银杏叶提取物对豚鼠离体小肠平滑肌活动的影响
作者：钱大青 张根葆 刘德蔚
单位：(皖南医学院，芜湖 241001)
关键词：银杏叶提取物；平滑肌；乙酰胆碱
咸宁医学院学报00205 摘 要 目的：观察银杏叶提取物(EGb)对离体豚鼠回肠运动功能的影响。方法：制作豚鼠回肠离体肠段标本，记录用药前后肠段的平滑肌纵肌收缩强度和静息张力，换算为变化百为率进行比较，t检验处理。结果：较低浓度(0.3～10mg/L)的EGb可明显抑制小肠平滑肌的自发收缩活动，并显著减弱乙酰胆碱和组胺对小肠平滑肌活动的增强效应。而在高浓度时(50mg/L)则增加平滑肌静息张力(P<0.05)，且不受M胆碱能受体阻断剂阿托品的影响。结论：EGb对胃肠运动具有较为复杂的调整作用。
中图分类号 R965 文献标识码 A
文章编号 1008-0635(2000)02-0091-03
, http://www.100md.com
The Effects of Ginkgo Biloba Extracts on Activity of
Isolated Small Intestine Muscle from Guinea Pig
QIAN Daqing ZHANG Genbao LIU Dewei
(Wannan Medical College,Wuhu 241001)
ABSTRACT Objective To investigate the effects of Ginkgo biloba extracts (EGb) on intestinal myoeletric activity of guinea pigs in vitro.Methods The samples of isolated ileum segment from guinea pigs were prepared,then the contraction intensity and static tonisity of gut longitudinal muscles were measured pre-and postadministration of EGb.The data were converted into varience percentage to contrast and treated by T-text.Results It was found that EGb (0.3～10mg/L)significantly inhibited contraction of small intestine and decreased exterior Ach and His-induced constriction (P<0.01).However,the tension of spontaneus constriction of small intestine was significantly increased after administration of EGb at higher concentration(50mg/L) (P<0.05),and this effect cannot be inhibited by atropine (adrenaline-receptor inhibitor) and propranolol(β-receptor inhibitor).Conclusion EGb can complexly modulate intestinal movement.
, 百拇医药
KEY WORDS Ginkgo biloba extracts;Smooth muscle;Acetylcholine
银杏科植物银杏树(Ginkgo biloba L)是我国特产植物，从其干燥叶中提取的活性物质黄酮类和苦内酯具有广泛的生物学效应[1，2]，已有研究表明银杏叶提取物(Extracts of Ginkgo biloba,EGb)可降低血脂、改善心肌缺血[3]、促进脑循环[4]、对抗肾上腺素所致的血管收缩、拟肾上腺素以及缓解支气管平滑肌痉挛等效应。但银杏叶提取物对胃肠道平滑肌功能活动的影响尚未见报道。本文观察了不同浓度的EGb对离体豚鼠回肠平滑肌活动的影响，以期探讨其对消化道的调整作用及其可能的作用机制。
1 材料和方法
健康豚鼠30只，250g～350g，本院实验动物中心提供，雌雄兼用。实验前禁食12小时，自由饮水，击昏后在距回盲部10cm处，取长约2cm的回肠，在盛有Kreb′s液的平皿器中洗净后，置于离体器官实验仪(CW-3型，张家港实验器材厂)的平滑肌浴槽中(容量50ml)恒温(37±0.5℃)，持续通气(95%O2和5%CO2)。平滑肌标本一端固定，另一端连于张力换能器并引至计算机接口，标本张力负荷1g，平滑肌收缩活动信号经实时处理和储存后，由三通道生物信号处理系统(MS302，广东药学院)记录纵肌收缩活动，再由打印机打印输出。
, http://www.100md.com
