食道癌患者外周血红细胞与T淋巴细胞免疫功能的研究
作者：佟书娟 王建珍 王宁萍 尹清云 王大军 赵建宁
单位：(宁夏医学院微生物学教研室，银川 750004；)
关键词：食道癌；红细胞免疫；细胞免疫
宁夏医学院学报000202 摘要：目的：研究食道癌患者的红细胞免疫及细胞免疫功能。方法：用形态学方法测定食道癌患者RBC-C3bR、RBC-IC、NTER花环率及T淋巴细胞转化率。结果：食道癌患者RBC-C3bR花环率、NTER花环率及T淋巴细胞转化率均显著低于正常对照组(P均<0.01)。而RBC-IC花环率显著高于正常对照组(P<0.01)。经手术治疗后食道癌患者RBC-C3bR花环率、NTER花环率及T淋巴细胞转化率较术前明显上升，但仍低于正常对照组；RBC-IC花环率较术前明显降低(P<0.01)，但仍高于正常对照组(P<0.01)。结论：食道癌患者红细胞免疫和细胞免疫功能均处于抑制状态，该检测对其发病机理探讨、疗效观察和预后判断均有一定临床意义。
, http://www.100md.com
中图分类号：R735.1 文献标识码：A
文章编号：1005-8486(2000)02-0082-03
Study on the Peripheral Blood Red-cell and T-cell Immune Functions in Patients With Esophageal Cancer
TONG Shu-juan, WANG Jan-zhen, WANG Ning-ping, et al
(Dept of Microbiol, Ningxia Med. Coll., Yinchuan 750004)
Abastract: Objective: To study the red-cell、 T-cell immune functions in esophageal cancer patients. Methods: The RBC-C3bR、RBC-IC,NTER rosettes and T lymphocyte transformation test in esophageal cancer patients were detected using morphologic methods. Results: The rates of RBC-C3bR rosettes、 NTER rosettes and T lymphocyte transformation test in esophageal cancer patients were much lower than that of controls and the rate of RBC-IC rossttes was significantly higher than that of controls (P<0.01). The rates of RBC-C3bR rosettes，NTER rosettes and T lymphocyte transformation test detected after removal of the carcinoma were significantly higher than that of patients before operation, but still lower than that of controls, the rate of RBC-IC rosettes detected after removing the carcinoma was significantly lower than that of patients before operation (P<0.01),but still higher than that of controls (P<0.01). Conclusion: The red-cell and T-cell immune functions in esophageal cancer patients were suppressed and the monitoring of these parameters is of significance for the study of etiopathogenesis, therapeutic efficacy and prognosis judgement.
, 百拇医药
Key words: esophageal cancer; red-cell immune; T-cell immune
