苦豆子总碱的体外抗菌活性研究
作者：周娅 杨志伟 赵建宁 王宁萍
单位：(宁夏医学院微生物学教研室，银川 750004)
关键词：苦豆子总碱；抗菌活性；最低抑菌浓度(MIC)
宁夏医学院学报000201 摘要：目的：了解苦豆子总碱的体外抗菌活性。方法：以琼脂稀释法、试管稀释法、活菌计数法检测苦豆子总碱的体外最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)等。结果：苦豆子总碱体外对10余种206株试验菌均有抑菌作用，其MIC是10～40mg/ml，大于3～5MIC的浓度对上述试验菌有杀菌作用。苦豆子总碱在碱性环境下抑菌作用较强，细菌接种量可影响其MIC，血清含量对MIC无明显影响。结论：苦豆子总碱有广谱抗菌作用，但抗菌活性较弱，内服不可能达到有效的血清抑菌浓度。
中图分类号：R285.5 文献标识码：A
, http://www.100md.com
文章编号：1005-8486(2000)02-0079-03
A Study on Antibacterial Activity of Total Alkaloids of Sophora Alopecuroides in Vitro
ZHOU Ya, YANG Zhi-wei, ZHAO Jian-ning, et al
(Dept. of Microbiology, Ningxia Med. Coll.，Yinchuan 750004)
Abstract: Objective: To determine the antibacterial activity of total alkaloids of Sophora Alopecuroides L (TASA) in vitro. Methods: The minimal inhibitory concentration (MIC) and the minimal bactericidal concentration (MBC) were measured by agardilution method, brothdilution method and viable counting method. Results: TASA showed antibacterial action against 206 bacteria tested. The MICs of TASA were 10～40mg/ml and the MBCs were 3～5 fold higher than the concentration of MIC. TASA were more active at alkaline pH, and the larger the bacteria were inoculated, the higher the MICs would be, but serum content in media had no effect on the MICs. Conclusion: TASA possess the broad-spectrum antibacterial effect, but antibacterial activities are totally low, so the effective inhibitory concentration of TASA in serum cannot be achieved by oral medication or injection.
, 百拇医药
Key words: total alkealids of sophora alopecuroides L; antibacterial activity; minimal inhibitory concentration (MIC)
苦豆子是西北地区盛产的植物药之一，中药药理学一书称苦豆子具有清热利湿、杀虫、平喘、抗癌等广泛的功效。长期以来临床有用苦豆子制剂治疗急性菌痢、皮肤炭疽等感染性疾病的报道[1]，但实验研究报道甚少，且结果不尽一致。为深入研究和开发苦豆子产品，我们以庆大霉素为对照药，对宁夏生产的苦豆子总碱进行了体外抗菌活性研究，报告如下。
1 材料和方法
1.1 药物与培养基 苦豆子总碱，宁夏盐池药厂生产，棕黄色稠膏状，总碱含量>98%，批号961204-1。实验用药量以膏重计算(W/V)，蒸馏水溶解后用HCl调pH至8.0～8.5，108℃～111℃，0.035～0.05Mpa高压灭菌15min备用。庆大霉素，宁夏制药厂生产，批号981126。M-H琼脂培养基、营养肉汤及营养琼脂系上海市医学化验所试剂厂产品。
, 百拇医药
1.2 细菌 收集近一年临床分离的致病菌10余种203株及污染食品中分离的类炭疽杆菌3株。质控菌系金葡球菌ATCC 25923，大肠埃希菌ATCC 25922，铜绿假单胞菌ATCC 27853， 均购自中国药品生物制品检定所。
1.3 最低抑菌浓度(MIC)测定
采用琼脂平皿稀释法。苦豆子总碱、庆大霉素以不同浓度分别加入平皿内，再倾入定量溶化的M-H琼脂，与药物混匀。苦豆子总碱的终浓度分别是40、30、20、15、10、5、2.5mg/ml。庆大霉素终浓度分别是32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。庆大霉素MIC≥8μg/ml为耐药，≤4μg/ml为敏感。试验菌用营养肉汤稀释成0.5麦氏浓度(约1.5亿/ml)，接种量约105/点，接种后置35℃培养18h后观察结果。以无菌生长平皿的最小药物浓度定为最低抑菌浓度(MIC)。
1.4 最低杀菌浓度(MIC)测定
, 百拇医药
采用试管肉汤稀释法与活菌计数法检测。选用已定出MIC的金葡球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、福氏志贺菌各4株，类炭疽杆菌2株作为试验菌。将未见细菌生长各管的培养液分别吸取0.1ml种入不含药琼脂平皿中，35℃培养18h后观察结果。平皿上菌落数<5个的最低药物浓度即为最低杀菌浓度(MBC)。
