鲨鱼软骨粉(SCP)合剂诱导的抗血吸虫性肝纤维化效应机制的研究
作者：陈家旭 龚唯 李允鹤** 骆 伟 夏超明 胡永德
单位：苏州医学院寄生虫学教研室，苏州，215007
关键词：日本血吸虫；；肝纤维化；；鲨鱼软骨粉；；当归根提取物；；透明质酸；；层粘连蛋白
苏州医学院学报991108 摘要 目的：了解SCP合剂诱导的抗肝血吸虫性纤维化的效应机制。方法：用放射免疫分析法(RIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清透明质酸(HA)和层粘连蛋白(LN)水平。结果：血吸虫感染小鼠服用SCP合剂3周(感染7周)后，SCP合剂大剂量(90mg/d)组、小剂量(70mg/d)组和SCP单剂组血清HA水平分别为0.54±0.16、0.91±0.30和1.77±0.27mg/L,均显著低于“425”单剂组和感染对照组的2.14±1.22和2.65±0.76mg/L(P<0.01)；SCP合剂大剂量组HA水平明显低于小剂量组和SCP单剂组(P<0.01)，而单用“425”制剂组HA含量则与感染对照组之间无显著差异(P>0.05)。相应时期SCP合剂大剂量组、小剂量组、SCP单剂组和“425”单剂组血清LN水平(OD值)分别为0.70±0.04、0.84±0.05、1.05±0.05和0.83±0.04，均显著低于感染对照组的1.59±0.10(P<0.01)，前4组血清LN水平之间均无显著差异(P>0.05)。结论：鲨鱼软骨粉合剂可降低血吸虫感染宿主血清HA和LN水平，阻止成纤维母细胞的形成，降低胶原及HA、LN的分泌，从而减轻或抑制血吸虫性肝纤维化的产生。
, 百拇医药
中图法分类 R383.24
Studies on the Mechanism of Anti-Schistosome Hepatic Fibrosis
Induced by SCP Combining Reagent
Chen jiaxu, Gong wei, Li yunhe, et al
(Department of Parasitology, Suzhou Medical College, Suzhou， 215007)
Abstract The levels of hyaluronic acid (HA) and laminin (LN) were detected by radioimmunoassay (RIA) and ELISA respectively probe the mechanism of anti-schistosome egg granuloma and anti-hepatic fibrosis induced by shark cartilage powder (SCP) combining reagent in murine schistosomiasis. Serum HA and LN levels were measured in BALB/c mice with schistosomiasis 3 weeks after orally administering SCP combining reagent (7 weeks after infection).The mean serum HA levels in the group with larger dosage of SCP combining reagent (group I) (0.54±0.16mg/L), smaller dosage of SCP combining reagent (group II) (0.91±0.30mg/L ) and single SCP (group III) (1.77±0.29mg/L) were significantly lower than that in the group of sinlge “425” (group IV,2.14±1.22mg/L) and in the infection controls (group V,2.65±0.76mg/L), and the serum HA level in group I was significantly lower than that in group II and IV (P<0.01).But the serum HA level in group IV didn't differ from that in the control group V (P>0.05). The serum LN levels (OD value) in the above mentioned groups from I to V were 0.70±0.04, 0.84±0.05, 1.05±0.05, 0.84±0.04 and 1.58±0.10 respectively, and a significant difference in the mean serum LN levels in group I to IV was showed in comparison with the level in group V (P<0.01). But no significant difference was observed among the group from I to IV (P>0.05). The results suggest that the SCP combining reagent can decrease the levels of serum HA and LN in host infected with Schistosoma japonicum. The results indicate that the mechanisms of anti-hepatic fibrosis effects induced by SCP combining reagent is associated with inhibition of HA and LN secretion.
