5种中药注射液对脂质过氧化及活性氧自由基作用的影响
作者：谢云峰 龙盛京
单位：广西医科大学化学教研室
关键词：丹皮酚；柴胡；当归；天麻；夏天无；过氧化脂质；化学发光分析
海峡药学990319 摘要 本文用比色法和化学发光分析法测定丹皮酚、柴胡、当归、天麻、夏天无注射液对大鼠肝匀浆过氧化脂质(LPO)影响及对H2O2-鲁米诺发光体系中H2O2的清除作用。体外实验结果表明：5种中药注射液均可抑制大鼠肝匀浆在37℃振荡温浴条件下引起的丙二醛升高，与对照组相比有显著性差异(P<0.01)；对H2O2有不同程度的清除作用。说明5种注射液有抗氧化作用，其抗炎作用可能与抗氧化作用有关。
The Effects of Five Chinese Drug s injection on
, 百拇医药
Lipid Peroxidation and Active Oxygen Ra dicals
Xie Yunfeng， Long Shengjing
(Department of The Chemistry,Guangxi Med ical University)
The Colorimetric method and c hemi luminescence method were used in this re search to investigate the effects of Api opaeonoside.Bupleurum Chinense DC,Angeli ca sinensis(oliv)Diels,Rhizoma Gastrodia e and Corydalis decumbens(Thunb.)pers.on l ip id peroxidation(Lpo)on rat liver homogen ate and scavenging effects on H2O2 in H2O2/luminol system were researehed.The resul ts were a s follow：Five Chinese drugs injection ef fectively inhibited MDA formation induce d by incubating rat liver homogenate at 37℃(P<0.01).Five Chinese drugs injection also significantly scavenged H2O2.The results suggest that five Chinese drugs injection may be used as anti-oxidation ，their anti-inflation effect maybe relat e to anti-oxidation effect.
, 百拇医药
Key words Apiopaeonoside Bupleuru m chi nense DC Angelica sinsnsis(oliv)Diels Rh izoma Gastrodiae Corydalis decumbens(Thu nb)pers Lipid peroxide Chemiluminescence method
丹皮酚、柴胡、当归、天麻、夏天无5种注射液均为临床上常用治疗炎症药物[1]。为探讨其抗炎作用机理是否与清除自由基引发的脂质过氧化及活性氧有关。本文用比色法测定5种注射液对脂质过氧化作用的影响，并用化学发光分析法测定其对H2O2的清除作用。
1 材料与方法
1.1 受试药物 所用药物均购自南宁市医药公司；丹皮酚注射液(5mg/ml)，上海第一生化药业公司生产，批号950401；柴胡注射液(1g/ml)，江西春峰制药厂生产，批号90061401；5%当归注射液，江西春峰制药厂生产，批号96062701；25%天麻注射液，上海北杰集团蛟河关东药业有限公司生产，批号970109；夏天无注射液(0.5mg/ml)，江西余江制药厂生产，批号970704。
, 百拇医药
1.2 试剂 硫代巴比妥酸(TBA)和1.1.3.3-四乙氧基丙烷(TEP)为Sigma公司产品；鲁米诺(luminol)为德国Merck-Schuchrat公司产品；溴代十六烷基三甲胺(CTMAB)，双氧水，碳酸钠，碳酸氢钠均为国产分析纯试剂。所用水均为双蒸水。
1.3 动物 Wistar大白鼠由本校动物中心提供体重250～300g。
1.4 仪器 岛津UV-120-02型紫外可见光光度计；DG3030发光光度计；HZD010恒温水浴振荡器。