银杏叶提取物(含黄酮24%，银杏内酯6%，美国U.C Medicine公司)；乙酰胆碱(Ach,北京化学试剂三厂)；阿托品(Atropin,上海医药公司)；磷酸组胺(Histaminiphosphas,His,中国药品生物制品检定所)。所用药物由移液管给药，容量0.1～0.2ml，文中药物浓度为折换成的终末浓度；药物作用后，以37℃Kreb′s液换洗至正常。
以给药前5min的值为效应值；分别记录用药前后小肠平滑肌纵肌收缩强度和静息张力，并换算成变化百分率〔变化百分率=(效应值—对照值)/对照值×100%〕；所测数据以均数±标准差(
±s)表示，并作配对t检验判断差异的显著性。
2 结 果
2.1不同浓度EGb对小肠平滑肌活动的影响
, 百拇医药
离体小肠平滑肌在实验条件下，自发活动规则，收缩强度为1.35±0.42mV，静息张力1.14±0.36g。对照组在营养液中加入Kerb′s液0.1～0.2ml，平滑肌活动无可测性变化。以微量移液管加入EGb(0.3mg/L～10mg/L)于平滑肌营养液中，平滑肌收缩活动明显减弱并有剂量依赖性关系(P<0.05，表1)。另在6个平滑肌肠段标本，发现EGb较高浓度时(50mg/L)平滑肌张力显著增加(P<0.05)，且不受阿托品(10μmol/L)的影响。
2.2 EGb对外源性Ach和His所致平滑肌挛缩的抑制作用
在平滑面浴槽中加入外源性Ach(1μmol/L)和His(2.3μmol/L)，均可引起平滑肌的强烈收缩，收缩强度和张力较用药前显著增加。若同时加入10mg/L剂量的EGb，则可明显抑制Ach和His引起的这一增强过程，其抑制率分别为51.41±23.32%和43.64±17.88%(P<0.01，表2)。
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表1 EGb对小肠平滑肌自发活动的影响(±s) 组 别
例数
(n)
纵肌收缩强度(mV)
平滑肌张力(g)
用药前
用药后
用药前
用药后
EGb 0.3mg/L
8
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1.21±0.33
0.91±0.29*
1.12±0.21
1.20±0.35
EGb 1mg/L
8
1.34±0.41
0.78±0.43*
1.05±0.30
0.92±0.38
EGb 10mg/L
, 百拇医药
8
1.31±0.43
0.65±0.32**△
1.10±0.33
1.25±0.61
EGb 50mg/L
8
1.28±0.37
0.69±0.41**
1.13±0.38
2.09±0.77*
, 百拇医药
与同用药前比较*P<0.05，**P<0.01，与0.3mg/L组比效△P<0.05表2 EGb对Ach和His所致平滑肌挛缩的抑制作用(±s) 组 别
例 数
平滑肌收缩强度
平滑肌张力
对照组
12
1.32±0.41
1.08±0.32
Ach
6
, 百拇医药
2.03±0.88**
1.51±0.63**
Ach+EGb
8
1.50±0.69
1.23±0.71
His
8
2.18±0.59**
1.34±0.36*
His+EGb
, 百拇医药
8
1.61±0.73
1.03±0.42
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01
2 讨 论
银杏叶味苦，性平，有活血平喘止痛的功效。近年来，对其提取物药理生理作用的研究已引起广泛关注。研究表明，EGb主要含有黄酮甙和银杏苦内酯。黄酮甙主要作用在于捕捉游离基，银杏苦内酯则是一种特异性的血小板活化因子受体阻断剂[1]，能发挥稳定细胞膜、改善血液流动特性、调整神经系统递质的关系、缓解平滑肌痉挛等作用[5]。本实验结果显示EGb在低浓度时(0.3mg/L～10mg/L)对离体豚鼠回肠平滑肌收缩具有明显的剂量依赖性抑制作用，且不影响平滑肌的张力。对于Ach和His所介导的平滑肌强直性收缩，EGb(10mg/L)均能明显拮抗。提示EGb具有在一定程度上调整小肠平滑肌活动功能性紊乱的作用，可有效地维持小肠的正常运动功能；而在高浓度(50mg/L)时，EGb尚可增加小肠平滑肌张力，该效应不能被M胆碱能受体阻断剂阿托品所阻断，表明不同浓度的EGb对平滑肌具有不同的影响，且该效应并非影响平滑肌上的胆碱能受体，更可能是通过改变或调整平滑肌细胞的某些离子通道或代谢过程。
, 百拇医药
小肠运动功能的影响因素和调节机制是一种很复杂的过程，涉及到神经、内分泌和小肠平滑肌细胞内外离子转运与环境因素等多个环节。从本实验结果可以推测EGb不仅在一定程度上可缓解肠道平滑肌的痉挛，也可调整由于胃肠道平滑肌内兴奋性和抑制性神经递质比例失调所致平滑肌功能的紊乱。虽然高浓度EGb对平滑肌活动加强的直接效应是否是其毒性反应，以及EGb影响Ach和His的确切机制尚有待进一步研究，但EGb对多种机体功能失调的治疗作用似乎主要受其所含银杏内酯与机体内活性物质相互作用的影响[4，6]。