肿瘤患者的免疫功能尤其是红细胞免疫和细胞免疫与肿瘤的发生发展密切相关，为了研究癌症患者不同免疫功能变化规律及相互间的关系，我们对食道癌患者作了红细胞免疫功能及T淋巴细胞转化功能测定，并与正常人群的测定结果进行了比较，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 研究对象
1.1.1 观察组 住院食道癌患者26例，均经纤维内窥镜与病理检查确诊。男20例，女6例，平均年龄57.9岁(37～73岁)；其中上段癌2例，中段癌15例，下段癌9例。并对其中经手术治疗后病情好转的13例患者再次采血检测。
1.1.2 对照组 同期健康献血员30例，男23例，女7例，平均年龄50.5岁(30～70岁)。
, 百拇医药
1.2 试剂
1.2.1 补体致敏酵母及未致敏酵母、补体未致敏S180癌冻干试剂，由陕西省人民医院免疫研究室提供。
1.2.2 RPMI 1640由Crand Island, New York. USA提供；植物血凝素(PHA)为上海伊华临床医学科技公司产品；秋水仙素为上海化学试剂厂产品。
1.3 方法
1.3.1 红细胞C3b受体(RBC-C3bR)花环试验，红细胞免疫复合物(RBC-IC)花环试验和自然肿瘤红细胞花环(NTER)试验，均按刘景田[1]法进行。
1.3.2 T淋巴细胞转化试验 无菌抽取静脉血0.5ml，肝素抗凝，加到2个含培养液5ml的培养瓶中(培养液含20%小牛血清、80%RPMI 1640、青霉素100IU/ml、链霉素100IU/ml、PHA液0.2ml)，每瓶含血量0.2ml。摇匀培养物后置37℃恒温培养箱中培养，每天轻轻振荡1～2次。在培养68～70h后加入秋水仙素(浓度为100μg/ml)，混匀，继续放入37℃恒温箱2～4h。培养结束后，将配养物吸到清洁小试管中进行离心，1000转/min，离心10min，弃去上清液，加入5ml 0.075M KCl溶液，用滴管混匀，置37℃恒温箱内15min进行低渗处理，低渗后立即加入0.5ml固定液(甲醇∶冰乙酸=3∶1)混匀，离心1000转/min，10min。吸去上清液，加入固定液5ml，混匀后静置15min，然后以1000转/min，离心10min，弃去上清液，再加入固定液5ml，混匀后静置15min，1000转/min，离心10min，吸去上清液，沉淀混匀，涂片两张，自然干燥后瑞氏染色，水洗后镜检，计数200个淋巴细胞，并计算出淋巴细胞转化百分率。
, 百拇医药
2 结果
2.1 26例食道癌患者红细胞免疫功能和细胞免疫功能测定结果见表1。
食道癌患者RBC-C3bR花环率、NTER花环率及淋巴细胞转化率与正常对照相比，明显降低，RBC-IC花环率与正常对照相比，明显增高。提示食道癌患者红细胞C3b受体(CR1)活性下降，粘附肿瘤细胞的能力下降，红细胞膜上吸附的免疫复合物(IC)量增多；同时细胞免疫功能也降低。
2.2 我们对上述病例中的13例，在术前与术后10d左右进行了两次红细胞免疫和细胞免疫功能测定，结果见表2。
表1 食道癌患者红细胞免疫和细胞免疫功能测定结果(
±s)% 组 别
, 百拇医药
n
RBC-C3bR花环率
RBC-IC花环率
NTER花环率
淋巴细胞转化率
食道癌
26
13.76±2.82**
23.45±4.18**
4.00±0.97**
48.42±5.31**
, 百拇医药
正常对照
30
26.74±3.67
11.21±1.60
12.54±2.09
74.56±4.57
与正常对照相比，**P<0.01表2 食道癌患者术前术后红细胞免疫和细胞免疫功能测定结果(±s)% 组 别
n
RBC-C3bR花环率
RBC-IC花环率
, http://www.100md.com
NTER花环率
淋巴细胞转化率
食道癌术前
13
13.47±2.44**
24.50±2.35**
3.88±0.96*
47.65±5.97*
食道癌术后
13
20.18±2.15△△
, http://www.100md.com
14.81±2.40△△
4.89±1.10△△
53.71±3.66△△
正常对照
30
26.74±3.67
11.21±1.60
12.54±2.09
74.56±4.57
注：食道癌术前与术后相比，*P<0.05***P<0.01
, 百拇医药 食道癌术后与正常对照相比，△△P<0.01