1.5 方法 1.5.1肝匀浆制备[2]：将大鼠断头处死，立即取出肝脏，用pH＝7.4的PBS溶液150ml分3次洗去表面残血，并用滤纸吸干，然后用此PBS溶液制成5%肝匀浆。1.5.2脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的测定[3]：取5%肝匀浆1.5ml，加入不同体积的受试药物，以双蒸水代替药物作为阴性对照，1%维生素C作为阳性对照，于37℃水浴振荡50min，加20%三氯乙酸2ml，混匀，加0.67%TBA1ml于100℃加热10min冷却后离心3000转/min，10min，取上清液置532nm处比色，用TEP做标准品，计算每克肝组织(湿重)MDA的生成量。1.5.3 药物对H2O2的清除作用：参照文献[4]的方法，在测定管中依次加入10mmol/LH2O210μl，pH＝10.77，0.2mol/L碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液50μl混合后置仪器测定室中于37℃加入5mmol/L鲁米诺和10mmol/LCTMAB1∶1等量混合液500 μl，启动反应后测定10s内发光强度的平均值。加入不同体积的受试药物后计算其清除率。空白对照以双蒸水代替药物。1.5.4计算方法：用清除率来表示药物清除H2O2作用的大小，从量效关系曲线回归方程计算出50%清除率所需药物的毫升数为CI50。
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清除率%＝(空白对照值-药物值)/空白对照值×100%。经PEMS软件包处理，组间显著性差异用t检验。
2 结 果
2.1 5种注射液对肝匀浆脂质过氧化物生成的影响 大鼠肝匀浆在37℃温浴一定时间后，脂质过氧化产物明显升高。当受试药物与肝匀浆在体外共同温浴后，其丙二醛含量明显少于对照组(P<0.01)(见表1)。
表1 5种注射液对大鼠肝匀浆脂质过氧化的影响
(MDAnmol/g肝湿重，x±S) 组 别
药 物 剂 量 μl
0.00
100
, 百拇医药 300
500
柴胡注射液
-
154.45±3.43
148.11±2.65
139.15±2.37
夏天无注射液
-
157.77±2.42
145.28±2.79
125.66±4.03
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丹皮酚注射液
-
131.00±4.88
160.45±4.13
169.83±2.93
当归注射液
-
113.86±2.35
145.66±2.12
189.89±3.52
天麻注射液
-
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57.21±1.41
76.62±3.26
113.94±6.85
1%维生素C
-
84.90±2.30
75.30±1.83
66.62±2.77
对照组
193.94±1.52
-
-
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-
注：各剂量组与对照组比较 P<0.01，n=6
2.2 5种注射液对H2O2的清除作用 5种注射液对H2O2的清除作用在5～100μl剂量范围内呈浓度依赖性关系。从CI50来看，丹皮酚清除H2O2作用最强，其次为夏天无注射液及柴胡注射液，当归注射液及天麻注射液清除作用较弱(见表2)。
表2 5种注射液对H2O2的清除作用 组 别
清除率(%)
CI50
, 百拇医药 1μl
3μl
5μl
10μl
50μl
100μl
(μl)
丹皮酚注射液
-
-
26.00
45.30
67.00
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17.06
夏天无注射液
-
-
-
29.20
66.70
88.20
23.50
柴胡注射液
-
-
-
, http://www.100md.com
24.30
67.70
94.00
24.59
当归注射液
-
-
-
15.90
48.40
64.10
52.07
天麻注射液
, 百拇医药
-
-
-
18.70
49.80
70.70
59.07
0.5%维生素C
25.90
56.10
79.60
-
-
, 百拇医药
-
2.19
3 讨 论
3.1 据报道活性氧和脂质过氧化反应对组织细胞的损伤是炎症或多种疾病的生化基础[5]。因此测定受试中药对过氧化脂质LPO代谢终产物丙二醛(MDA)生成的影响及对H2O2-鲁米诺发光体系中H2O2的清除作用，对研究受试中药抗炎作用与抗氧化作用关系具有重要意义。我们在实验中观察到5种中药注射液与大鼠肝匀浆在37℃温浴50min后，能不同程度抑制MDA生成。柴胡注射液及夏天无注射液抑制丙二醛生成的作用随着其浓度增大，抑制作用加强，但丹皮酚、天麻、当归3种注射液随其浓度增大抑制作用反而下降，其原因可能由于这3种注射液对清除由自由基引起脂质过氧化终产物MDA作用不强，其作用机理可能在于捕捉氧自由基的反应中发挥作用[6]。提示受试5种中药注射液具有一定的抗氧化作用，其抗炎作用可能与抗氧化作用有关。
