化疗栓塞对肝细胞癌转移抑制基因nm23/ndpk表达的影响——介入治疗与肿瘤转移潜能研究之一
作者：肖恩华 胡国栋 刘鹏程 胡道予 刘绍春 郝春荣
单位：肖恩华(510060 广州中山医科大学肿瘤防治中心肝胆科)；胡国栋(430030 武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医院放射科)；胡道予(430030 武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医院放射科)；刘鹏程(518000 深圳市中心医院放射科)
关键词：癌，肝细胞；栓塞性，化学治疗；基因表达；nm-23基因；免疫组织化学
临床放射学杂志001115 【摘要】 目的 研究转移抑制基因nm-23/ndpk在原发性肝细胞癌(PHC)中表达的意义以及不同化疗栓塞方法对其表达的影响。 材料与方法 7种不同组织学类型的PHC共98例，单纯手术57例，4种介入治疗后Ⅱ期切除41例。采用链霉亲合素生物素酶复合物(SABC)免疫组化方法，检测各样本中nm-23/ndpk的表达，并与临床转移情况对照。 结果 ndpk阳阴性者转移率分别为41.2%、80.0%(χ2=12.63,P<0.005)，介入治疗组及其A、B、C、D各组和单纯手术组ndpk阳性率分别为82.9%、85.7%、62.5%、86.7%、90.9%、59.6%(介入组分别与单纯手术组相比，χ2值依次为6.08、0.86、0.05、3.28、3.94，P值依次为<0.025、>0.25、>0.5、≈0.05、<0.05)。介入治疗使梁索型及Ⅰ级PHC nm-23/ndpk表达增高幅度最大。介入组与单纯手术组转移率分别为48.8%、56.1%(χ2=0.52，P>0.25)。 结论 nm-23/ndpk高表达可抑制PHC转移，其可作为PHC预后评估指标。就nm-23/ndpk而言，化疗栓塞不促进PHC转移，且碘油、无水乙醇、明胶海绵多材料联合化疗栓塞优于单一材料栓塞和单纯化疗。
, http://www.100md.com
The Effect of Chemoembolization on nm23/ndpk Gene Expression of Primary Hepatocellular Carcinoma
XIAO Enhua, HU Guodong, LIU Pengcheng,et al.
(Department of Hepatobiliary, Tumor Hospital, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou, Guangdong Province 510060, P.R.China)
【Abstract】 Objective To study the significance of nm23/ndpk gene expression of primary hepatocellular carcinoma (PHC), and the effects of different chemoembolization therapy on nm23/ndpk. Materials and Methods Ninety-eight histologically verified PHC specimens were collected. The patients were treated with surgical resection alone (n=57) or second stage surgical resection after four kinds of chemoembolization (n=41). Strept avidin-biotin complex (SABC) immunohistochemical staining with multiclonal antibody against human nm23/ndpk was used to observe the ndpk in all specimens. The experimental results were compared with the surgical and clinical findings. Results The metastatic rate in ndpk(+) and (-) was 41.2% and 80.0%, respectively (χ2=12.63, P<0.005). The positive rate of ndpk in interventional group, its subgroup A (chemotherapy alone), B (chemotherapy combined with iodized oil), C (chemotherapy combined with iodized oil and spongia gelatini absorbens), D (chemotherapy combined with ethanol, iodized oil and spongia gelatini absorbens), and surgical group was 82.9%, 85.7%, 62.5%, 86.7%, 90.9% and 59.6%, respectively. The metastatic rate in interventional group and pure surgical resection group was 48.8% and 56.1%, respectively (P>0.05). Conclusion Increased expression of nm23/ndpk will restrain PHC from metastasizing. It may be served as a prognosis-predictive marker. With respect to nm23/ndpk, chemoembolization fails to enhance the metastatic potential of PHC. A Combination of chemoembolization with ethanol, iodized oil and spongia gelatini absorbens is superior to pure chemotherapy and/or embolization with single material.