由表2可见，经手术治疗后食道癌患者RBC-C3bR花环率、NTER花环率及淋巴细胞转化率较术前明显增高，但仍低于正常对照。RBC-IC花环率较术前明显降低，但仍高于正常对照。提示术后食道癌患者红细胞CR1活性、粘附肿瘤细胞的能力及细胞免疫功能均较术前明显上升，红细胞膜上吸附的IC量明显减少，但均未达到正常人水平。
3 讨论
肿瘤的发生发展与机体免疫反应密切相关，而红细胞作为一种免疫细胞，参与机体的多种免疫反应，所以，红细胞在抗肿瘤免疫中的作用研究日益受到关注。现已发现红细胞上有许多与免疫有关的物质，如CR1、CR3、CD58、CD59、IL-8R、SOD酶等，均参与机体复杂的免疫网络调控作用[2]。红细胞不仅可通过CR1免疫粘附肿瘤细胞，还可通过过氧化物酶等作用，对癌细胞起效应细胞作用，可阻止癌细胞血行转移[3]。而且可通过红细胞膜CD58、CD59与T淋巴细胞膜CD2免疫粘附，激活T淋巴细胞的免疫功能[4]。红细胞膜上还有IL-8R参与吞噬细胞互相作用的免疫调控[2]。
, http://www.100md.com
目前研究红细胞免疫最多的是CR1，即红细胞表面I型补体受体，由于红细胞数量远多于白细胞，红细胞便成了清除IC(抗原抗体复合物、抗原补体复合物)最主要的物质。本实验结果显示，食道癌患者红细胞免疫功能紊乱与低下，表现为红细胞CR1活性下降，免疫粘附的IC不易清除，粘附肿瘤细胞的能力下降。其原因可能是：①恶性肿瘤病人体内大量形成的IC可覆盖并粘附于红细胞膜上，使红细胞携带IC增加，造成红细胞膜上CR1空位减少，以致红细胞清除IC能力下降[5]。②IC的大量形成又将抑制T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤功能，形成恶性循环，使红细胞免疫功能进一步下降。③肿瘤患者的血清中红细胞免疫抑制因子增多，导致红细胞免疫下降[6]。食道癌患者在红细胞免疫功能低下的同时其细胞免疫功能也明显降低，表现为T淋巴细胞转化率下降，表明食道癌患者红细胞免疫功能和细胞免疫功能均处于抑制状态。
本实验还对其中13例食道癌患者术前与术后10d各种免疫功能进行了检测，结果显示患者术后红细胞CR1活性上升，免疫粘附的IC有所下降，粘附肿瘤细胞的能力增强，T淋巴细胞转化率也明显回升。表明这四项免疫指标的检测对食道癌发病机理探讨、疗效观察和预后判断均有一定的临床意义。临床上，癌症患者的治疗，通常是手术加放疗、化疗，但上述措施均不利免疫功能的恢复，所以提倡在癌症患者手术及放、化疗时，应使用免疫增强剂，改善并提高患者的免疫功能。
, 百拇医药
在实验中，对T淋巴细胞转化试验我们采用了改良方法，即在对全血培养68～70h后加入秋水仙素，使细胞分裂停止在中期。另外，当细胞培养结束后将培养物中加入0.075M KCl溶液进行低渗处理，使RBC在低渗环境中被破坏，这样很容易辨认淋巴细胞是否发生了转化，从而提高了淋转形态学检测的准确率。
参考文献：
[1] 刘景田，张 洁.红细胞免疫学[M].西安：陕西科学技术出版社，1995.28，41
[2] Deckert M, Kubar J, Bernard A. CD58 and CD59 molecules exhibit potentializing effects in T cell adhesion and activation [J]. J Immunol, 1992,148(3):672
, 百拇医药
[3] Siegel I, Liu TL, Gleicher N. The red-cell immune system [J].Lancet, 1981, 8246(2)：556
[4] Deckert M, Kubar J, Zoccola D. CD59 molecule: a second ligand for CD2 in T cell adhesion [J]. Eur J Immunol, 1992,22(11):2943
[5] 郭 峰，虞紫茜，赵中平.红细胞免疫功能的初步观察 [J]. 中华医学杂志，1982,62(12)：715
[6] Ng YC, Schifferll JA, Walport J. Immune complexes and erythrocyte CR1 (complexes receptor type 1) effect of CR1 numbers on binding and release reaction [J].Clin Exp Immunol, 1988,74:481
收稿日期：1999-11-29, 百拇医药
