文献标识码：B
文章编号：1004-4337(2000)03-0242-02
酸浆(Physalis alkekengi L.var.franchetii)为茄科酸浆属多年生草本植物，果实为园球形浆果，成熟时呈橙红色，外有膨大的花萼如灯笼状疏松地包围在浆果之外，故又有红姑娘、挂金灯、锦灯笼等美称。我国许多地区都有分布，各地亦有栽培，其根、全草及果实均可入药。其性味甘、酸、寒，有清凉、消肿、利尿、止咳、化痰之功效，是常用的清热解毒药，历代本草多有记述。民间亦有用酸浆及酸浆属植物治疗膀胱癌及食管癌之验方，国外抗癌划药中常用此品。
, http://www.100md.com
酸浆浆果酸甘可食，可作水果，营养丰富。本实验对酸浆果实用石油醚、乙醚除去酯溶性杂质，用80%乙醇提取除去所含单糖、低聚糖及甙类等干扰性成分后，再用水提醇沉法制得酸浆果粗多糖，并采用酚-硫酸比色法对其多糖含量进行测定。
1 仪器、试剂及样品
紫外分光光度计；索氏提取器；(+)葡萄糖AR105℃干燥重；苯酚AR；硫酸AR；酸浆果实，破碎后晾干备用。
2 标准曲线的绘制
2.1 标准葡萄糖溶液的配制
精密称取干燥恒重的葡萄糖25.2mg，加适量水溶解，转移至250ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成浓度为100.8ug/ml标准葡萄糖溶液备用。
2.2 5%苯酚试剂的配制
, 百拇医药
取苯酚100g,加铝片0.1g和NaHCO3 0.05g，蒸馏，收集182℃馏份，称取7.5g，加水150ml溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。
2.3 标准曲线绘制
精密量取葡萄糖标准溶液0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7ml置干燥试管中，分别加水使成1.0ml，再分别加入5%苯酚溶液1.6ml，摇匀，然后加浓H2SO4 7.0ml，充分摇匀，室温放置25min,在490nm处测定其吸光度，同时做一空白。结果见表1。
表1 葡萄糖标准液不同浓度的吸光度值 葡萄糖标准液(ml)
0
0.1
0.2
, 百拇医药
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
浓度(μg/ml)
0
1.05
2.10
3.15
4.20
5.25
6.30
, 百拇医药
7.35
吸光度值A
0
0.0735
0.1458
0.2235
0.2945
0.3798
0.4420
0.4973
将上述实验数据做回归处理得回归方程：
A=0.06871C+5.1857×10-3， r=0.99863 多糖的提取及精制
, 百拇医药
晾干的酸浆果实剪碎后，称取100g，置索氏提取器中，依次用石油醚(30～60℃)、乙醚和80%乙醇回流提取4h。残渣挥干溶剂后，再以水回流提取4h，减压浓缩至一半体积，加入0.1%活性炭，脱色，过滤，滤液加入95%乙醇使溶液含醇80%，静置过夜，过滤，残渣用乙醚、无水乙醇反复洗涤，得酸浆果多糖。60℃烘干备用。
4 换算因素测定
精确称取60℃干燥恒重的酸浆果多糖20mg，水溶解后定容到100ml容量瓶中，摇匀，做为多糖储备液。
精确量取多糖储备液0.2ml，加水至1ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值。按下式计算换算因素：
f=W/CD
式中，W为多糖重量(μg),C为多糖液中葡萄糖的浓度(μg/ml)，D为多糖的稀释因素，测得f=3.42。
, 百拇医药
5 样品测定
精密称取酸浆粉末0.2g，用80%乙醇浸泡过夜，再于索氏提取器中用80%乙醇回流2h，残渣挥去溶剂后，继续用水回流2h，反复洗至250ml容量瓶中，定容，摇匀成为样品液。测定时，精密吸取样品液1ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按下式计算多糖含量：
多糖含量%=CDF/W×100
式中，C为样品溶液的葡萄糖浓度(μg/ml),D为样品溶液的稀释因素，F为换算因素，W为样品的重量(μg)，测得结果为8.90%。
6 回收率测定
精密称取酸浆粉末0.15g，精密加入酸浆果多糖7mg，再于索氏提取器中用80%乙醇回流2h，残渣溶剂挥去后，连续用水回流2h，反复洗至250ml容量瓶中定容。摇匀后，精确移取1ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按样品测定同样的方法进行提取和测定。计算多糖含量，换算回收率为104.1%。
, 百拇医药
7 讨论
多糖广泛存在于自然界，具有多种生物活性，是理想的免疫增强剂，它能提高机体免疫系统的功能，不仅能促进T细胞、B细胞、NK细胞、MΦ细胞等免疫细胞的功能，还能促进白间素、干扰素、肿瘤坏死因子等细胞因子的产生。目前对多糖的研究方兴未艾，多糖的作用机理以及生物功能与结构的关系的研究不断深入，而且不断有新的多糖物质被发现，但酸浆果多糖尚未见报导。我们首次从酸浆果实中提取出酸浆果多糖，并对其含量进行了测定。酸浆果多糖的结构组成和生理活性有待进一步研究。
参考文献
1，常毅敏著.抗癌本草.长沙：湖南科学技术出版社，1989，319.
2，倪慧，何爱华.新疆枸杞多糖的提取及含量测定.中成药，1993，15(1)：39.
3，李好枝，吕永俊，白钢，等.松果有效成分的研究Ⅲ油松果多糖的含量测定.中草药，1994，25(4)：185.