, 百拇医药
【Key words】 Carcinoma,hepatocellular Embolization,chemotherapy Gene expression Nm23 gene Immunohistochemistry
肿瘤转移是原发性肝细胞癌(primary hepatocellular carcinoma, PHC)引起患者死亡的主要原因之一，且与某些基因表达异常有关。其中以转移抑制基因nm-23最引人注目。该基因是steeg等[1]于1988年从小鼠K-1735黑色瘤细胞系分离并命名。其后发现该基因表达异常与许多肿瘤的转移潜能密切相关。肝细胞癌与nm-23基因的相关研究不多，介入治疗对该基因表达的影响则报道甚少。笔者用链霉亲合素生物素酶复合物(strept avidin-biotin complex, SABC)免疫组化方法对57例单纯手术标本及41例介入治疗二期手术标本nm-23基因表达产物进行了研究，报告如下。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 标本选择
经手术病理证实的PHC117例，其中单纯手术(术前未经其他治疗)58例，男52例，女6例，年龄24～70岁，平均45.3岁，其中1例为完全坏死；介入治疗后二期手术59例，男53例，女6例，年龄15～68岁，平均44岁，其中完全坏死12例，另有6例标本无法再作研究，连同完全坏死者排除在实验外。病理组织学类型和病理分级由2名病理专科医师确定。选择无坏死的肝癌组织98例做免疫组化。
1.2 介入方法
采用Seldinger技术，常规作肠系膜上动脉间接门脉造影及腹腔动脉造影，再作肝左或肝右动脉或肿瘤供血动脉选择性和超选择性插管。按治疗方式不同分4组：A组仅灌注化疗药物(5Fu 500～1500mg，MMC 8～12mg，卡铂300～500mg)，治疗1～4次，共7例；B组先灌注化疗药物，方案同A组，再用碘化油10～20ml与表阿霉素1支或5-Fu 10ml乳化剂栓塞，治疗1～2次，共8例；C组为在B组基础上加适当明胶海绵颗粒栓塞，治疗1～3次，共15例；D组先灌注抗癌药，方案同A组，继而作无水乙醇4～8ml加碘化油10～20ml乳剂栓塞，最后用适当明胶海绵颗粒栓塞，治疗1～3次，共11例。
, 百拇医药
1.3 免疫组化
免疫组化染色采用SABC法，主要试剂有兔抗人nm23/ndpk，Biotin标记羊抗兔IgG，A、B封闭液，SABC等。用缓冲液(PBS)代替兔抗人nm23/ndpk作为阴性对照，全部阴性；用已知肾癌阳性切片代替肝癌组织作为阳性对照，全部为阳性。胞浆和/或胞膜呈棕黄色染色的细胞为阳性细胞，取5个有代表性的高倍镜视野计算阳性细胞数，平均阳性细胞数>10%为阳性，实验采用盲法。由2人分别计数，结果不一致者，共同协商确定。
1.4 统计学处理
采用χ2检验。
2 结果
2.1 不同组织学类型介入治疗前后的ndpk表达
除了实体型，其他组织学类型介入治疗后较介入治疗前的ndpk表达不同程度增高，其中，梁索型有显著性差异，详见表1。
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表1 98例PHC不同组织类型的ndpk表达 组织学类型
单纯手术组
介入治疗组
χ2
P
例数
ndpk阳性例数
阳性率(%)
例数
ndpk阳性例数
阳性率(%)
梁索型
, 百拇医药
16
8
50.0
21
19
90.5
7.54
<0.01
索状腺样型
9
6
66.7
2
, http://www.100md.com 2
100.0
0.008
>0.9
透明细胞型
13
7
53.8
6
4
66.7
0.0007
>0.9
, 百拇医药
低(未)分化型
5
4
80.0
6
6
100.0
0.009
>0.9
实体型
12
7
58.3
, http://www.100md.com
6
3
50.0
0.03
>0.75
硬化型
1
1
100.0
小细胞型
1
0
0
, 百拇医药 注：PHC为原发性肝细胞癌，ndpk为nm23基因表达产物，统计值为各组织学类型两治疗组比较
2.2 不同病理分级介入治疗前后的ndpk表达
病理分级采用Ⅳ级分类法，对介于两者之间者取高者(如Ⅰ～Ⅱ级取Ⅱ级)。不同病理分级介入治疗后较介入治疗前的ndpk表达不同程度增高，但没有显著性差异，详见表2。
表2 98例PHC不同病理分级的ndpk表达 病理分级
单纯手术组
介入治疗组
χ2
P
例数
, http://www.100md.com
ndpk阳性例数
阳性率(%)
例数
ndpk阳性例数
阳性率(%)
Ⅰ
8
3
37.5
4
4
100.0
2.1
, 百拇医药
>0.1
Ⅱ
30
20
66.7
25
21
84.0
2.16
>0.1
Ⅲ
19
11
, 百拇医药 57.9
11
8
72.7
0.18
>0.5
Ⅳ
1
1
100.0
注：PHC为原发性肝细胞癌，ndpk为nm23基因表达产物，统计值为各病理分级两组比较
2.3 不同治疗方法对ndpk表达的影响
, 百拇医药