, 百拇医药
Key words schistosoma japonicum; shark cartilage powder; angelica root extract; hyaluronic acid; laminin
实验研究已证明[1,2]，鲨鱼软骨粉联用“425”制剂能诱导宿主产生明显的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变及抗血吸虫性肝纤维化效应，机制与机体内细胞免疫和体液免疫的增强相关。在血吸虫病肝纤维化形成时，感染宿主血清中的透明质酸(HA)和层粘连蛋白(LN)水平明显升高[3～5]。表明HA和LN与血吸虫性肝纤维化的产生紧密相关。本研究主要对感染鼠血清HA和LN水平进行测定，旨在阐明SCP合剂诱导的抗血吸虫性肝纤维化效应的机制。实验结果报告如下。
1 材料、方法与结果
1.1 实验动物：BALB/c健康雌性小鼠由上海中国科学院动物中心供应，体重18±2g，共50只。按常规经皮肤感染日本血吸虫尾蚴30±2条，而后随机分成5组，每组10只。
, 百拇医药
1.2 鲨鱼软骨粉合剂(SCP合剂)：将SCP(100%纯进口粉剂)联用“425”制剂(当归根提取物)50mg，合剂总剂量分别有90mg/d与70mg/d两种。
1.3 动物用药：小鼠感染日本血吸虫后4周起，灌胃给药，组I和组II每天分别给SCP合剂90mg和70mg，组III和组IV分别单用SCP 40mg和“425”制剂50mg，组V给生理盐水作对照。各组均连续用药14天。
1.4 血清制备：用药后3周，相当于感染后7周时，采血，分离血清，-20℃保存备用。
1.5 血清HA水平测定：用放射免疫分析法(RIA)测定。透明质酸放射免疫分析试剂盒由上海海军医学研究所提供(批号990401)。操作步骤按试剂盒说明书。结果在RIA16 r免疫计数仪(美国Capintec IWC公司产品)测定，经微机四参数方程处理，计算血清HA浓度(见附表)。
, http://www.100md.com
附表 应用SCP合剂后3周时小鼠血清HA、LN水平
(mg/L,
±s) 组别
n
HA
LN
P值
(与组Ⅴ比较)
Ⅰ
5
0.54±0.16*△
0.70±0.04
, 百拇医药
<0.01
Ⅱ
5
0.91±0.30*
0.84±0.05
<0.01
Ⅲ
5
1.77±0.27
1.05±0.05
<0.01
Ⅳ
, 百拇医药 5
2.14±1.22
0.83±0.04
<0.01
Ⅴ
5
2.65±0.76
1.59±0.10
*与组Ⅲ、Ⅳ比较，P<0.01；△与组Ⅱ比较，P<0.01
1.6 血清LN水平测定：用ELISA法。血清层粘连蛋白-ELISA试剂盒由上海海军医学研究所提供(批号990401)。操作按说明书进行。结果用酶联检测仪(国产)490nm波段测定OD值(见附表)。
, 百拇医药
2 讨论
本文结果提示，SCP合剂(大、小剂量)及单用SCP制剂组小鼠血清HA和LN水平均显著低于感染对照小鼠。SCP大剂量合剂组小鼠血清HA水平显著低于小剂量组、单用SCP组及单用“425”制剂组。单用“425”制剂小鼠血清HA水平与感染对照鼠无显著性差异，但LN水平则显著低于感染对照鼠。表明SCP合剂(大剂量)的抗血吸虫性肝纤维化效应显著强于小剂量者，更优于单用SCP和单用“425”者。服用SCP合剂大剂量与单用SCP小鼠肝纤维化程度均几乎消失；但服用SCP小剂量合剂小鼠肝肉芽肿内仍显示轻度纤维化。由此表明，SCP小剂量的抗肝肉芽肿和纤维化效应均不明显。提示SCP在降低机体HA和LN的同时，还可能在降低其它致纤维化因子方面起着作用。
有报道[6～8]，鲨鱼软骨制剂具有抑制内皮细胞DNA合成和细胞骨架形成及抗毛细血管化作用。内皮细胞可合成、分泌LN，使肝窦功能性基底膜破坏，促使毛细血管化的形成，产生肝纤维化和肝硬化。上述提示SCP可能阻止成纤维母细胞的形成，降低胶原及HA、LN等细胞外基质的分泌，从而减轻或抑制血吸虫性肝纤维化的形成。
, 百拇医药
* 博士研究生，现在镇江医学院寄生学教研室工作 **导师
参考文献
1 李允鹤，陈家旭，庞智，等.中药“425”合剂诱导的抗血吸虫卵肉芽肿效应机制研究.苏州医学院学报，1998，18(2)∶1111
2 陈家旭，等.鲨鱼软骨粉合剂诱导的抗肝血吸虫性纤维化效应的研究.中国寄生虫病防治杂志，1999，12(2)∶137
3 蔡卫民，等.血吸虫病肝纤维化患者12项指标检测及其临床意义.中国人兽共患病杂志，1996，12(1)∶13
4 贺永文，等.细胞因子对感染日本血吸虫小鼠肝纤维化的影响.中华内科杂志，1998，37(4)∶258
5 Parise ER,et al. Serum Laminin in Hepatic Schistosomiasis. Trans R Soc Trop Med Hyg， 1992，86(2)∶179
6 沈先荣，等.鲨鱼软骨制剂抑制血管生成的研究.生物化学与生物物理进展，1997，24(2)∶155
7 王 路，等.鲨鱼软骨中新生血管抑制因子的分离纯化及活性的初步研究.第二军医大学学报，1996，17(2)∶176
8 沈先荣，等.鲨鱼软骨制剂抗肿瘤作用的研究.中国生化药物杂志，1995，16(4)∶157
(1999年9月20日收稿), 百拇医药(陈家旭 龚唯 李允鹤** 骆 伟 夏超明 胡永德)
单位：苏州医学院寄生虫学教研室，苏州，215007
关键词：日本血吸虫；；肝纤维化；；鲨鱼软骨粉；；当归根提取物；；透明质酸；；层粘连蛋白
