妊娠早期人体胎盘中多巴胺-β-羟化酶活性的测定
作者：杜 卫 徐宏伟 王秀丽 张爱青 张崇理
单位：杜 卫 徐宏伟 王秀丽 青岛医学院生物化学教研室(青岛 266021)；张爱青 青岛医学院附属医院妇产科；张崇理 中科院动物所计划生育生殖生物学国家重点实验室
关键词：多巴胺β羟化酶；绒毛膜绒毛；分光光度法
青岛医学院学报990115 【摘要】 ①目的 探讨妊娠早期人体胎盘中多巴胺-β-羟化酶(DBH)活性及其与早期妊娠的关系。②方法 应用分光光度法对妊娠6～9周人体胎盘绒毛中DBH活性进行了测定。③结果 妊娠第8周胎盘绒毛中DBH的活性明显高于第6，7周,差异有显著性(F＝5.76，q＝5.88,3.64，P<0.05,0.01)，其他各组间比较差异无显著性(q=0.06～3.24,P>0.05)。④结论 妊娠早期人体胎盘中已存在着DBH，并可能参与妊娠的维持。
, http://www.100md.com 中国图书资料分类法分类号 R714.14
DETERMINATION OF DOPAMINE-B-HYDROXYLASE ACTIVITY IN HUMAN PLACENTA AT EARLY STAGE
Du Wei, Xu Hongwei, Wang Xiuli, et al
Department of Biochemistry, Qingdao Medical College, Qingdao 266021
【ABSTRACT】 Objective To study the activity of dopamine-B-hydroxylase(DBH) in human placenta at early pregnancy and its relationship with pregnancy. Methods Spectrophotometric method was performed to estimate the quantity of DBH in villous chorion between 6th and 8th week of pregnancy. Results The activity of DBH in human villous chorion increased along with the pregnant period, especially at early stage. The DBH activity of 8th week was significantly higher than that of 6th and 7th week(F=5.76,q=5.88,3.64,P<0.05, 0.01). No significant differences were found between other groups(q=0.06-3.24,P>0.05). Conclusion DBH existed in human placenta at early pregnant stage and was involved in the maintenance of pregnancy.
, 百拇医药
【KEY WORDS】 dopamine-b-hydroxylase; chorionic villi; spectrophotometric
多巴胺-β-羟化酶(DBH)催化多巴胺(DA)羟化生成去甲肾上腺素(NE)，是NE和肾上腺素合成的重要酶系之一，DBH多位于肾上腺髓质和交感神经末梢的嗜铬颗粒中〔1〕。有研究报道，人胎盘绒毛中确有NE和DA及其受体的存在〔2,3〕，并能在体外合成和释放NE〔4〕.为了进一步探讨儿茶酚胺类神经递质在人胎盘妊娠过程中的变化，本文对妊娠早期人胎盘中DBH的活性进行了测定。现报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料
6～9周人胎盘绒毛取自青岛医学院附属医院妇产科人工流产术后标本。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 DBH的制备 取妊娠6～9周人胎盘绒毛，测质量，按1∶5(m/m)加入8mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.4)，匀浆后，4℃下15 000r/min离心30min ，取上清液测酶活力。
1.2.2 酶活力的测定 按改良的 Ljons〔1〕方法进行。1 个酶活力单位规定为37℃每秒催化1μmol/L胺所需要的酶量。
1.2.3 蛋白质含量测定 按Lowry〔5〕的方法测定蛋白质含量。以牛血清白蛋白为标准品。
1.3 统计学处理
实验结果用
表示，组间比较采用方差分析进行处理。
, 百拇医药
2 结 果
妊娠第8周胎盘绒毛中DBH活性比第6，7周显著增高(F＝5.76，q=5.88,3.64,P<0.05,0.01)，其他各组间比较差异无显著性(q=0.06～3.24，P>0.05)。见表1.