与单纯手术组相比，介入治疗组ndpk的表达增高，有显著性差异。其中，碘油无水乙醇化疗药加明胶海绵栓塞(D组)有显著性差异，碘油化疗药加明胶海绵栓塞(C组)有近似显著性差异，详见表3。
表3 98例PHC不同治疗方法ndpk的表达 治疗方法
例数
ndpk阳性例数
阳性率(%)
χ2
P
介入治疗
41
34
, 百拇医药
82.9
6.08
<0.025
A组
7
6
85.7
0.86
>0.25
B组
8
5
62.5
, 百拇医药
0.05
>0.5
C组
15
13
86.7
3.82
≈0.05
D组
11
10
90.9
3.94
, 百拇医药
<0.05
单纯手术
57
34
59.6
注：PHC为原发性肝细胞癌，ndpk为nm23基因表达产物，A组为单纯灌注化疗药组，B组为碘油加化疗药组，C组为碘油化疗药加明胶海绵栓塞，D组为碘油无水乙醇化疗药加明胶海绵栓塞，统计处理指介入治疗与单纯手术相比
2.4 ndpk表达与转移的关系
本研究中转移指肉眼或镜下血管内瘤栓、淋巴结转移，邻近脏器或远处见转移灶。ndpk阳、阴性组，转移复发率分别为41.2%(28/68)、80.0%(24/30)(χ2=12.63，P<0.005)；介入治疗组和单纯手术组转移率分别为48.8%(20/49)、56.1%(32/57)(χ2=0.52，P>0.25)。
, 百拇医药
3 讨论
nm23基因是近年发现并被证实与多种肿瘤的转移有关的肿瘤转移抑制基因，nm指non-metastasis，nm23为被检测的非转移性的第23个克隆基因。人类nm23基因有3个，即nm23-H1、nm23-H2和DR-nm23[2]。已克隆的有2个即nm23-H1、nm23-H2，分别编码相对分子质量为19，000和17，000两种蛋白质即分别为二磷酸核苷激酶(nucleoside diphosphate kinase, ndpk)A、B两个多肽亚单位[1～3]。它主要通过影响细胞内微管微丝的聚合/解聚和G蛋白介导的信号传导而抑制肿瘤的形成和转移[1～4]。
nm23基因在不同组织肿瘤中发挥的作用有所不同，在乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、肝癌、恶性黑色素瘤等，其表达产物增高常与转移减少，无病生存期延长等正相关；在结肠癌可抑制转移，与肿瘤分期呈负相关，但不能预测生存率；在成神经细胞瘤、胰腺癌、淋巴瘤和白血病等，该基因表达产物增多，常与病变进展、增殖相关[1～4]。本组资料显示，肝细胞癌ndpk表达阴性时，其转移能力明显增强，与ndpk表达阳性相比，有显著性差异，提示nm23基因在肝细胞癌可抑制转移，使肝细胞癌转移潜力下降，这与文献报道一致[5，6]。在各组织学类型中，除低分化型，ndpk表达水平稍高，其他各型表达水平相近，即ndpk表达与组织学分类关系不大，但在Ⅱ～Ⅲ级中表达水平高于Ⅰ级。nm23其mRNA水平与其蛋白质表达水平具有一致性[7]，因此，我们用免疫组化检测ndpk表达能反映nm23基因的功能及表达。
, 百拇医药
文献报道nm23-H1与肿瘤转移抑制的关系更密切[5，6]。而我们使用的是多克隆抗体，同时检测nm23-H1和nm23-H2的表达，有可能出现非特异性抗原抗体结合，出现假阳性，掩盖了ndpk A抗体的检测结果与转移倾向的相关性[8]。本组ndpk阳性组有41.2%的患者出现转移，说明了存在这种可能性。另外，也说明了肿瘤转移是一个多基因参与的极其复杂的过程，任何参与这一过程的癌基因和抑癌基因都不可能是决定肿瘤转移的唯一因素[9]。还有一种可能性是nm23-H1基因突变导致基因产物正常功能丢失[10]。
化疗栓塞可引起ndpk表达水平增高，与单纯手术组相比，有显著性差异，说明就nm23基因表达而言，化疗栓塞不引起肝细胞癌转移潜能的增高。导致ndpk表达增多的机制尚不清楚。最近，有人发现亚麻油酸，花生四烯酸，前列腺素E2可抑制、减少nm23基因表达，而r-亚麻酸明显增加该基因的表达[2]。是否化疗栓塞后引起肝细胞癌代谢改变，产生相应代谢产物而引起ndpk表达改变，有待进一步论证。
, 百拇医药
与单纯手术组相比，碘油、无水乙醇化疗药加明胶海绵栓塞(D组)引起ndpk表达增高，有显著性差异；碘油化疗药加明胶海绵栓塞(C组)也引起ndpk表达明显增高，有近似显著性差异(P≈0.05)。而单纯灌注化疗组与碘油加化疗药组与单纯手术组相比，P值远大于0.05。由此，也说明前二者对肝细胞癌的治疗优于后二者。介入治疗引起ndpk表达显著性增高，但从临床上，介入治疗组，转移率尽管低于单纯手术组，但没有显著性差异，也说明有其他因素参与了转移促进过程，有待我们去研究。
化疗栓塞对各组织学类型和病理分级ndpk表达的影响也有差异，以梁索型和Ⅰ级肿瘤ndpk阳性表达率增高幅度最大，从这方面也说明了临床上化疗栓塞对梁索型和Ⅰ级肝细胞癌治疗效果较好的原因。
本研究为国家“九五”攻关项目课题(批准号：96-907-03-01)
刘绍春(430030 武汉，华中科技大学同济医学院病理免疫室)
, http://www.100md.com
郝春荣(430030 武汉，华中科技大学同济医学院病理免疫室)
参考文献
