bcl-2基因在急性髓系白血病细胞中的表达及意义
作者：秦苑 何勤 毕慧 杨玲 尹列芬 刘月波
单位：(昆明医学院第二附属医院血液科，昆明 650101)
关键词：bcl-2基因；急性白血病/髓系；基因表达
昆明医学院学报000212 摘要：采用链霉亲和素过氧化酶免疫组织化学方法(S-P法)检测30例初 发成人急性髓系白血病(AML)患者的骨髓细胞bcl-2蛋白表达.结果：(1)AML患者骨髓细胞中 bcl-2蛋白阳性表达率为(55.12±23.78)%(19%～93%)，显著高于正常对照(P<0.01) .(2)AML按FAB分型各亚型间比较：bcl-2蛋白表达在M1，M2型阳性率较高(60.58±19 .05)%；M3型则较低(21.50±6.22)%；M4，M5型最高(69.64±14.96)%.(3)经标 准诱导治疗后，完全缓解(CR)组的bcl-2蛋白表达显著低于未缓解(NR)组(P<0.05). 提示：bcl-2蛋白在AML细胞中呈高表达，并为白血病化疗耐药的预后指标之一.
, 百拇医药
中图分类号：R 733.7 文献标识码：A 文章编号：1003-4706(2000)02-0051-07
Expression of Bcl-2 Gene in Acute Leukemia
and Its Significance
QIN Yuan，HE Qin，BI Hui，YANG Ling，YIN Lie-fen，LIU Yue-bo
(Department of Hematology, the Second Affiliated Hospital of Kun ming Medical College, Kunming 650101)
Abstract:By means of Streptavidin-Peroxidase immunohistochemical stain ing assay, the expression of bc1-2 gene was investigated in 30 patients with acu te myeloid leukemia(AML). The results showed: (1) The percentage of bc1-2 + cell s in AML was 55.12% ±23.78% ( range, 19% to 93%), which was significantly hig her than those in control( P<0.01). (2) According to French-American-Briti sh classification, the percentage of bc1-2+cells was higher in M1 and M2 types ( 60.58% ±19.05%), lower in M3 (21.50%± 6.22%) and the highest in M4 and M5 types( 69.64% ± 14.96%).(3) After the standard inducing therapy of AML, bcl-2 expression in complete remission group was obviously lower than that in resista nt disease group(P<0.01). We conclude that bcl-2 expression in AML is hig h er than that in normal human myeloid cells. High expression of be1-2 is associat ed with a low complete remission rate after intensive chemotherapy.
, 百拇医药
Key words：Bcl-2 gene；Acute myeloid leukemia；Gene Expression
近年发现bcl-2基因在血液系统恶性肿瘤中常有异常表达.我们用抗bcl-2蛋 白的单克隆抗体，采用免疫组织化学S-P法，对初治急性髓系白血病(AML)骨髓细胞中bcl-2 蛋白进行检测，并探讨其临床意义.
1 材料和方法
1.1 病例
1995年5月至1998年10月收治的初发成人急性髓系白血病30例，其中M11例，M2 11例，M 3 6例，M4 9例，M5 2例，M7 1例.男性14人，女性16人.年龄14～70岁，平均35.2 岁 .M3首选维甲酸诱导治疗，其余类型选择DA 3+7方案治疗，两疗程后进行疗效判定.可评价 疗效者26例.疗效判定按照1987年苏州会议标准.正常对照10例.
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1.2 标本制备及试剂
于化疗前抽取骨髓液0.2～0.3 mL涂片，干燥后置-30℃保存备检.抗bcl-2蛋白单抗购自 北京中山生化公司，免疫组织化学S-P试剂盒购自福州迈新公司.
1.3 检测方法
采用免疫组织化学S-P法.涂片经冷丙酮固定，3%H2O2阻断内源性过氧化物酶，10%非免 疫山羊血清阻断非特异性抗原，加入1抗(bcl-2蛋白单克隆抗体)，4℃冰箱过夜，次日顺序 加入2抗及3抗，分别孵育10 min，3，3-二氨基联苯胺(TBA)染色，苏木素复染，封片后专人 读片.实验中用PBS代替1抗作为阴性对照.细胞浆内有棕色颗粒者为bcl-2蛋白阳性.在油 镜下计数200个白血病细胞，计算阳性率.
1.4 统计学处理
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所有数据均经PEMS软件包处理，两组比较采用t检验，3组两两比较采用q检验(Newm an-Keuls)法.
2 结果
2.1 bcl-2蛋白在初治AML中的表达
30例AML患者bcl-2蛋白阳性表达率为19%～93%，均数为(55.12±23.78)%，正常对照组为( 19.23±5.48)%，两组比较有明显差异(P<0.01).
2.2 AML按FAB分类各亚型bcl-2蛋白表达情况
结果见附表.
附表 按FAB分类AML各亚型bcl-2蛋白
表达率(
±s)% 分 型
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例数
bcl-2阳性率
M1+M2
12
60.58±19.05*
M3
6
21.50±6.22
M4+M5
11
69.64±14.96*
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与M3型比较，*P<0.01. 由附表可见分化程度较低者(M1，M2)bcl-2蛋白阳性率较高；M3则较低；M4，M5 最高.