表1 妊娠早期人胎盘中DBH活性的变化(ξ/μmol.s-1.L-1,) 妊娠周数
n
DBH
6
12
, http://www.100md.com
17.14± 6.15
7
17
24.12± 9.21
8
9
33.70±13.30*
9
9
23.93± 6.29
与6,7周比较，*F=5.76,q=5.88,3.64,P<0.05,0.01
, 百拇医药
3 讨 论
研究发现人类胎盘可以产生下丘脑激素，提示在妊娠期，胎盘中一些激素除了对胎盘起作用之外，亦作用于胎儿和母亲。大量体外研究显示，胎盘具有一种内源性调节自身分泌产物的功能。它含有大量的神经递质、激素、神经肽等生物活性物质，是一种相对独立极其复杂的神经内分泌器官〔6〕。本组实验结果显示，在妊娠早期人胎盘绒毛中存在着催化儿茶酚胺合成的DBH.它们可能催化儿茶酚胺合成或分泌，并参与妊娠过程。
本文结果显示，妊娠第8周的酶含量比第6，7周明显增加，提示在妊娠早期随着妊娠周数的增加，NE的合成逐步增加。我们曾用放射免疫方法证明，人体胎盘绒毛的促性腺激素释放激素(GnRH )从妊娠第6周到第10周含量逐渐增加〔4,6,7〕，这和本文检测的DBH的含量变化相平行。有研究报道，下丘脑中NE对GnRH的分泌起促进作用，DA能刺激下丘脑释放GnRH〔2〕.提示妊娠第6～8周DBH活性的增加，可能通过影响NE和DA的变化，从而对胎盘GnRH的产生起调节作用。
, http://www.100md.com
本文为中科院动物所计划生育生殖生物学国家重点实验室课题
参考文献
1 Ljons T. Dopamine-β-Monooxygenase from bovine adrenal medulla.Methods in Enzymology，1987，142:596
2 石 佳，黄威权,张崇理,等.人早期胎盘绒毛中去甲肾上腺素和多巴胺的免疫组织化学研究.科学通报，1994，39(8):750
3 张荣庆，石 佳，唐美仪，等.多巴胺和去甲肾上腺素抗独特型抗体的制备与鉴定.动物学报，1995，41(1):109
4 Zhang JL，Cheng LR，Wang H.Neuropeptides and neurotransmitters in human placental vill.Neuroendocrinology，1991，53:77
5 Lowry OH.Protein measurement with the folin phenol reagent.J Biol Chem，1951，193:265
6 张殿明，徐隆绍.神经内分泌学.北京医药科技出版社，1991.349
7 邹爱民，张崇理，沈卫斌，等.妊娠期胎盘组织与血浆促性腺素释放激素的初步研究.基础医学与临床，1994，14(4):64
(1998-06-22收稿 1999-01-11修回), 百拇医药
单位：杜 卫 徐宏伟 王秀丽 青岛医学院生物化学教研室(青岛 266021)；张爱青 青岛医学院附属医院妇产科；张崇理 中科院动物所计划生育生殖生物学国家重点实验室
关键词：多巴胺β羟化酶；绒毛膜绒毛；分光光度法
青岛医学院学报990115 【摘要】 ①目的 探讨妊娠早期人体胎盘中多巴胺-β-羟化酶(DBH)活性及其与早期妊娠的关系。②方法 应用分光光度法对妊娠6～9周人体胎盘绒毛中DBH活性进行了测定。③结果 妊娠第8周胎盘绒毛中DBH的活性明显高于第6，7周,差异有显著性(F＝5.76，q＝5.88,3.64，P<0.05,0.01)，其他各组间比较差异无显著性(q=0.06～3.24,P>0.05)。④结论 妊娠早期人体胎盘中已存在着DBH，并可能参与妊娠的维持。
, http://www.100md.com 中国图书资料分类法分类号 R714.14
DETERMINATION OF DOPAMINE-B-HYDROXYLASE ACTIVITY IN HUMAN PLACENTA AT EARLY STAGE
Du Wei, Xu Hongwei, Wang Xiuli, et al
Department of Biochemistry, Qingdao Medical College, Qingdao 266021
【ABSTRACT】 Objective To study the activity of dopamine-B-hydroxylase(DBH) in human placenta at early pregnancy and its relationship with pregnancy. Methods Spectrophotometric method was performed to estimate the quantity of DBH in villous chorion between 6th and 8th week of pregnancy. Results The activity of DBH in human villous chorion increased along with the pregnant period, especially at early stage. The DBH activity of 8th week was significantly higher than that of 6th and 7th week(F=5.76,q=5.88,3.64,P<0.05, 0.01). No significant differences were found between other groups(q=0.06-3.24,P>0.05). Conclusion DBH existed in human placenta at early pregnant stage and was involved in the maintenance of pregnancy.