参考文献
1，刘玲玲，于心若.银杏药用价值.中草药，1994；25：219
2，Wedizinische K,Kantonsspital L.Ginkgo myth and reality.Schweiz Rundsch Med Prax,1995；84：1
, 百拇医药
3，Pietri S,Maurelli E,Drien K，et al.Cardioprotective and anti-oxidant effects of the terpenoid constituents of ginkgo biloba extract.Mol Cell Cardiol,1997；29：733
4，Stucker O,Pons C,Duverger JP,et al.Effects of ginkgo biloba extract on arteriolar spasm in a rat cremaster muscle preparation.Imt J Microcire Clin Exp,1996；16：98
5，李明山.银杏叶活性成分及药理作用研究近况.安徽中医学院学报，1997；16(1)：64
6，李光仪，刘明登，李满芳.银杏苦内酯的药理和临床研究进展.中草药，1995；26(2)：100
收稿2000-03-10
, http://www.100md.com
单位：(皖南医学院，芜湖 241001)
关键词：银杏叶提取物；平滑肌；乙酰胆碱
咸宁医学院学报00205 摘 要 目的：观察银杏叶提取物(EGb)对离体豚鼠回肠运动功能的影响。方法：制作豚鼠回肠离体肠段标本，记录用药前后肠段的平滑肌纵肌收缩强度和静息张力，换算为变化百为率进行比较，t检验处理。结果：较低浓度(0.3～10mg/L)的EGb可明显抑制小肠平滑肌的自发收缩活动，并显著减弱乙酰胆碱和组胺对小肠平滑肌活动的增强效应。而在高浓度时(50mg/L)则增加平滑肌静息张力(P<0.05)，且不受M胆碱能受体阻断剂阿托品的影响。结论：EGb对胃肠运动具有较为复杂的调整作用。
中图分类号 R965 文献标识码 A
文章编号 1008-0635(2000)02-0091-03
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The Effects of Ginkgo Biloba Extracts on Activity of
Isolated Small Intestine Muscle from Guinea Pig
QIAN Daqing ZHANG Genbao LIU Dewei
(Wannan Medical College,Wuhu 241001)
ABSTRACT Objective To investigate the effects of Ginkgo biloba extracts (EGb) on intestinal myoeletric activity of guinea pigs in vitro.Methods The samples of isolated ileum segment from guinea pigs were prepared,then the contraction intensity and static tonisity of gut longitudinal muscles were measured pre-and postadministration of EGb.The data were converted into varience percentage to contrast and treated by T-text.Results It was found that EGb (0.3～10mg/L)significantly inhibited contraction of small intestine and decreased exterior Ach and His-induced constriction (P<0.01).However,the tension of spontaneus constriction of small intestine was significantly increased after administration of EGb at higher concentration(50mg/L) (P<0.05),and this effect cannot be inhibited by atropine (adrenaline-receptor inhibitor) and propranolol(β-receptor inhibitor).Conclusion EGb can complexly modulate intestinal movement.