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2，Jiang WG, Hiscox S, Bryce RP,et al. The effects of n-6 polyunsaturated fatty acids on the expression of nm23 in human cancer cells. Br J Cancer, 1998, 77:731
3，Cheah PY, Cao X, Eu KW,et al. nm23-H1 immunostaining is inversely associated with tumor staging but not overall survival or disease recurrence in colerectal carcinomas. Br J Cancer, 1998, 77:1164
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4，Wakimoto N, Yokoyama A, Okabe-Kado J,et al. Combined analysis of differention inhibitory factor nm23-H1 and nm23-H2 as progrostic factors in acute myeloid leukaemia. Br J Cancer, 1998, 77:2298
5，Yamaguchi A, Urano T, Goi T,et al. Expression of human nm23-H1 and nm23-H2 proteins in hepatocellular carcinoma. Cancer, 1994, 73:2280
6，Nakayama T. Expression in human hepatocellular carcinoma of nucleoside diphosphate kinase, a homologue of the nm23 gene product. J Natl Cancer Inst, 1992, 84:1349
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10，Boix L, Bruix L, Campo E,et al. nm23-H1 expression and disease recurrence after surgical resection of small hepatocellular carcinoma. Gastroenterology, 1994, 107:486
(收稿：2000-04-18), 百拇医药
单位：肖恩华(510060 广州中山医科大学肿瘤防治中心肝胆科)；胡国栋(430030 武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医院放射科)；胡道予(430030 武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医院放射科)；刘鹏程(518000 深圳市中心医院放射科)
关键词：癌，肝细胞；栓塞性，化学治疗；基因表达；nm-23基因；免疫组织化学
临床放射学杂志001115 【摘要】 目的 研究转移抑制基因nm-23/ndpk在原发性肝细胞癌(PHC)中表达的意义以及不同化疗栓塞方法对其表达的影响。 材料与方法 7种不同组织学类型的PHC共98例，单纯手术57例，4种介入治疗后Ⅱ期切除41例。采用链霉亲合素生物素酶复合物(SABC)免疫组化方法，检测各样本中nm-23/ndpk的表达，并与临床转移情况对照。 结果 ndpk阳阴性者转移率分别为41.2%、80.0%(χ2=12.63,P<0.005)，介入治疗组及其A、B、C、D各组和单纯手术组ndpk阳性率分别为82.9%、85.7%、62.5%、86.7%、90.9%、59.6%(介入组分别与单纯手术组相比，χ2值依次为6.08、0.86、0.05、3.28、3.94，P值依次为<0.025、>0.25、>0.5、≈0.05、<0.05)。介入治疗使梁索型及Ⅰ级PHC nm-23/ndpk表达增高幅度最大。介入组与单纯手术组转移率分别为48.8%、56.1%(χ2=0.52，P>0.25)。 结论 nm-23/ndpk高表达可抑制PHC转移，其可作为PHC预后评估指标。就nm-23/ndpk而言，化疗栓塞不促进PHC转移，且碘油、无水乙醇、明胶海绵多材料联合化疗栓塞优于单一材料栓塞和单纯化疗。
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The Effect of Chemoembolization on nm23/ndpk Gene Expression of Primary Hepatocellular Carcinoma
XIAO Enhua, HU Guodong, LIU Pengcheng,et al.