苏州医学院学报991108 摘要 目的：了解SCP合剂诱导的抗肝血吸虫性纤维化的效应机制。方法：用放射免疫分析法(RIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清透明质酸(HA)和层粘连蛋白(LN)水平。结果：血吸虫感染小鼠服用SCP合剂3周(感染7周)后，SCP合剂大剂量(90mg/d)组、小剂量(70mg/d)组和SCP单剂组血清HA水平分别为0.54±0.16、0.91±0.30和1.77±0.27mg/L,均显著低于“425”单剂组和感染对照组的2.14±1.22和2.65±0.76mg/L(P<0.01)；SCP合剂大剂量组HA水平明显低于小剂量组和SCP单剂组(P<0.01)，而单用“425”制剂组HA含量则与感染对照组之间无显著差异(P>0.05)。相应时期SCP合剂大剂量组、小剂量组、SCP单剂组和“425”单剂组血清LN水平(OD值)分别为0.70±0.04、0.84±0.05、1.05±0.05和0.83±0.04，均显著低于感染对照组的1.59±0.10(P<0.01)，前4组血清LN水平之间均无显著差异(P>0.05)。结论：鲨鱼软骨粉合剂可降低血吸虫感染宿主血清HA和LN水平，阻止成纤维母细胞的形成，降低胶原及HA、LN的分泌，从而减轻或抑制血吸虫性肝纤维化的产生。
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中图法分类 R383.24
Studies on the Mechanism of Anti-Schistosome Hepatic Fibrosis
Induced by SCP Combining Reagent
Chen jiaxu, Gong wei, Li yunhe, et al
(Department of Parasitology, Suzhou Medical College, Suzhou， 215007)
Abstract The levels of hyaluronic acid (HA) and laminin (LN) were detected by radioimmunoassay (RIA) and ELISA respectively probe the mechanism of anti-schistosome egg granuloma and anti-hepatic fibrosis induced by shark cartilage powder (SCP) combining reagent in murine schistosomiasis. Serum HA and LN levels were measured in BALB/c mice with schistosomiasis 3 weeks after orally administering SCP combining reagent (7 weeks after infection).The mean serum HA levels in the group with larger dosage of SCP combining reagent (group I) (0.54±0.16mg/L), smaller dosage of SCP combining reagent (group II) (0.91±0.30mg/L ) and single SCP (group III) (1.77±0.29mg/L) were significantly lower than that in the group of sinlge “425” (group IV,2.14±1.22mg/L) and in the infection controls (group V,2.65±0.76mg/L), and the serum HA level in group I was significantly lower than that in group II and IV (P<0.01).But the serum HA level in group IV didn't differ from that in the control group V (P>0.05). The serum LN levels (OD value) in the above mentioned groups from I to V were 0.70±0.04, 0.84±0.05, 1.05±0.05, 0.84±0.04 and 1.58±0.10 respectively, and a significant difference in the mean serum LN levels in group I to IV was showed in comparison with the level in group V (P<0.01). But no significant difference was observed among the group from I to IV (P>0.05). The results suggest that the SCP combining reagent can decrease the levels of serum HA and LN in host infected with Schistosoma japonicum. The results indicate that the mechanisms of anti-hepatic fibrosis effects induced by SCP combining reagent is associated with inhibition of HA and LN secretion.