, http://www.100md.com
3.2 H2O2自由基对生物体细胞的损伤是通过Fenton′s反应释放OH-所致，引起生物体红细胞溶血及膜脂质发生氧化[7]。在H2O2-鲁米诺发光体系中H2O2氧化鲁米诺，使之处于激发态，当退激时发出425nm的光，发光强度与H2O2含量成正比[8]。当加入受试中药注射液之后，使H2O2-鲁米诺发光体系发光强度下降，因此可用清除率来衡量受试中药抗H2O2作用大小。实验结果显示：5种注射液对H2O2有不同程度的清除作用，表明受试中药能通过清除H2O2自由基发挥抗氧化作用。
参考文献
, http://www.100md.com
1.黄泰康主编：常用中药成分与药理手册，北京，中国医药科技出版社，1995；1500～1502
2.陈方为等：清官寿桃粉剂对大鼠肝匀浆(休外)生成脂质过氧化的影响 中西医结合杂志 1984；4(11)∶666～668
3.句海松等：甘草类黄酮对脂质过氧化和活性氧自由基的作用 药学学报 1989；24(11)∶807～812
4.龙盛京等：麦冬汤、六味地黄丸、四君子汤、补阳还五汤对全血发光的抑制及抗氧化作用的研究 中药药理与临床 1998；14(3)∶1～3
5.陈可冀等主编：新编抗衰老中药学，北京，人民卫生出版社，1998；325～327
6.汪德清等：黄芪的3种提取成分对氧自由基作用的影响 中国药理学通报 1994；10(2)∶129～132
7.龙盛京等：化学发光分析法研究广西茶叶水提物抗活性氧作用研究 广西医学院学报 1992；9(3)∶1～5, 百拇医药
单位：广西医科大学化学教研室
关键词：丹皮酚；柴胡；当归；天麻；夏天无；过氧化脂质；化学发光分析
海峡药学990319 摘要 本文用比色法和化学发光分析法测定丹皮酚、柴胡、当归、天麻、夏天无注射液对大鼠肝匀浆过氧化脂质(LPO)影响及对H2O2-鲁米诺发光体系中H2O2的清除作用。体外实验结果表明：5种中药注射液均可抑制大鼠肝匀浆在37℃振荡温浴条件下引起的丙二醛升高，与对照组相比有显著性差异(P<0.01)；对H2O2有不同程度的清除作用。说明5种注射液有抗氧化作用，其抗炎作用可能与抗氧化作用有关。
The Effects of Five Chinese Drug s injection on
, 百拇医药
Lipid Peroxidation and Active Oxygen Ra dicals
Xie Yunfeng， Long Shengjing
(Department of The Chemistry,Guangxi Med ical University)
The Colorimetric method and c hemi luminescence method were used in this re search to investigate the effects of Api opaeonoside.Bupleurum Chinense DC,Angeli ca sinensis(oliv)Diels,Rhizoma Gastrodia e and Corydalis decumbens(Thunb.)pers.on l ip id peroxidation(Lpo)on rat liver homogen ate and scavenging effects on H2O2 in H2O2/luminol system were researehed.The resul ts were a s follow：Five Chinese drugs injection ef fectively inhibited MDA formation induce d by incubating rat liver homogenate at 37℃(P<0.01).Five Chinese drugs injection also significantly scavenged H2O2.The results suggest that five Chinese drugs injection may be used as anti-oxidation ，their anti-inflation effect maybe relat e to anti-oxidation effect.