2.3 AML bcl-2蛋白表达与化疗疗效关系
在26例治疗AML中，CR 18例，NR 8例.CR组bcl-2阳性率为(43.21±18.70)%，NR组为(67. 44±19.65)%.NR组的bcl-2蛋白表达高于CR组，两组比较检验结果有显著差异(P<0.0 5).
3 讨论
bcl-2基因属细胞原癌基因，为一细胞凋亡(PCD)抑制基因.其编码的26KD蛋白定位于细胞浆 ，存在于淋巴细胞、未成熟造血细胞、上皮细胞、神经细胞及多种肿瘤细胞中，功能为促进 细胞生存，延长其寿命[1].目前认为造血生长因子为造血细胞提供维持生存和刺 激分化两种信号.bcl-2蛋白仅作用于维持生存信号途径，在没有生长因子存在时可维持造 血细胞生存，但不能诱导分化[2].本研究结果显示AML的bcl-2蛋白表达水平远高 于正常骨髓细胞，说明细胞凋亡通路障碍在AML的形成和发展过程中具有重要意义.本组资 料表明随粒系白血病细胞分化程度增高，bcl-2蛋白表达水平下降.文献报道bcl-2高表达的 细胞能耐受多种细胞毒药物的杀伤作用，使细胞凋亡明显延迟，在药物去除后迅速恢复增生 ，导致白血病复发[3].本资料未缓解组bcl-2蛋白表达水平明显高于缓解组，支持 bcl-2蛋白异常高表达使AML细胞获得异常的生存优势，bcl-2蛋白参与细胞对化疗药物的耐 药机制，是白血病耐药的内在原因之一.bcl-2蛋白高表达是一个指示AML不良预后的指标.
, http://www.100md.com
基金项目：云南省应用基础研究基金资助项目(95C139M).
作者简介：秦苑(1963～)，女，广西桂林市人，主治医师，硕士，主要从事恶性血液病的研究.
参 考 文 献
[1] HOCKENBERY D，NUNEZ G，MILLIAM C，et al.Bcl-2 is an inner mitochon dri al membrane protein that blocks programmed cell death[J].Nature，1990，348:334
[2] VAUX L，CORY S，ADANS M.Bcl-2 gene promotes hemapoietic cell survi v al and cooperates with c-myc to immortalize pre-B cells[J].Nature，1988，335:4 40
[3] MIYASHITA T，REED J C.Bcl-2 oncoprotein blocks chemotherapy induce d apoptosis ina human leukemia cell line[J].Blood，1993，81:151
(2000-03-10收稿), http://www.100md.com
单位：(昆明医学院第二附属医院血液科，昆明 650101)
关键词：bcl-2基因；急性白血病/髓系；基因表达
昆明医学院学报000212 摘要：采用链霉亲和素过氧化酶免疫组织化学方法(S-P法)检测30例初 发成人急性髓系白血病(AML)患者的骨髓细胞bcl-2蛋白表达.结果：(1)AML患者骨髓细胞中 bcl-2蛋白阳性表达率为(55.12±23.78)%(19%～93%)，显著高于正常对照(P<0.01) .(2)AML按FAB分型各亚型间比较：bcl-2蛋白表达在M1，M2型阳性率较高(60.58±19 .05)%；M3型则较低(21.50±6.22)%；M4，M5型最高(69.64±14.96)%.(3)经标 准诱导治疗后，完全缓解(CR)组的bcl-2蛋白表达显著低于未缓解(NR)组(P<0.05). 提示：bcl-2蛋白在AML细胞中呈高表达，并为白血病化疗耐药的预后指标之一.
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中图分类号：R 733.7 文献标识码：A 文章编号：1003-4706(2000)02-0051-07
Expression of Bcl-2 Gene in Acute Leukemia
and Its Significance
QIN Yuan，HE Qin，BI Hui，YANG Ling，YIN Lie-fen，LIU Yue-bo
(Department of Hematology, the Second Affiliated Hospital of Kun ming Medical College, Kunming 650101)
Abstract:By means of Streptavidin-Peroxidase immunohistochemical stain ing assay, the expression of bc1-2 gene was investigated in 30 patients with acu te myeloid leukemia(AML). The results showed: (1) The percentage of bc1-2 + cell s in AML was 55.12% ±23.78% ( range, 19% to 93%), which was significantly hig her than those in control( P<0.01). (2) According to French-American-Briti sh classification, the percentage of bc1-2+cells was higher in M1 and M2 types ( 60.58% ±19.05%), lower in M3 (21.50%± 6.22%) and the highest in M4 and M5 types( 69.64% ± 14.96%).(3) After the standard inducing therapy of AML, bcl-2 expression in complete remission group was obviously lower than that in resista nt disease group(P<0.01). We conclude that bcl-2 expression in AML is hig h er than that in normal human myeloid cells. High expression of be1-2 is associat ed with a low complete remission rate after intensive chemotherapy.