(Department of Hepatobiliary, Tumor Hospital, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou, Guangdong Province 510060, P.R.China)
【Abstract】 Objective To study the significance of nm23/ndpk gene expression of primary hepatocellular carcinoma (PHC), and the effects of different chemoembolization therapy on nm23/ndpk. Materials and Methods Ninety-eight histologically verified PHC specimens were collected. The patients were treated with surgical resection alone (n=57) or second stage surgical resection after four kinds of chemoembolization (n=41). Strept avidin-biotin complex (SABC) immunohistochemical staining with multiclonal antibody against human nm23/ndpk was used to observe the ndpk in all specimens. The experimental results were compared with the surgical and clinical findings. Results The metastatic rate in ndpk(+) and (-) was 41.2% and 80.0%, respectively (χ2=12.63, P<0.005). The positive rate of ndpk in interventional group, its subgroup A (chemotherapy alone), B (chemotherapy combined with iodized oil), C (chemotherapy combined with iodized oil and spongia gelatini absorbens), D (chemotherapy combined with ethanol, iodized oil and spongia gelatini absorbens), and surgical group was 82.9%, 85.7%, 62.5%, 86.7%, 90.9% and 59.6%, respectively. The metastatic rate in interventional group and pure surgical resection group was 48.8% and 56.1%, respectively (P>0.05). Conclusion Increased expression of nm23/ndpk will restrain PHC from metastasizing. It may be served as a prognosis-predictive marker. With respect to nm23/ndpk, chemoembolization fails to enhance the metastatic potential of PHC. A Combination of chemoembolization with ethanol, iodized oil and spongia gelatini absorbens is superior to pure chemotherapy and/or embolization with single material.
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【Key words】 Carcinoma,hepatocellular Embolization,chemotherapy Gene expression Nm23 gene Immunohistochemistry
肿瘤转移是原发性肝细胞癌(primary hepatocellular carcinoma, PHC)引起患者死亡的主要原因之一，且与某些基因表达异常有关。其中以转移抑制基因nm-23最引人注目。该基因是steeg等[1]于1988年从小鼠K-1735黑色瘤细胞系分离并命名。其后发现该基因表达异常与许多肿瘤的转移潜能密切相关。肝细胞癌与nm-23基因的相关研究不多，介入治疗对该基因表达的影响则报道甚少。笔者用链霉亲合素生物素酶复合物(strept avidin-biotin complex, SABC)免疫组化方法对57例单纯手术标本及41例介入治疗二期手术标本nm-23基因表达产物进行了研究，报告如下。
1 材料与方法
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1.1 标本选择