, 百拇医药
Key words Apiopaeonoside Bupleuru m chi nense DC Angelica sinsnsis(oliv)Diels Rh izoma Gastrodiae Corydalis decumbens(Thu nb)pers Lipid peroxide Chemiluminescence method
丹皮酚、柴胡、当归、天麻、夏天无5种注射液均为临床上常用治疗炎症药物[1]。为探讨其抗炎作用机理是否与清除自由基引发的脂质过氧化及活性氧有关。本文用比色法测定5种注射液对脂质过氧化作用的影响，并用化学发光分析法测定其对H2O2的清除作用。
1 材料与方法
1.1 受试药物 所用药物均购自南宁市医药公司；丹皮酚注射液(5mg/ml)，上海第一生化药业公司生产，批号950401；柴胡注射液(1g/ml)，江西春峰制药厂生产，批号90061401；5%当归注射液，江西春峰制药厂生产，批号96062701；25%天麻注射液，上海北杰集团蛟河关东药业有限公司生产，批号970109；夏天无注射液(0.5mg/ml)，江西余江制药厂生产，批号970704。
, 百拇医药
1.2 试剂 硫代巴比妥酸(TBA)和1.1.3.3-四乙氧基丙烷(TEP)为Sigma公司产品；鲁米诺(luminol)为德国Merck-Schuchrat公司产品；溴代十六烷基三甲胺(CTMAB)，双氧水，碳酸钠，碳酸氢钠均为国产分析纯试剂。所用水均为双蒸水。
1.3 动物 Wistar大白鼠由本校动物中心提供体重250～300g。
1.4 仪器 岛津UV-120-02型紫外可见光光度计；DG3030发光光度计；HZD010恒温水浴振荡器。
1.5 方法 1.5.1肝匀浆制备[2]：将大鼠断头处死，立即取出肝脏，用pH＝7.4的PBS溶液150ml分3次洗去表面残血，并用滤纸吸干，然后用此PBS溶液制成5%肝匀浆。1.5.2脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的测定[3]：取5%肝匀浆1.5ml，加入不同体积的受试药物，以双蒸水代替药物作为阴性对照，1%维生素C作为阳性对照，于37℃水浴振荡50min，加20%三氯乙酸2ml，混匀，加0.67%TBA1ml于100℃加热10min冷却后离心3000转/min，10min，取上清液置532nm处比色，用TEP做标准品，计算每克肝组织(湿重)MDA的生成量。1.5.3 药物对H2O2的清除作用：参照文献[4]的方法，在测定管中依次加入10mmol/LH2O210μl，pH＝10.77，0.2mol/L碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液50μl混合后置仪器测定室中于37℃加入5mmol/L鲁米诺和10mmol/LCTMAB1∶1等量混合液500 μl，启动反应后测定10s内发光强度的平均值。加入不同体积的受试药物后计算其清除率。空白对照以双蒸水代替药物。1.5.4计算方法：用清除率来表示药物清除H2O2作用的大小，从量效关系曲线回归方程计算出50%清除率所需药物的毫升数为CI50。
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清除率%＝(空白对照值-药物值)/空白对照值×100%。经PEMS软件包处理，组间显著性差异用t检验。
2 结 果
2.1 5种注射液对肝匀浆脂质过氧化物生成的影响 大鼠肝匀浆在37℃温浴一定时间后，脂质过氧化产物明显升高。当受试药物与肝匀浆在体外共同温浴后，其丙二醛含量明显少于对照组(P<0.01)(见表1)。
表1 5种注射液对大鼠肝匀浆脂质过氧化的影响
(MDAnmol/g肝湿重，x±S) 组 别
药 物 剂 量 μl
0.00
100
, 百拇医药 300
500
柴胡注射液
-
154.45±3.43
148.11±2.65
139.15±2.37
夏天无注射液
-
157.77±2.42
145.28±2.79
125.66±4.03
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丹皮酚注射液
-
131.00±4.88
160.45±4.13
169.83±2.93
当归注射液
-
113.86±2.35
145.66±2.12
189.89±3.52
天麻注射液
-
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57.21±1.41
76.62±3.26