1.5 pH值、细菌接种量和血清浓度对MIC的影响
采用试管肉汤稀释法。选用3株质控菌及1株类炭疽杆菌，分别测定在培养基pH 5、7、9时，细菌接种量为103、105、107CFu/ml时，培养基内含人血清25%、50%、75%时苦豆子总碱MIC值的变化。
2 结果
庆大霉素对金葡球菌ATCC 25923、大肠埃希菌25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853的MIC分别是0.5、0.5、2μg/ml，在质量控制范围内；苦豆子总碱的MIC分别是15、15、30mg/ml。
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2.1 MIC浓度结果
苦豆子总碱对试验用206株菌的MIC结果见表1。试验所用的206株菌，临床药敏试验已证明，绝大多数菌株对两种以上抗生素耐药。此点从本实验中庆大霉素的MIC结果也可看出，大多数试验菌对庆大霉素耐药。苦豆子总碱对上述试验菌均有体外抑菌作用，20mg/ml浓度时对上述试验菌的抑菌率为79.6%。
附表 苦豆子总碱及其对照药对试验菌的MIC 菌 名
(株)
苦豆子总碱(mg/ml)
庆大霉素(μg/ml)
MIC范围
MIC50
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MIC90
MIC范围
MIC50
MIC90
金葡球菌
40
15～30
20
30
0.5～>32
32
>32
, 百拇医药
表葡球菌
20
15～30
20
30
1～>32
16
>32
类炭疽杆菌
3
10
10
10
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<0.25～0.5
<0.25
0.5
大肠埃希菌
30
15～30
20
30
2～>32
16
>32
福氏志贺菌
35
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15～30
20
30
1～>32
4
16
鼠伤寒沙门菌
5
20
20
20
16～>32
>32
, 百拇医药
>32
枸橼酸杆菌*
13
15～30
20
30
<0.25～>32
4
16
肺炎克雷伯菌
6
15～30
20
, 百拇医药
20
2～16
8
16
肠杆菌*
20
15～30
20
30
1～>32
16
>32
变形杆菌*
, 百拇医药
9
15～30
20
30
1～>32
8
>32
铜绿假单胞菌
20
20～40
30
40
4～>32
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>32
>32
粪产碱杆菌
5
15～30
20
30
16～>32
>32
>32
*按菌属归类统计2.2 MBC测定结果
苦豆子总碱对金葡球菌、大肠埃希菌、福氏志贺菌、铜绿假单胞菌及类炭疽杆菌的MBC50分别为100、100、100、>150、30mg/ml。
, 百拇医药
2.3 pH值、细菌接种量和血清浓度对MIC的影响
pH为9时，苦豆子总碱对大肠埃希菌ATCC 25922的MIC值降至5mg/ml，抑菌作用明显增强，对其它几株菌的MIC值影响不明显。
类炭疽杆菌接种量在103、105、107/ml时的MIC分别是5、10、15mg/ml，表现接种量增大，MIC值亦随之增大。金葡球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌接种量对MIC亦有影响，但不显著。
培养基中含人血清浓度对MIC影响不明显。
3 讨论
用于抗菌消炎的苦豆子及其某些生物碱的内服外用制剂如苦豆草片、苦豆子全草浸膏糖衣片、妇炎拴等都曾经或仍在临床使用[1]，但关于这些苦豆子制剂的抗菌效应报道甚少。曾有研究发现苦豆草干浸膏31.25～125mg/ml以上对各种痢疾杆菌有抑制作用，但腹腔注射对小鼠肺炎球菌及流感杆菌感染无保护作用[2]。亦有报道苦豆子总碱20mg/ml不具有体外抗菌作用[3]。本文研究结果显示苦豆子总碱在体外具有广谱抗菌作用，但抗菌活性并不强，需20mg/ml以上才能抑制多数试验菌生长，在碱性环境下抗菌作用强于中性和酸性环境。据报道苦豆子总碱注射液用于小鼠，0%死亡率的剂量是100mg/kg，100%死亡率剂量为180mg/kg[1]，因而在一些外用拴、洗剂中含有适量苦豆子提取物，可能发挥较好的抗菌消炎作用，而欲通过口服、注射等使苦豆子总碱在血液及组织器官内达到有效抑菌浓度是不可能的。但为什么临床使用苦豆子煎剂或其它剂型能有效地治疗某些感染性疾病，其机理应做进一步研究。
*宁夏自治区教委科研基金资助课题
参考文献：
[1] 王本祥.现代中药药理学[M].天津：天津科学技术出版社，1997.322-323
[2] 仲仁山.苦豆子的研究及其应用[M].银川：宁夏人民出版社，1983.137-146
[3] 白润江，任 娅，马端端.十种中药的抑菌作用[J].兰州医学院学报，1992，18(3)：174-176
收稿日期：2000-01-24, 百拇医药
单位：(宁夏医学院微生物学教研室，银川 750004)
关键词：苦豆子总碱；抗菌活性；最低抑菌浓度(MIC)
宁夏医学院学报000201 摘要：目的：了解苦豆子总碱的体外抗菌活性。方法：以琼脂稀释法、试管稀释法、活菌计数法检测苦豆子总碱的体外最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)等。结果：苦豆子总碱体外对10余种206株试验菌均有抑菌作用，其MIC是10～40mg/ml，大于3～5MIC的浓度对上述试验菌有杀菌作用。苦豆子总碱在碱性环境下抑菌作用较强，细菌接种量可影响其MIC，血清含量对MIC无明显影响。结论：苦豆子总碱有广谱抗菌作用，但抗菌活性较弱，内服不可能达到有效的血清抑菌浓度。
中图分类号：R285.5 文献标识码：A
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文章编号：1005-8486(2000)02-0079-03
