人重组FL对淋巴瘤和白血病细胞株的体外作用研究＊
作者：李颖△ 许志祥 黄伟达 顾宗江 张学光△△
单位：苏州医学院免疫学研究室，苏州，215007
关键词：FL；淋巴瘤；白血病
苏州医学院学报991104 摘要 目的：探讨FL对淋巴瘤与白血病细胞株的体外作用。方法：采用MTT法检测不同浓度的人重组FL对一系列淋巴瘤和白血病细胞的体外生长作用。结果：FL对HL60，Raji及Ecv(人内皮细胞株)细胞有一定的促进增殖作用，而对其它大多数淋巴瘤和白血病细胞无明显的效应。结论：人重组FL刺激内皮细胞的增殖可能在造血和炎症的病理过程中起直接或间接作用，从而为FL的临床运用提供一定的理论依据。
中图法分类 R392.11
Effect of FL on Lymphoma and Acute Myeloid
, 百拇医药
Leukemia Cell Lines in Vitro
Li Ying ,Xu Zhixiang,Huang Weida,et al
(Department of Immunology,Suzhou Medical College,Suzhou,215007)
Abstract Purpose To investigate the effect of FL on lymphoma and acute myeloid leukemia(AML)cell lines in vitro .Method The response of this series of cell lines to different doses of recombinant human FL(rhFL)was observed using the MTT assay. Result HL60,Raji,and Ecv cell lines showed enhanced survival whereas other lines were unaffected. Conclusion FL induce endothelia to proliferate,which may play a direct or indirect role in the pathological courses of hematopoiesis and inflammation.the result provides additional information for the clinical application of FL.
, 百拇医药
Key words FL; lymphoma; AML
FL是近年发现的一种早期造血生长因子，为Ⅲ型酪氨酸激酶受体的配体，能促进早期造血干/祖细胞的生长和分化；在急性辐射损伤中，人重组FL具有显著的保护造血干/祖细胞的作用，并与其它因子如G-CSF、GM-CSF等有显著的协同效应[1]。鉴此，人重组FL具有重要的研究和潜在的运用价值。但近年文献[2]报道一些白血病细胞表达FL受体，并可能与白血病细胞的生长或抗凋亡效应相关。本文就FL对一系列淋巴瘤和白血病细胞株的体外作用进行初步探讨。
1 材料、方法和结果
1.1 细胞来源和培养条件：本次实验采用的多发性骨髓瘤细胞株8266、U266购于美国ATCC，XG-1(人IL-6依赖多发性骨髓瘤细胞株)由本室建成；淋巴瘤细胞株Daudi、Jurkat、Raji,白血病细胞株KG1-a和GM-CSF 、Epo依赖细胞株TF1购自美国ATCC；HL60由本院张日博士赠送；小鼠IL-6依赖株B9由法国B.Kllen博士馈赠；人内皮细胞(Evc)购于武汉细胞库。上述细胞株均由本室保存和常规传代培养，无支原体感染，IL-6依赖细胞株B9在常规培养中加入1μg/L人重IL-6；加入10μg/L人重组GM-CSF于TF1培养中，作为条件培养液。在37℃、5%CO2培养箱中，用含10%小牛血清的RPIM 1640进行培养。
, 百拇医药
1.2 主要试剂：人重组FL购自美国Immugenex；小牛血清、RPIM 1640(GIBCO)、GM-CSF、人重组IL-6由上海生化所刘新恒教授赠送。
1.3 实验方法：FL标准品用RPIM 1640进行稀释成1、5、25μg/L,每种浓度作3个复份，在96个孔板中每孔加入5000个细胞，37℃、5%CO2培养箱中共同培养7h，终止培养前4h加入5μg/L MTT(20μl/孔)，培养终止后，离心去上清，用0.04mol/L盐酸异丙醇(每孔100μl)溶解甲月 赞颗粒，用酶标仪测定吸光度(光密度OD)值，比色波长为570nm。
1.4 结果：人重组FL对白血病细胞株的体外增殖作用结果如图1所示，人重组FL对HL60，Raji、Ecv(内皮细胞株)细胞的体外作用见图2。结果表明，人重组FL对大多数白血病和淋巴瘤细胞株如Jurkat、8266、U266、Daudi、Baf、TF1、B9、XG-1、KG1-a的体外增殖无明显效应。
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图1 FL对不同白血病及淋巴瘤细胞株的体外作用
图2 FL对HL60、Raji、Ecv细胞的体外作用
2 讨论
有研究[3]表明，在许多造血前体细胞和白血病细胞有FL受体的表达，尤其在急性白血病中，单核细胞和髓性细胞来源的白血病细胞均表达FL受体，而红系和巨噬细胞系来源的白血病细胞不表达FL受体。由于FL能刺激表达FL受体的造血前体细胞增殖，所以人们推测该因子可能刺激表达FL受体的白血病细胞的生长。进一步阐明，人重组FL对白血病细胞的作用，无疑将为FL作为造血因子的临床运用提供理论依据。