单位：(宁夏医学院微生物学教研室，银川 750004；)
关键词：食道癌；红细胞免疫；细胞免疫
宁夏医学院学报000202 摘要：目的：研究食道癌患者的红细胞免疫及细胞免疫功能。方法：用形态学方法测定食道癌患者RBC-C3bR、RBC-IC、NTER花环率及T淋巴细胞转化率。结果：食道癌患者RBC-C3bR花环率、NTER花环率及T淋巴细胞转化率均显著低于正常对照组(P均<0.01)。而RBC-IC花环率显著高于正常对照组(P<0.01)。经手术治疗后食道癌患者RBC-C3bR花环率、NTER花环率及T淋巴细胞转化率较术前明显上升，但仍低于正常对照组；RBC-IC花环率较术前明显降低(P<0.01)，但仍高于正常对照组(P<0.01)。结论：食道癌患者红细胞免疫和细胞免疫功能均处于抑制状态，该检测对其发病机理探讨、疗效观察和预后判断均有一定临床意义。
, http://www.100md.com
中图分类号：R735.1 文献标识码：A
文章编号：1005-8486(2000)02-0082-03
Study on the Peripheral Blood Red-cell and T-cell Immune Functions in Patients With Esophageal Cancer
TONG Shu-juan, WANG Jan-zhen, WANG Ning-ping, et al
(Dept of Microbiol, Ningxia Med. Coll., Yinchuan 750004)
Abastract: Objective: To study the red-cell、 T-cell immune functions in esophageal cancer patients. Methods: The RBC-C3bR、RBC-IC,NTER rosettes and T lymphocyte transformation test in esophageal cancer patients were detected using morphologic methods. Results: The rates of RBC-C3bR rosettes、 NTER rosettes and T lymphocyte transformation test in esophageal cancer patients were much lower than that of controls and the rate of RBC-IC rossttes was significantly higher than that of controls (P<0.01). The rates of RBC-C3bR rosettes，NTER rosettes and T lymphocyte transformation test detected after removal of the carcinoma were significantly higher than that of patients before operation, but still lower than that of controls, the rate of RBC-IC rosettes detected after removing the carcinoma was significantly lower than that of patients before operation (P<0.01),but still higher than that of controls (P<0.01). Conclusion: The red-cell and T-cell immune functions in esophageal cancer patients were suppressed and the monitoring of these parameters is of significance for the study of etiopathogenesis, therapeutic efficacy and prognosis judgement.
, 百拇医药
Key words: esophageal cancer; red-cell immune; T-cell immune