113.94±6.85
1%维生素C
-
84.90±2.30
75.30±1.83
66.62±2.77
对照组
193.94±1.52
-
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-
注：各剂量组与对照组比较 P<0.01，n=6
2.2 5种注射液对H2O2的清除作用 5种注射液对H2O2的清除作用在5～100μl剂量范围内呈浓度依赖性关系。从CI50来看，丹皮酚清除H2O2作用最强，其次为夏天无注射液及柴胡注射液，当归注射液及天麻注射液清除作用较弱(见表2)。
表2 5种注射液对H2O2的清除作用 组 别
清除率(%)
CI50
, 百拇医药 1μl
3μl
5μl
10μl
50μl
100μl
(μl)
丹皮酚注射液
-
-
26.00
45.30
67.00
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17.06
夏天无注射液
-
-
-
29.20
66.70
88.20
23.50
柴胡注射液
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24.30
67.70
94.00
24.59
当归注射液
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15.90
48.40
64.10
52.07
天麻注射液
, 百拇医药
-
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18.70
49.80
70.70
59.07
0.5%维生素C
25.90
56.10
79.60
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, 百拇医药
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2.19
3 讨 论
3.1 据报道活性氧和脂质过氧化反应对组织细胞的损伤是炎症或多种疾病的生化基础[5]。因此测定受试中药对过氧化脂质LPO代谢终产物丙二醛(MDA)生成的影响及对H2O2-鲁米诺发光体系中H2O2的清除作用，对研究受试中药抗炎作用与抗氧化作用关系具有重要意义。我们在实验中观察到5种中药注射液与大鼠肝匀浆在37℃温浴50min后，能不同程度抑制MDA生成。柴胡注射液及夏天无注射液抑制丙二醛生成的作用随着其浓度增大，抑制作用加强，但丹皮酚、天麻、当归3种注射液随其浓度增大抑制作用反而下降，其原因可能由于这3种注射液对清除由自由基引起脂质过氧化终产物MDA作用不强，其作用机理可能在于捕捉氧自由基的反应中发挥作用[6]。提示受试5种中药注射液具有一定的抗氧化作用，其抗炎作用可能与抗氧化作用有关。
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3.2 H2O2自由基对生物体细胞的损伤是通过Fenton′s反应释放OH-所致，引起生物体红细胞溶血及膜脂质发生氧化[7]。在H2O2-鲁米诺发光体系中H2O2氧化鲁米诺，使之处于激发态，当退激时发出425nm的光，发光强度与H2O2含量成正比[8]。当加入受试中药注射液之后，使H2O2-鲁米诺发光体系发光强度下降，因此可用清除率来衡量受试中药抗H2O2作用大小。实验结果显示：5种注射液对H2O2有不同程度的清除作用，表明受试中药能通过清除H2O2自由基发挥抗氧化作用。
参考文献
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1.黄泰康主编：常用中药成分与药理手册，北京，中国医药科技出版社，1995；1500～1502
2.陈方为等：清官寿桃粉剂对大鼠肝匀浆(休外)生成脂质过氧化的影响 中西医结合杂志 1984；4(11)∶666～668
3.句海松等：甘草类黄酮对脂质过氧化和活性氧自由基的作用 药学学报 1989；24(11)∶807～812
4.龙盛京等：麦冬汤、六味地黄丸、四君子汤、补阳还五汤对全血发光的抑制及抗氧化作用的研究 中药药理与临床 1998；14(3)∶1～3
5.陈可冀等主编：新编抗衰老中药学，北京，人民卫生出版社，1998；325～327
6.汪德清等：黄芪的3种提取成分对氧自由基作用的影响 中国药理学通报 1994；10(2)∶129～132
7.龙盛京等：化学发光分析法研究广西茶叶水提物抗活性氧作用研究 广西医学院学报 1992；9(3)∶1～5, 百拇医药