, 百拇医药
KEY WORDS Ginkgo biloba extracts;Smooth muscle;Acetylcholine
银杏科植物银杏树(Ginkgo biloba L)是我国特产植物，从其干燥叶中提取的活性物质黄酮类和苦内酯具有广泛的生物学效应[1，2]，已有研究表明银杏叶提取物(Extracts of Ginkgo biloba,EGb)可降低血脂、改善心肌缺血[3]、促进脑循环[4]、对抗肾上腺素所致的血管收缩、拟肾上腺素以及缓解支气管平滑肌痉挛等效应。但银杏叶提取物对胃肠道平滑肌功能活动的影响尚未见报道。本文观察了不同浓度的EGb对离体豚鼠回肠平滑肌活动的影响，以期探讨其对消化道的调整作用及其可能的作用机制。
1 材料和方法
健康豚鼠30只，250g～350g，本院实验动物中心提供，雌雄兼用。实验前禁食12小时，自由饮水，击昏后在距回盲部10cm处，取长约2cm的回肠，在盛有Kreb′s液的平皿器中洗净后，置于离体器官实验仪(CW-3型，张家港实验器材厂)的平滑肌浴槽中(容量50ml)恒温(37±0.5℃)，持续通气(95%O2和5%CO2)。平滑肌标本一端固定，另一端连于张力换能器并引至计算机接口，标本张力负荷1g，平滑肌收缩活动信号经实时处理和储存后，由三通道生物信号处理系统(MS302，广东药学院)记录纵肌收缩活动，再由打印机打印输出。
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银杏叶提取物(含黄酮24%，银杏内酯6%，美国U.C Medicine公司)；乙酰胆碱(Ach,北京化学试剂三厂)；阿托品(Atropin,上海医药公司)；磷酸组胺(Histaminiphosphas,His,中国药品生物制品检定所)。所用药物由移液管给药，容量0.1～0.2ml，文中药物浓度为折换成的终末浓度；药物作用后，以37℃Kreb′s液换洗至正常。
以给药前5min的值为效应值；分别记录用药前后小肠平滑肌纵肌收缩强度和静息张力，并换算成变化百分率〔变化百分率=(效应值—对照值)/对照值×100%〕；所测数据以均数±标准差(
±s)表示，并作配对t检验判断差异的显著性。2 结 果
2.1不同浓度EGb对小肠平滑肌活动的影响
, 百拇医药
离体小肠平滑肌在实验条件下，自发活动规则，收缩强度为1.35±0.42mV，静息张力1.14±0.36g。对照组在营养液中加入Kerb′s液0.1～0.2ml，平滑肌活动无可测性变化。以微量移液管加入EGb(0.3mg/L～10mg/L)于平滑肌营养液中，平滑肌收缩活动明显减弱并有剂量依赖性关系(P<0.05，表1)。另在6个平滑肌肠段标本，发现EGb较高浓度时(50mg/L)平滑肌张力显著增加(P<0.05)，且不受阿托品(10μmol/L)的影响。
2.2 EGb对外源性Ach和His所致平滑肌挛缩的抑制作用
在平滑面浴槽中加入外源性Ach(1μmol/L)和His(2.3μmol/L)，均可引起平滑肌的强烈收缩，收缩强度和张力较用药前显著增加。若同时加入10mg/L剂量的EGb，则可明显抑制Ach和His引起的这一增强过程，其抑制率分别为51.41±23.32%和43.64±17.88%(P<0.01，表2)。
, http://www.100md.com
表1 EGb对小肠平滑肌自发活动的影响(
±s) 组 别例数
(n)
纵肌收缩强度(mV)
平滑肌张力(g)
用药前
用药后
用药前
用药后
EGb 0.3mg/L
8
, http://www.100md.com
1.21±0.33
0.91±0.29*
1.12±0.21
1.20±0.35
EGb 1mg/L
8
1.34±0.41
0.78±0.43*
1.05±0.30
0.92±0.38
EGb 10mg/L
, 百拇医药
8
1.31±0.43
0.65±0.32**△
1.10±0.33
1.25±0.61
EGb 50mg/L