肿瘤患者的免疫功能尤其是红细胞免疫和细胞免疫与肿瘤的发生发展密切相关，为了研究癌症患者不同免疫功能变化规律及相互间的关系，我们对食道癌患者作了红细胞免疫功能及T淋巴细胞转化功能测定，并与正常人群的测定结果进行了比较，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 研究对象
1.1.1 观察组 住院食道癌患者26例，均经纤维内窥镜与病理检查确诊。男20例，女6例，平均年龄57.9岁(37～73岁)；其中上段癌2例，中段癌15例，下段癌9例。并对其中经手术治疗后病情好转的13例患者再次采血检测。
1.1.2 对照组 同期健康献血员30例，男23例，女7例，平均年龄50.5岁(30～70岁)。
, 百拇医药
1.2 试剂
1.2.1 补体致敏酵母及未致敏酵母、补体未致敏S180癌冻干试剂，由陕西省人民医院免疫研究室提供。
1.2.2 RPMI 1640由Crand Island, New York. USA提供；植物血凝素(PHA)为上海伊华临床医学科技公司产品；秋水仙素为上海化学试剂厂产品。
1.3 方法
1.3.1 红细胞C3b受体(RBC-C3bR)花环试验，红细胞免疫复合物(RBC-IC)花环试验和自然肿瘤红细胞花环(NTER)试验，均按刘景田[1]法进行。
1.3.2 T淋巴细胞转化试验 无菌抽取静脉血0.5ml，肝素抗凝，加到2个含培养液5ml的培养瓶中(培养液含20%小牛血清、80%RPMI 1640、青霉素100IU/ml、链霉素100IU/ml、PHA液0.2ml)，每瓶含血量0.2ml。摇匀培养物后置37℃恒温培养箱中培养，每天轻轻振荡1～2次。在培养68～70h后加入秋水仙素(浓度为100μg/ml)，混匀，继续放入37℃恒温箱2～4h。培养结束后，将配养物吸到清洁小试管中进行离心，1000转/min，离心10min，弃去上清液，加入5ml 0.075M KCl溶液，用滴管混匀，置37℃恒温箱内15min进行低渗处理，低渗后立即加入0.5ml固定液(甲醇∶冰乙酸=3∶1)混匀，离心1000转/min，10min。吸去上清液，加入固定液5ml，混匀后静置15min，然后以1000转/min，离心10min，弃去上清液，再加入固定液5ml，混匀后静置15min，1000转/min，离心10min，吸去上清液，沉淀混匀，涂片两张，自然干燥后瑞氏染色，水洗后镜检，计数200个淋巴细胞，并计算出淋巴细胞转化百分率。
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2 结果
2.1 26例食道癌患者红细胞免疫功能和细胞免疫功能测定结果见表1。
食道癌患者RBC-C3bR花环率、NTER花环率及淋巴细胞转化率与正常对照相比，明显降低，RBC-IC花环率与正常对照相比，明显增高。提示食道癌患者红细胞C3b受体(CR1)活性下降，粘附肿瘤细胞的能力下降，红细胞膜上吸附的免疫复合物(IC)量增多；同时细胞免疫功能也降低。
2.2 我们对上述病例中的13例，在术前与术后10d左右进行了两次红细胞免疫和细胞免疫功能测定，结果见表2。
表1 食道癌患者红细胞免疫和细胞免疫功能测定结果(
±s)% 组 别, 百拇医药
n
RBC-C3bR花环率
RBC-IC花环率
NTER花环率
淋巴细胞转化率
食道癌
26
13.76±2.82**
23.45±4.18**
4.00±0.97**
48.42±5.31**
, 百拇医药
正常对照
30
26.74±3.67
11.21±1.60
12.54±2.09
74.56±4.57
与正常对照相比，**P<0.01表2 食道癌患者术前术后红细胞免疫和细胞免疫功能测定结果(
±s)% 组 别n
RBC-C3bR花环率
RBC-IC花环率
, http://www.100md.com
NTER花环率
淋巴细胞转化率
食道癌术前
13
13.47±2.44**
24.50±2.35**
3.88±0.96*
47.65±5.97*
食道癌术后
13
20.18±2.15△△
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14.81±2.40△△
4.89±1.10△△
53.71±3.66△△
正常对照
30
26.74±3.67
11.21±1.60
12.54±2.09
74.56±4.57
注：食道癌术前与术后相比，*P<0.05***P<0.01
, 百拇医药 食道癌术后与正常对照相比，△△P<0.01