A Study on Antibacterial Activity of Total Alkaloids of Sophora Alopecuroides in Vitro
ZHOU Ya, YANG Zhi-wei, ZHAO Jian-ning, et al
(Dept. of Microbiology, Ningxia Med. Coll.，Yinchuan 750004)
Abstract: Objective: To determine the antibacterial activity of total alkaloids of Sophora Alopecuroides L (TASA) in vitro. Methods: The minimal inhibitory concentration (MIC) and the minimal bactericidal concentration (MBC) were measured by agardilution method, brothdilution method and viable counting method. Results: TASA showed antibacterial action against 206 bacteria tested. The MICs of TASA were 10～40mg/ml and the MBCs were 3～5 fold higher than the concentration of MIC. TASA were more active at alkaline pH, and the larger the bacteria were inoculated, the higher the MICs would be, but serum content in media had no effect on the MICs. Conclusion: TASA possess the broad-spectrum antibacterial effect, but antibacterial activities are totally low, so the effective inhibitory concentration of TASA in serum cannot be achieved by oral medication or injection.
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Key words: total alkealids of sophora alopecuroides L; antibacterial activity; minimal inhibitory concentration (MIC)
苦豆子是西北地区盛产的植物药之一，中药药理学一书称苦豆子具有清热利湿、杀虫、平喘、抗癌等广泛的功效。长期以来临床有用苦豆子制剂治疗急性菌痢、皮肤炭疽等感染性疾病的报道[1]，但实验研究报道甚少，且结果不尽一致。为深入研究和开发苦豆子产品，我们以庆大霉素为对照药，对宁夏生产的苦豆子总碱进行了体外抗菌活性研究，报告如下。
1 材料和方法
1.1 药物与培养基 苦豆子总碱，宁夏盐池药厂生产，棕黄色稠膏状，总碱含量>98%，批号961204-1。实验用药量以膏重计算(W/V)，蒸馏水溶解后用HCl调pH至8.0～8.5，108℃～111℃，0.035～0.05Mpa高压灭菌15min备用。庆大霉素，宁夏制药厂生产，批号981126。M-H琼脂培养基、营养肉汤及营养琼脂系上海市医学化验所试剂厂产品。
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1.2 细菌 收集近一年临床分离的致病菌10余种203株及污染食品中分离的类炭疽杆菌3株。质控菌系金葡球菌ATCC 25923，大肠埃希菌ATCC 25922，铜绿假单胞菌ATCC 27853， 均购自中国药品生物制品检定所。
1.3 最低抑菌浓度(MIC)测定
采用琼脂平皿稀释法。苦豆子总碱、庆大霉素以不同浓度分别加入平皿内，再倾入定量溶化的M-H琼脂，与药物混匀。苦豆子总碱的终浓度分别是40、30、20、15、10、5、2.5mg/ml。庆大霉素终浓度分别是32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。庆大霉素MIC≥8μg/ml为耐药，≤4μg/ml为敏感。试验菌用营养肉汤稀释成0.5麦氏浓度(约1.5亿/ml)，接种量约105/点，接种后置35℃培养18h后观察结果。以无菌生长平皿的最小药物浓度定为最低抑菌浓度(MIC)。
1.4 最低杀菌浓度(MIC)测定
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采用试管肉汤稀释法与活菌计数法检测。选用已定出MIC的金葡球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、福氏志贺菌各4株，类炭疽杆菌2株作为试验菌。将未见细菌生长各管的培养液分别吸取0.1ml种入不含药琼脂平皿中，35℃培养18h后观察结果。平皿上菌落数<5个的最低药物浓度即为最低杀菌浓度(MBC)。
1.5 pH值、细菌接种量和血清浓度对MIC的影响
采用试管肉汤稀释法。选用3株质控菌及1株类炭疽杆菌，分别测定在培养基pH 5、7、9时，细菌接种量为103、105、107CFu/ml时，培养基内含人血清25%、50%、75%时苦豆子总碱MIC值的变化。
2 结果
庆大霉素对金葡球菌ATCC 25923、大肠埃希菌25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853的MIC分别是0.5、0.5、2μg/ml，在质量控制范围内；苦豆子总碱的MIC分别是15、15、30mg/ml。