8
1.28±0.37
0.69±0.41**
1.13±0.38
2.09±0.77*
, 百拇医药
与同用药前比较*P<0.05，**P<0.01，与0.3mg/L组比效△P<0.05表2 EGb对Ach和His所致平滑肌挛缩的抑制作用(
±s) 组 别例 数
平滑肌收缩强度
平滑肌张力
对照组
12
1.32±0.41
1.08±0.32
Ach
6
, 百拇医药
2.03±0.88**
1.51±0.63**
Ach+EGb
8
1.50±0.69
1.23±0.71
His
8
2.18±0.59**
1.34±0.36*
His+EGb
, 百拇医药
8
1.61±0.73
1.03±0.42
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01
2 讨 论
银杏叶味苦，性平，有活血平喘止痛的功效。近年来，对其提取物药理生理作用的研究已引起广泛关注。研究表明，EGb主要含有黄酮甙和银杏苦内酯。黄酮甙主要作用在于捕捉游离基，银杏苦内酯则是一种特异性的血小板活化因子受体阻断剂[1]，能发挥稳定细胞膜、改善血液流动特性、调整神经系统递质的关系、缓解平滑肌痉挛等作用[5]。本实验结果显示EGb在低浓度时(0.3mg/L～10mg/L)对离体豚鼠回肠平滑肌收缩具有明显的剂量依赖性抑制作用，且不影响平滑肌的张力。对于Ach和His所介导的平滑肌强直性收缩，EGb(10mg/L)均能明显拮抗。提示EGb具有在一定程度上调整小肠平滑肌活动功能性紊乱的作用，可有效地维持小肠的正常运动功能；而在高浓度(50mg/L)时，EGb尚可增加小肠平滑肌张力，该效应不能被M胆碱能受体阻断剂阿托品所阻断，表明不同浓度的EGb对平滑肌具有不同的影响，且该效应并非影响平滑肌上的胆碱能受体，更可能是通过改变或调整平滑肌细胞的某些离子通道或代谢过程。
, 百拇医药
小肠运动功能的影响因素和调节机制是一种很复杂的过程，涉及到神经、内分泌和小肠平滑肌细胞内外离子转运与环境因素等多个环节。从本实验结果可以推测EGb不仅在一定程度上可缓解肠道平滑肌的痉挛，也可调整由于胃肠道平滑肌内兴奋性和抑制性神经递质比例失调所致平滑肌功能的紊乱。虽然高浓度EGb对平滑肌活动加强的直接效应是否是其毒性反应，以及EGb影响Ach和His的确切机制尚有待进一步研究，但EGb对多种机体功能失调的治疗作用似乎主要受其所含银杏内酯与机体内活性物质相互作用的影响[4，6]。
参考文献
1，刘玲玲，于心若.银杏药用价值.中草药，1994；25：219
2，Wedizinische K,Kantonsspital L.Ginkgo myth and reality.Schweiz Rundsch Med Prax,1995；84：1
, 百拇医药
3，Pietri S,Maurelli E,Drien K，et al.Cardioprotective and anti-oxidant effects of the terpenoid constituents of ginkgo biloba extract.Mol Cell Cardiol,1997；29：733
4，Stucker O,Pons C,Duverger JP,et al.Effects of ginkgo biloba extract on arteriolar spasm in a rat cremaster muscle preparation.Imt J Microcire Clin Exp,1996；16：98
5，李明山.银杏叶活性成分及药理作用研究近况.安徽中医学院学报，1997；16(1)：64
6，李光仪，刘明登，李满芳.银杏苦内酯的药理和临床研究进展.中草药，1995；26(2)：100
收稿2000-03-10
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