由表2可见，经手术治疗后食道癌患者RBC-C3bR花环率、NTER花环率及淋巴细胞转化率较术前明显增高，但仍低于正常对照。RBC-IC花环率较术前明显降低，但仍高于正常对照。提示术后食道癌患者红细胞CR1活性、粘附肿瘤细胞的能力及细胞免疫功能均较术前明显上升，红细胞膜上吸附的IC量明显减少，但均未达到正常人水平。
3 讨论
肿瘤的发生发展与机体免疫反应密切相关，而红细胞作为一种免疫细胞，参与机体的多种免疫反应，所以，红细胞在抗肿瘤免疫中的作用研究日益受到关注。现已发现红细胞上有许多与免疫有关的物质，如CR1、CR3、CD58、CD59、IL-8R、SOD酶等，均参与机体复杂的免疫网络调控作用[2]。红细胞不仅可通过CR1免疫粘附肿瘤细胞，还可通过过氧化物酶等作用，对癌细胞起效应细胞作用，可阻止癌细胞血行转移[3]。而且可通过红细胞膜CD58、CD59与T淋巴细胞膜CD2免疫粘附，激活T淋巴细胞的免疫功能[4]。红细胞膜上还有IL-8R参与吞噬细胞互相作用的免疫调控[2]。
, http://www.100md.com
目前研究红细胞免疫最多的是CR1，即红细胞表面I型补体受体，由于红细胞数量远多于白细胞，红细胞便成了清除IC(抗原抗体复合物、抗原补体复合物)最主要的物质。本实验结果显示，食道癌患者红细胞免疫功能紊乱与低下，表现为红细胞CR1活性下降，免疫粘附的IC不易清除，粘附肿瘤细胞的能力下降。其原因可能是：①恶性肿瘤病人体内大量形成的IC可覆盖并粘附于红细胞膜上，使红细胞携带IC增加，造成红细胞膜上CR1空位减少，以致红细胞清除IC能力下降[5]。②IC的大量形成又将抑制T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤功能，形成恶性循环，使红细胞免疫功能进一步下降。③肿瘤患者的血清中红细胞免疫抑制因子增多，导致红细胞免疫下降[6]。食道癌患者在红细胞免疫功能低下的同时其细胞免疫功能也明显降低，表现为T淋巴细胞转化率下降，表明食道癌患者红细胞免疫功能和细胞免疫功能均处于抑制状态。
本实验还对其中13例食道癌患者术前与术后10d各种免疫功能进行了检测，结果显示患者术后红细胞CR1活性上升，免疫粘附的IC有所下降，粘附肿瘤细胞的能力增强，T淋巴细胞转化率也明显回升。表明这四项免疫指标的检测对食道癌发病机理探讨、疗效观察和预后判断均有一定的临床意义。临床上，癌症患者的治疗，通常是手术加放疗、化疗，但上述措施均不利免疫功能的恢复，所以提倡在癌症患者手术及放、化疗时，应使用免疫增强剂，改善并提高患者的免疫功能。
, 百拇医药
在实验中，对T淋巴细胞转化试验我们采用了改良方法，即在对全血培养68～70h后加入秋水仙素，使细胞分裂停止在中期。另外，当细胞培养结束后将培养物中加入0.075M KCl溶液进行低渗处理，使RBC在低渗环境中被破坏，这样很容易辨认淋巴细胞是否发生了转化，从而提高了淋转形态学检测的准确率。
参考文献：
[1] 刘景田，张 洁.红细胞免疫学[M].西安：陕西科学技术出版社，1995.28，41
[2] Deckert M, Kubar J, Bernard A. CD58 and CD59 molecules exhibit potentializing effects in T cell adhesion and activation [J]. J Immunol, 1992,148(3):672
, 百拇医药
[3] Siegel I, Liu TL, Gleicher N. The red-cell immune system [J].Lancet, 1981, 8246(2)：556
[4] Deckert M, Kubar J, Zoccola D. CD59 molecule: a second ligand for CD2 in T cell adhesion [J]. Eur J Immunol, 1992,22(11):2943
[5] 郭 峰，虞紫茜，赵中平.红细胞免疫功能的初步观察 [J]. 中华医学杂志，1982,62(12)：715
[6] Ng YC, Schifferll JA, Walport J. Immune complexes and erythrocyte CR1 (complexes receptor type 1) effect of CR1 numbers on binding and release reaction [J].Clin Exp Immunol, 1988,74:481
收稿日期：1999-11-29, 百拇医药