经手术病理证实的PHC117例，其中单纯手术(术前未经其他治疗)58例，男52例，女6例，年龄24～70岁，平均45.3岁，其中1例为完全坏死；介入治疗后二期手术59例，男53例，女6例，年龄15～68岁，平均44岁，其中完全坏死12例，另有6例标本无法再作研究，连同完全坏死者排除在实验外。病理组织学类型和病理分级由2名病理专科医师确定。选择无坏死的肝癌组织98例做免疫组化。
1.2 介入方法
采用Seldinger技术，常规作肠系膜上动脉间接门脉造影及腹腔动脉造影，再作肝左或肝右动脉或肿瘤供血动脉选择性和超选择性插管。按治疗方式不同分4组：A组仅灌注化疗药物(5Fu 500～1500mg，MMC 8～12mg，卡铂300～500mg)，治疗1～4次，共7例；B组先灌注化疗药物，方案同A组，再用碘化油10～20ml与表阿霉素1支或5-Fu 10ml乳化剂栓塞，治疗1～2次，共8例；C组为在B组基础上加适当明胶海绵颗粒栓塞，治疗1～3次，共15例；D组先灌注抗癌药，方案同A组，继而作无水乙醇4～8ml加碘化油10～20ml乳剂栓塞，最后用适当明胶海绵颗粒栓塞，治疗1～3次，共11例。
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1.3 免疫组化
免疫组化染色采用SABC法，主要试剂有兔抗人nm23/ndpk，Biotin标记羊抗兔IgG，A、B封闭液，SABC等。用缓冲液(PBS)代替兔抗人nm23/ndpk作为阴性对照，全部阴性；用已知肾癌阳性切片代替肝癌组织作为阳性对照，全部为阳性。胞浆和/或胞膜呈棕黄色染色的细胞为阳性细胞，取5个有代表性的高倍镜视野计算阳性细胞数，平均阳性细胞数>10%为阳性，实验采用盲法。由2人分别计数，结果不一致者，共同协商确定。
1.4 统计学处理
采用χ2检验。
2 结果
2.1 不同组织学类型介入治疗前后的ndpk表达
除了实体型，其他组织学类型介入治疗后较介入治疗前的ndpk表达不同程度增高，其中，梁索型有显著性差异，详见表1。
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表1 98例PHC不同组织类型的ndpk表达 组织学类型
单纯手术组
介入治疗组
χ2
P
例数
ndpk阳性例数
阳性率(%)
例数
ndpk阳性例数
阳性率(%)
梁索型
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16
8
50.0
21
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90.5
7.54
<0.01
索状腺样型
9
6
66.7
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>0.9
透明细胞型
13
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53.8
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0.0007
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低(未)分化型
5
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实体型
12
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58.3
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6
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50.0
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硬化型
1
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小细胞型
1
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2.2 不同病理分级介入治疗前后的ndpk表达
病理分级采用Ⅳ级分类法，对介于两者之间者取高者(如Ⅰ～Ⅱ级取Ⅱ级)。不同病理分级介入治疗后较介入治疗前的ndpk表达不同程度增高，但没有显著性差异，详见表2。
表2 98例PHC不同病理分级的ndpk表达 病理分级
单纯手术组
介入治疗组
χ2
P
例数
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ndpk阳性例数
阳性率(%)
例数
ndpk阳性例数
阳性率(%)
Ⅰ
8
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37.5
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66.7
25
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84.0
2.16
>0.1
Ⅲ
19
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11
8
72.7
0.18
>0.5
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1
100.0
注：PHC为原发性肝细胞癌，ndpk为nm23基因表达产物，统计值为各病理分级两组比较