收稿日期：1999-11-10, 百拇医药
单位：周静(石河子大学医学院药学系 石河子832002)；李艳(石河子大学医学院药学系 石河子832002)；薛梅(石河子大学医学院药学系 石河子832002)；鲁建江(石河子大学医学院药学系 石河子832002)；孙萍(石河子大学医学院药学系 石河子832002)
关键词：
数理医药学杂志000333
中图分类号：TQ 464.1 文献标识码：B
文章编号：1004-4337(2000)03-0242-02
酸浆(Physalis alkekengi L.var.franchetii)为茄科酸浆属多年生草本植物，果实为园球形浆果，成熟时呈橙红色，外有膨大的花萼如灯笼状疏松地包围在浆果之外，故又有红姑娘、挂金灯、锦灯笼等美称。我国许多地区都有分布，各地亦有栽培，其根、全草及果实均可入药。其性味甘、酸、寒，有清凉、消肿、利尿、止咳、化痰之功效，是常用的清热解毒药，历代本草多有记述。民间亦有用酸浆及酸浆属植物治疗膀胱癌及食管癌之验方，国外抗癌划药中常用此品。
, http://www.100md.com
酸浆浆果酸甘可食，可作水果，营养丰富。本实验对酸浆果实用石油醚、乙醚除去酯溶性杂质，用80%乙醇提取除去所含单糖、低聚糖及甙类等干扰性成分后，再用水提醇沉法制得酸浆果粗多糖，并采用酚-硫酸比色法对其多糖含量进行测定。
1 仪器、试剂及样品
紫外分光光度计；索氏提取器；(+)葡萄糖AR105℃干燥重；苯酚AR；硫酸AR；酸浆果实，破碎后晾干备用。
2 标准曲线的绘制
2.1 标准葡萄糖溶液的配制
精密称取干燥恒重的葡萄糖25.2mg，加适量水溶解，转移至250ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成浓度为100.8ug/ml标准葡萄糖溶液备用。
2.2 5%苯酚试剂的配制
, 百拇医药
取苯酚100g,加铝片0.1g和NaHCO3 0.05g，蒸馏，收集182℃馏份，称取7.5g，加水150ml溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。
2.3 标准曲线绘制
精密量取葡萄糖标准溶液0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7ml置干燥试管中，分别加水使成1.0ml，再分别加入5%苯酚溶液1.6ml，摇匀，然后加浓H2SO4 7.0ml，充分摇匀，室温放置25min,在490nm处测定其吸光度，同时做一空白。结果见表1。
表1 葡萄糖标准液不同浓度的吸光度值 葡萄糖标准液(ml)
0
0.1
0.2
, 百拇医药
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
浓度(μg/ml)
0
1.05
2.10
3.15
4.20
5.25
6.30
, 百拇医药
7.35
吸光度值A
0
0.0735
0.1458
0.2235
0.2945
0.3798
0.4420
0.4973
将上述实验数据做回归处理得回归方程：
A=0.06871C+5.1857×10-3， r=0.99863 多糖的提取及精制
, 百拇医药
晾干的酸浆果实剪碎后，称取100g，置索氏提取器中，依次用石油醚(30～60℃)、乙醚和80%乙醇回流提取4h。残渣挥干溶剂后，再以水回流提取4h，减压浓缩至一半体积，加入0.1%活性炭，脱色，过滤，滤液加入95%乙醇使溶液含醇80%，静置过夜，过滤，残渣用乙醚、无水乙醇反复洗涤，得酸浆果多糖。60℃烘干备用。
4 换算因素测定
精确称取60℃干燥恒重的酸浆果多糖20mg，水溶解后定容到100ml容量瓶中，摇匀，做为多糖储备液。
精确量取多糖储备液0.2ml，加水至1ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值。按下式计算换算因素：
f=W/CD
式中，W为多糖重量(μg),C为多糖液中葡萄糖的浓度(μg/ml)，D为多糖的稀释因素，测得f=3.42。
, 百拇医药
5 样品测定
精密称取酸浆粉末0.2g，用80%乙醇浸泡过夜，再于索氏提取器中用80%乙醇回流2h，残渣挥去溶剂后，继续用水回流2h，反复洗至250ml容量瓶中，定容，摇匀成为样品液。测定时，精密吸取样品液1ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按下式计算多糖含量：
多糖含量%=CDF/W×100
式中，C为样品溶液的葡萄糖浓度(μg/ml),D为样品溶液的稀释因素，F为换算因素，W为样品的重量(μg)，测得结果为8.90%。
6 回收率测定
精密称取酸浆粉末0.15g，精密加入酸浆果多糖7mg，再于索氏提取器中用80%乙醇回流2h，残渣溶剂挥去后，连续用水回流2h，反复洗至250ml容量瓶中定容。摇匀后，精确移取1ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按样品测定同样的方法进行提取和测定。计算多糖含量，换算回收率为104.1%。
, 百拇医药
7 讨论
多糖广泛存在于自然界，具有多种生物活性，是理想的免疫增强剂，它能提高机体免疫系统的功能，不仅能促进T细胞、B细胞、NK细胞、MΦ细胞等免疫细胞的功能，还能促进白间素、干扰素、肿瘤坏死因子等细胞因子的产生。目前对多糖的研究方兴未艾，多糖的作用机理以及生物功能与结构的关系的研究不断深入，而且不断有新的多糖物质被发现，但酸浆果多糖尚未见报导。我们首次从酸浆果实中提取出酸浆果多糖，并对其含量进行了测定。酸浆果多糖的结构组成和生理活性有待进一步研究。
参考文献
1，常毅敏著.抗癌本草.长沙：湖南科学技术出版社，1989，319.
2，倪慧，何爱华.新疆枸杞多糖的提取及含量测定.中成药，1993，15(1)：39.
3，李好枝，吕永俊，白钢，等.松果有效成分的研究Ⅲ油松果多糖的含量测定.中草药，1994，25(4)：185.
收稿日期：1999-11-10, 百拇医药