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2.1 MIC浓度结果
苦豆子总碱对试验用206株菌的MIC结果见表1。试验所用的206株菌，临床药敏试验已证明，绝大多数菌株对两种以上抗生素耐药。此点从本实验中庆大霉素的MIC结果也可看出，大多数试验菌对庆大霉素耐药。苦豆子总碱对上述试验菌均有体外抑菌作用，20mg/ml浓度时对上述试验菌的抑菌率为79.6%。
附表 苦豆子总碱及其对照药对试验菌的MIC 菌 名
(株)
苦豆子总碱(mg/ml)
庆大霉素(μg/ml)
MIC范围
MIC50
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MIC90
MIC范围
MIC50
MIC90
金葡球菌
40
15～30
20
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32
>32
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表葡球菌
20
15～30
20
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16
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类炭疽杆菌
3
10
10
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<0.25～0.5
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0.5
大肠埃希菌
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15～30
20
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>32
福氏志贺菌
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15～30
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4
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鼠伤寒沙门菌
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枸橼酸杆菌*
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15～30
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肺炎克雷伯菌
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15～30
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肠杆菌*
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变形杆菌*
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铜绿假单胞菌
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>32
粪产碱杆菌
5
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>32
*按菌属归类统计2.2 MBC测定结果
苦豆子总碱对金葡球菌、大肠埃希菌、福氏志贺菌、铜绿假单胞菌及类炭疽杆菌的MBC50分别为100、100、100、>150、30mg/ml。
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2.3 pH值、细菌接种量和血清浓度对MIC的影响
pH为9时，苦豆子总碱对大肠埃希菌ATCC 25922的MIC值降至5mg/ml，抑菌作用明显增强，对其它几株菌的MIC值影响不明显。
类炭疽杆菌接种量在103、105、107/ml时的MIC分别是5、10、15mg/ml，表现接种量增大，MIC值亦随之增大。金葡球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌接种量对MIC亦有影响，但不显著。
培养基中含人血清浓度对MIC影响不明显。
3 讨论
用于抗菌消炎的苦豆子及其某些生物碱的内服外用制剂如苦豆草片、苦豆子全草浸膏糖衣片、妇炎拴等都曾经或仍在临床使用[1]，但关于这些苦豆子制剂的抗菌效应报道甚少。曾有研究发现苦豆草干浸膏31.25～125mg/ml以上对各种痢疾杆菌有抑制作用，但腹腔注射对小鼠肺炎球菌及流感杆菌感染无保护作用[2]。亦有报道苦豆子总碱20mg/ml不具有体外抗菌作用[3]。本文研究结果显示苦豆子总碱在体外具有广谱抗菌作用，但抗菌活性并不强，需20mg/ml以上才能抑制多数试验菌生长，在碱性环境下抗菌作用强于中性和酸性环境。据报道苦豆子总碱注射液用于小鼠，0%死亡率的剂量是100mg/kg，100%死亡率剂量为180mg/kg[1]，因而在一些外用拴、洗剂中含有适量苦豆子提取物，可能发挥较好的抗菌消炎作用，而欲通过口服、注射等使苦豆子总碱在血液及组织器官内达到有效抑菌浓度是不可能的。但为什么临床使用苦豆子煎剂或其它剂型能有效地治疗某些感染性疾病，其机理应做进一步研究。
*宁夏自治区教委科研基金资助课题
参考文献：
[1] 王本祥.现代中药药理学[M].天津：天津科学技术出版社，1997.322-323
[2] 仲仁山.苦豆子的研究及其应用[M].银川：宁夏人民出版社，1983.137-146
[3] 白润江，任 娅，马端端.十种中药的抑菌作用[J].兰州医学院学报，1992，18(3)：174-176
收稿日期：2000-01-24, 百拇医药