, 百拇医药
Key words schistosoma japonicum; shark cartilage powder; angelica root extract; hyaluronic acid; laminin
实验研究已证明[1,2]，鲨鱼软骨粉联用“425”制剂能诱导宿主产生明显的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变及抗血吸虫性肝纤维化效应，机制与机体内细胞免疫和体液免疫的增强相关。在血吸虫病肝纤维化形成时，感染宿主血清中的透明质酸(HA)和层粘连蛋白(LN)水平明显升高[3～5]。表明HA和LN与血吸虫性肝纤维化的产生紧密相关。本研究主要对感染鼠血清HA和LN水平进行测定，旨在阐明SCP合剂诱导的抗血吸虫性肝纤维化效应的机制。实验结果报告如下。
1 材料、方法与结果
1.1 实验动物：BALB/c健康雌性小鼠由上海中国科学院动物中心供应，体重18±2g，共50只。按常规经皮肤感染日本血吸虫尾蚴30±2条，而后随机分成5组，每组10只。
, 百拇医药
1.2 鲨鱼软骨粉合剂(SCP合剂)：将SCP(100%纯进口粉剂)联用“425”制剂(当归根提取物)50mg，合剂总剂量分别有90mg/d与70mg/d两种。
1.3 动物用药：小鼠感染日本血吸虫后4周起，灌胃给药，组I和组II每天分别给SCP合剂90mg和70mg，组III和组IV分别单用SCP 40mg和“425”制剂50mg，组V给生理盐水作对照。各组均连续用药14天。
1.4 血清制备：用药后3周，相当于感染后7周时，采血，分离血清，-20℃保存备用。
1.5 血清HA水平测定：用放射免疫分析法(RIA)测定。透明质酸放射免疫分析试剂盒由上海海军医学研究所提供(批号990401)。操作步骤按试剂盒说明书。结果在RIA16 r免疫计数仪(美国Capintec IWC公司产品)测定，经微机四参数方程处理，计算血清HA浓度(见附表)。
, http://www.100md.com
附表 应用SCP合剂后3周时小鼠血清HA、LN水平
(mg/L,
±s) 组别n
HA
LN
P值
(与组Ⅴ比较)
Ⅰ
5
0.54±0.16*△
0.70±0.04
, 百拇医药
<0.01
Ⅱ
5
0.91±0.30*
0.84±0.05
<0.01
Ⅲ
5
1.77±0.27
1.05±0.05
<0.01
Ⅳ
, 百拇医药 5
2.14±1.22
0.83±0.04
<0.01
Ⅴ
5
2.65±0.76
1.59±0.10
*与组Ⅲ、Ⅳ比较，P<0.01；△与组Ⅱ比较，P<0.01
1.6 血清LN水平测定：用ELISA法。血清层粘连蛋白-ELISA试剂盒由上海海军医学研究所提供(批号990401)。操作按说明书进行。结果用酶联检测仪(国产)490nm波段测定OD值(见附表)。
, 百拇医药
2 讨论
本文结果提示，SCP合剂(大、小剂量)及单用SCP制剂组小鼠血清HA和LN水平均显著低于感染对照小鼠。SCP大剂量合剂组小鼠血清HA水平显著低于小剂量组、单用SCP组及单用“425”制剂组。单用“425”制剂小鼠血清HA水平与感染对照鼠无显著性差异，但LN水平则显著低于感染对照鼠。表明SCP合剂(大剂量)的抗血吸虫性肝纤维化效应显著强于小剂量者，更优于单用SCP和单用“425”者。服用SCP合剂大剂量与单用SCP小鼠肝纤维化程度均几乎消失；但服用SCP小剂量合剂小鼠肝肉芽肿内仍显示轻度纤维化。由此表明，SCP小剂量的抗肝肉芽肿和纤维化效应均不明显。提示SCP在降低机体HA和LN的同时，还可能在降低其它致纤维化因子方面起着作用。
有报道[6～8]，鲨鱼软骨制剂具有抑制内皮细胞DNA合成和细胞骨架形成及抗毛细血管化作用。内皮细胞可合成、分泌LN，使肝窦功能性基底膜破坏，促使毛细血管化的形成，产生肝纤维化和肝硬化。上述提示SCP可能阻止成纤维母细胞的形成，降低胶原及HA、LN等细胞外基质的分泌，从而减轻或抑制血吸虫性肝纤维化的形成。
, 百拇医药
* 博士研究生，现在镇江医学院寄生学教研室工作 **导师
参考文献
1 李允鹤，陈家旭，庞智，等.中药“425”合剂诱导的抗血吸虫卵肉芽肿效应机制研究.苏州医学院学报，1998，18(2)∶1111
2 陈家旭，等.鲨鱼软骨粉合剂诱导的抗肝血吸虫性纤维化效应的研究.中国寄生虫病防治杂志，1999，12(2)∶137
3 蔡卫民，等.血吸虫病肝纤维化患者12项指标检测及其临床意义.中国人兽共患病杂志，1996，12(1)∶13
4 贺永文，等.细胞因子对感染日本血吸虫小鼠肝纤维化的影响.中华内科杂志，1998，37(4)∶258
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6 沈先荣，等.鲨鱼软骨制剂抑制血管生成的研究.生物化学与生物物理进展，1997，24(2)∶155
7 王 路，等.鲨鱼软骨中新生血管抑制因子的分离纯化及活性的初步研究.第二军医大学学报，1996，17(2)∶176
8 沈先荣，等.鲨鱼软骨制剂抗肿瘤作用的研究.中国生化药物杂志，1995，16(4)∶157
(1999年9月20日收稿), 百拇医药(陈家旭 龚唯 李允鹤** 骆 伟 夏超明 胡永德)