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【KEY WORDS】 dopamine-b-hydroxylase; chorionic villi; spectrophotometric
多巴胺-β-羟化酶(DBH)催化多巴胺(DA)羟化生成去甲肾上腺素(NE)，是NE和肾上腺素合成的重要酶系之一，DBH多位于肾上腺髓质和交感神经末梢的嗜铬颗粒中〔1〕。有研究报道，人胎盘绒毛中确有NE和DA及其受体的存在〔2,3〕，并能在体外合成和释放NE〔4〕.为了进一步探讨儿茶酚胺类神经递质在人胎盘妊娠过程中的变化，本文对妊娠早期人胎盘中DBH的活性进行了测定。现报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料
6～9周人胎盘绒毛取自青岛医学院附属医院妇产科人工流产术后标本。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 DBH的制备 取妊娠6～9周人胎盘绒毛，测质量，按1∶5(m/m)加入8mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.4)，匀浆后，4℃下15 000r/min离心30min ，取上清液测酶活力。
1.2.2 酶活力的测定 按改良的 Ljons〔1〕方法进行。1 个酶活力单位规定为37℃每秒催化1μmol/L胺所需要的酶量。
1.2.3 蛋白质含量测定 按Lowry〔5〕的方法测定蛋白质含量。以牛血清白蛋白为标准品。
1.3 统计学处理
实验结果用
表示，组间比较采用方差分析进行处理。, 百拇医药
2 结 果
妊娠第8周胎盘绒毛中DBH活性比第6，7周显著增高(F＝5.76，q=5.88,3.64,P<0.05,0.01)，其他各组间比较差异无显著性(q=0.06～3.24，P>0.05)。见表1.
表1 妊娠早期人胎盘中DBH活性的变化(ξ/μmol.s-1.L-1,
) 妊娠周数n
DBH
6
12
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17.14± 6.15
7
17
24.12± 9.21
8
9
33.70±13.30*
9
9
23.93± 6.29
与6,7周比较，*F=5.76,q=5.88,3.64,P<0.05,0.01
, 百拇医药
3 讨 论
研究发现人类胎盘可以产生下丘脑激素，提示在妊娠期，胎盘中一些激素除了对胎盘起作用之外，亦作用于胎儿和母亲。大量体外研究显示，胎盘具有一种内源性调节自身分泌产物的功能。它含有大量的神经递质、激素、神经肽等生物活性物质，是一种相对独立极其复杂的神经内分泌器官〔6〕。本组实验结果显示，在妊娠早期人胎盘绒毛中存在着催化儿茶酚胺合成的DBH.它们可能催化儿茶酚胺合成或分泌，并参与妊娠过程。
本文结果显示，妊娠第8周的酶含量比第6，7周明显增加，提示在妊娠早期随着妊娠周数的增加，NE的合成逐步增加。我们曾用放射免疫方法证明，人体胎盘绒毛的促性腺激素释放激素(GnRH )从妊娠第6周到第10周含量逐渐增加〔4,6,7〕，这和本文检测的DBH的含量变化相平行。有研究报道，下丘脑中NE对GnRH的分泌起促进作用，DA能刺激下丘脑释放GnRH〔2〕.提示妊娠第6～8周DBH活性的增加，可能通过影响NE和DA的变化，从而对胎盘GnRH的产生起调节作用。
, http://www.100md.com
本文为中科院动物所计划生育生殖生物学国家重点实验室课题
参考文献
1 Ljons T. Dopamine-β-Monooxygenase from bovine adrenal medulla.Methods in Enzymology，1987，142:596
2 石 佳，黄威权,张崇理,等.人早期胎盘绒毛中去甲肾上腺素和多巴胺的免疫组织化学研究.科学通报，1994，39(8):750
3 张荣庆，石 佳，唐美仪，等.多巴胺和去甲肾上腺素抗独特型抗体的制备与鉴定.动物学报，1995，41(1):109
4 Zhang JL，Cheng LR，Wang H.Neuropeptides and neurotransmitters in human placental vill.Neuroendocrinology，1991，53:77
5 Lowry OH.Protein measurement with the folin phenol reagent.J Biol Chem，1951，193:265
6 张殿明，徐隆绍.神经内分泌学.北京医药科技出版社，1991.349
7 邹爱民，张崇理，沈卫斌，等.妊娠期胎盘组织与血浆促性腺素释放激素的初步研究.基础医学与临床，1994，14(4):64
(1998-06-22收稿 1999-01-11修回), 百拇医药