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Key words：Bcl-2 gene；Acute myeloid leukemia；Gene Expression
近年发现bcl-2基因在血液系统恶性肿瘤中常有异常表达.我们用抗bcl-2蛋 白的单克隆抗体，采用免疫组织化学S-P法，对初治急性髓系白血病(AML)骨髓细胞中bcl-2 蛋白进行检测，并探讨其临床意义.
1 材料和方法
1.1 病例
1995年5月至1998年10月收治的初发成人急性髓系白血病30例，其中M11例，M2 11例，M 3 6例，M4 9例，M5 2例，M7 1例.男性14人，女性16人.年龄14～70岁，平均35.2 岁 .M3首选维甲酸诱导治疗，其余类型选择DA 3+7方案治疗，两疗程后进行疗效判定.可评价 疗效者26例.疗效判定按照1987年苏州会议标准.正常对照10例.
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1.2 标本制备及试剂
于化疗前抽取骨髓液0.2～0.3 mL涂片，干燥后置-30℃保存备检.抗bcl-2蛋白单抗购自 北京中山生化公司，免疫组织化学S-P试剂盒购自福州迈新公司.
1.3 检测方法
采用免疫组织化学S-P法.涂片经冷丙酮固定，3%H2O2阻断内源性过氧化物酶，10%非免 疫山羊血清阻断非特异性抗原，加入1抗(bcl-2蛋白单克隆抗体)，4℃冰箱过夜，次日顺序 加入2抗及3抗，分别孵育10 min，3，3-二氨基联苯胺(TBA)染色，苏木素复染，封片后专人 读片.实验中用PBS代替1抗作为阴性对照.细胞浆内有棕色颗粒者为bcl-2蛋白阳性.在油 镜下计数200个白血病细胞，计算阳性率.
1.4 统计学处理
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所有数据均经PEMS软件包处理，两组比较采用t检验，3组两两比较采用q检验(Newm an-Keuls)法.
2 结果
2.1 bcl-2蛋白在初治AML中的表达
30例AML患者bcl-2蛋白阳性表达率为19%～93%，均数为(55.12±23.78)%，正常对照组为( 19.23±5.48)%，两组比较有明显差异(P<0.01).
2.2 AML按FAB分类各亚型bcl-2蛋白表达情况
结果见附表.
附表 按FAB分类AML各亚型bcl-2蛋白
表达率(
±s)% 分 型, 百拇医药
例数
bcl-2阳性率
M1+M2
12
60.58±19.05*
M3
6
21.50±6.22
M4+M5
11
69.64±14.96*
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与M3型比较，*P<0.01. 由附表可见分化程度较低者(M1，M2)bcl-2蛋白阳性率较高；M3则较低；M4，M5 最高.
2.3 AML bcl-2蛋白表达与化疗疗效关系
在26例治疗AML中，CR 18例，NR 8例.CR组bcl-2阳性率为(43.21±18.70)%，NR组为(67. 44±19.65)%.NR组的bcl-2蛋白表达高于CR组，两组比较检验结果有显著差异(P<0.0 5).
3 讨论
bcl-2基因属细胞原癌基因，为一细胞凋亡(PCD)抑制基因.其编码的26KD蛋白定位于细胞浆 ，存在于淋巴细胞、未成熟造血细胞、上皮细胞、神经细胞及多种肿瘤细胞中，功能为促进 细胞生存，延长其寿命[1].目前认为造血生长因子为造血细胞提供维持生存和刺 激分化两种信号.bcl-2蛋白仅作用于维持生存信号途径，在没有生长因子存在时可维持造 血细胞生存，但不能诱导分化[2].本研究结果显示AML的bcl-2蛋白表达水平远高 于正常骨髓细胞，说明细胞凋亡通路障碍在AML的形成和发展过程中具有重要意义.本组资 料表明随粒系白血病细胞分化程度增高，bcl-2蛋白表达水平下降.文献报道bcl-2高表达的 细胞能耐受多种细胞毒药物的杀伤作用，使细胞凋亡明显延迟，在药物去除后迅速恢复增生 ，导致白血病复发[3].本资料未缓解组bcl-2蛋白表达水平明显高于缓解组，支持 bcl-2蛋白异常高表达使AML细胞获得异常的生存优势，bcl-2蛋白参与细胞对化疗药物的耐 药机制，是白血病耐药的内在原因之一.bcl-2蛋白高表达是一个指示AML不良预后的指标.
, http://www.100md.com
基金项目：云南省应用基础研究基金资助项目(95C139M).
作者简介：秦苑(1963～)，女，广西桂林市人，主治医师，硕士，主要从事恶性血液病的研究.
参 考 文 献
[1] HOCKENBERY D，NUNEZ G，MILLIAM C，et al.Bcl-2 is an inner mitochon dri al membrane protein that blocks programmed cell death[J].Nature，1990，348:334
[2] VAUX L，CORY S，ADANS M.Bcl-2 gene promotes hemapoietic cell survi v al and cooperates with c-myc to immortalize pre-B cells[J].Nature，1988，335:4 40
[3] MIYASHITA T，REED J C.Bcl-2 oncoprotein blocks chemotherapy induce d apoptosis ina human leukemia cell line[J].Blood，1993，81:151
(2000-03-10收稿), http://www.100md.com