2.3 不同治疗方法对ndpk表达的影响
, 百拇医药
与单纯手术组相比，介入治疗组ndpk的表达增高，有显著性差异。其中，碘油无水乙醇化疗药加明胶海绵栓塞(D组)有显著性差异，碘油化疗药加明胶海绵栓塞(C组)有近似显著性差异，详见表3。
表3 98例PHC不同治疗方法ndpk的表达 治疗方法
例数
ndpk阳性例数
阳性率(%)
χ2
P
介入治疗
41
34
, 百拇医药
82.9
6.08
<0.025
A组
7
6
85.7
0.86
>0.25
B组
8
5
62.5
, 百拇医药
0.05
>0.5
C组
15
13
86.7
3.82
≈0.05
D组
11
10
90.9
3.94
, 百拇医药
<0.05
单纯手术
57
34
59.6
注：PHC为原发性肝细胞癌，ndpk为nm23基因表达产物，A组为单纯灌注化疗药组，B组为碘油加化疗药组，C组为碘油化疗药加明胶海绵栓塞，D组为碘油无水乙醇化疗药加明胶海绵栓塞，统计处理指介入治疗与单纯手术相比
2.4 ndpk表达与转移的关系
本研究中转移指肉眼或镜下血管内瘤栓、淋巴结转移，邻近脏器或远处见转移灶。ndpk阳、阴性组，转移复发率分别为41.2%(28/68)、80.0%(24/30)(χ2=12.63，P<0.005)；介入治疗组和单纯手术组转移率分别为48.8%(20/49)、56.1%(32/57)(χ2=0.52，P>0.25)。
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3 讨论
nm23基因是近年发现并被证实与多种肿瘤的转移有关的肿瘤转移抑制基因，nm指non-metastasis，nm23为被检测的非转移性的第23个克隆基因。人类nm23基因有3个，即nm23-H1、nm23-H2和DR-nm23[2]。已克隆的有2个即nm23-H1、nm23-H2，分别编码相对分子质量为19，000和17，000两种蛋白质即分别为二磷酸核苷激酶(nucleoside diphosphate kinase, ndpk)A、B两个多肽亚单位[1～3]。它主要通过影响细胞内微管微丝的聚合/解聚和G蛋白介导的信号传导而抑制肿瘤的形成和转移[1～4]。
nm23基因在不同组织肿瘤中发挥的作用有所不同，在乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、肝癌、恶性黑色素瘤等，其表达产物增高常与转移减少，无病生存期延长等正相关；在结肠癌可抑制转移，与肿瘤分期呈负相关，但不能预测生存率；在成神经细胞瘤、胰腺癌、淋巴瘤和白血病等，该基因表达产物增多，常与病变进展、增殖相关[1～4]。本组资料显示，肝细胞癌ndpk表达阴性时，其转移能力明显增强，与ndpk表达阳性相比，有显著性差异，提示nm23基因在肝细胞癌可抑制转移，使肝细胞癌转移潜力下降，这与文献报道一致[5，6]。在各组织学类型中，除低分化型，ndpk表达水平稍高，其他各型表达水平相近，即ndpk表达与组织学分类关系不大，但在Ⅱ～Ⅲ级中表达水平高于Ⅰ级。nm23其mRNA水平与其蛋白质表达水平具有一致性[7]，因此，我们用免疫组化检测ndpk表达能反映nm23基因的功能及表达。
, 百拇医药
文献报道nm23-H1与肿瘤转移抑制的关系更密切[5，6]。而我们使用的是多克隆抗体，同时检测nm23-H1和nm23-H2的表达，有可能出现非特异性抗原抗体结合，出现假阳性，掩盖了ndpk A抗体的检测结果与转移倾向的相关性[8]。本组ndpk阳性组有41.2%的患者出现转移，说明了存在这种可能性。另外，也说明了肿瘤转移是一个多基因参与的极其复杂的过程，任何参与这一过程的癌基因和抑癌基因都不可能是决定肿瘤转移的唯一因素[9]。还有一种可能性是nm23-H1基因突变导致基因产物正常功能丢失[10]。
化疗栓塞可引起ndpk表达水平增高，与单纯手术组相比，有显著性差异，说明就nm23基因表达而言，化疗栓塞不引起肝细胞癌转移潜能的增高。导致ndpk表达增多的机制尚不清楚。最近，有人发现亚麻油酸，花生四烯酸，前列腺素E2可抑制、减少nm23基因表达，而r-亚麻酸明显增加该基因的表达[2]。是否化疗栓塞后引起肝细胞癌代谢改变，产生相应代谢产物而引起ndpk表达改变，有待进一步论证。
, 百拇医药
与单纯手术组相比，碘油、无水乙醇化疗药加明胶海绵栓塞(D组)引起ndpk表达增高，有显著性差异；碘油化疗药加明胶海绵栓塞(C组)也引起ndpk表达明显增高，有近似显著性差异(P≈0.05)。而单纯灌注化疗组与碘油加化疗药组与单纯手术组相比，P值远大于0.05。由此，也说明前二者对肝细胞癌的治疗优于后二者。介入治疗引起ndpk表达显著性增高，但从临床上，介入治疗组，转移率尽管低于单纯手术组，但没有显著性差异，也说明有其他因素参与了转移促进过程，有待我们去研究。
化疗栓塞对各组织学类型和病理分级ndpk表达的影响也有差异，以梁索型和Ⅰ级肿瘤ndpk阳性表达率增高幅度最大，从这方面也说明了临床上化疗栓塞对梁索型和Ⅰ级肝细胞癌治疗效果较好的原因。
本研究为国家“九五”攻关项目课题(批准号：96-907-03-01)
刘绍春(430030 武汉，华中科技大学同济医学院病理免疫室)
, http://www.100md.com
郝春荣(430030 武汉，华中科技大学同济医学院病理免疫室)
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(收稿：2000-04-18), 百拇医药