本研究结果表明，髓系来源的HL60细胞和淋巴瘤Raji细胞对FL有一定的促增殖效应，但不同浓度的FL对骨髓瘤细胞株8266、U266、XG-1、淋巴瘤Daudi、Jurkat及白血病细胞株Baf、TF1、B9、KG1-a的体外生长无明显作用。上述结果可能存在以下几种解释：(1)重组FL仅对一些来自单核细胞系的白血病及某些淋巴瘤细胞的体外生长有促进增殖作用。这与文献报道的结果相应；(2)大多数白血病和淋巴细胞不表达FL受体，所以也不对外源性FL产生增殖反应；(3)在某些情况下，该因子并不产生增殖作用，而是分化作用。这些值得进一步分析FL对上述细胞的分化和抗凋亡的作用。最后，我们发现FL在较低浓度时可刺激内皮细胞Ecv的增殖，该作用尚未见报道。但人重组FL是通过FL受体还是通过间接途径起作用，尚需进一步研究。目前，已有研究证实内皮细胞可以分泌FL，推测FL可能在刺激内皮细胞增殖和生长过程中起自分泌作用。Krishnasswany等[4]发现，内皮细胞参与炎症发生的病理过程，可产生IL-1、IL-6、IL-8、IL-11、IL-15、GM-CSF、G-CSF、M-CSF及其它一些细胞因子。这些因子在炎症和造血过程中起重要作用。所以，我们认为人重组FL刺激内皮细胞的增殖，可能在造血和炎症的病理过程中起直接或间接作用。
, 百拇医药
*国际预研项目资助课题(Y5573162)
△硕士研究生 △△导师
参考文献
1 Hans GD,et al. Effects of Flt3 ligand on proliferation and survival of myeloid leukemia cells.Leukemia and Lymphoma,1999，33(1-2)∶83
2 Olivier R,et al.Human Flt3/Flk2 gene:cDNAcloning and expression in hematopoietic cells.Blood,1993,182(4)∶1110
3 Drexler H.Expression of Flt3 receptorand response to Flt3 ligand by leukemic cells.Leukemia,1996,10(4)∶588
4 Krishnaswamy G,et al.Human endothelium as a sourse of multifunctional cytokines:molecular regulation and possible in human disease.Interferon Cytokine Res,1999,19(2)∶91
(1999年7月18日收稿), http://www.100md.com(李颖△ 许志祥 黄伟达 顾宗江 张学光△△)
单位：苏州医学院免疫学研究室，苏州，215007
关键词：FL；淋巴瘤；白血病
苏州医学院学报991104 摘要 目的：探讨FL对淋巴瘤与白血病细胞株的体外作用。方法：采用MTT法检测不同浓度的人重组FL对一系列淋巴瘤和白血病细胞的体外生长作用。结果：FL对HL60，Raji及Ecv(人内皮细胞株)细胞有一定的促进增殖作用，而对其它大多数淋巴瘤和白血病细胞无明显的效应。结论：人重组FL刺激内皮细胞的增殖可能在造血和炎症的病理过程中起直接或间接作用，从而为FL的临床运用提供一定的理论依据。
中图法分类 R392.11
Effect of FL on Lymphoma and Acute Myeloid
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Leukemia Cell Lines in Vitro
Li Ying ,Xu Zhixiang,Huang Weida,et al
(Department of Immunology,Suzhou Medical College,Suzhou,215007)
Abstract Purpose To investigate the effect of FL on lymphoma and acute myeloid leukemia(AML)cell lines in vitro .Method The response of this series of cell lines to different doses of recombinant human FL(rhFL)was observed using the MTT assay. Result HL60,Raji,and Ecv cell lines showed enhanced survival whereas other lines were unaffected. Conclusion FL induce endothelia to proliferate,which may play a direct or indirect role in the pathological courses of hematopoiesis and inflammation.the result provides additional information for the clinical application of FL.
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Key words FL; lymphoma; AML
FL是近年发现的一种早期造血生长因子，为Ⅲ型酪氨酸激酶受体的配体，能促进早期造血干/祖细胞的生长和分化；在急性辐射损伤中，人重组FL具有显著的保护造血干/祖细胞的作用，并与其它因子如G-CSF、GM-CSF等有显著的协同效应[1]。鉴此，人重组FL具有重要的研究和潜在的运用价值。但近年文献[2]报道一些白血病细胞表达FL受体，并可能与白血病细胞的生长或抗凋亡效应相关。本文就FL对一系列淋巴瘤和白血病细胞株的体外作用进行初步探讨。
1 材料、方法和结果
1.1 细胞来源和培养条件：本次实验采用的多发性骨髓瘤细胞株8266、U266购于美国ATCC，XG-1(人IL-6依赖多发性骨髓瘤细胞株)由本室建成；淋巴瘤细胞株Daudi、Jurkat、Raji,白血病细胞株KG1-a和GM-CSF 、Epo依赖细胞株TF1购自美国ATCC；HL60由本院张日博士赠送；小鼠IL-6依赖株B9由法国B.Kllen博士馈赠；人内皮细胞(Evc)购于武汉细胞库。上述细胞株均由本室保存和常规传代培养，无支原体感染，IL-6依赖细胞株B9在常规培养中加入1μg/L人重IL-6；加入10μg/L人重组GM-CSF于TF1培养中，作为条件培养液。在37℃、5%CO2培养箱中，用含10%小牛血清的RPIM 1640进行培养。
, 百拇医药
1.2 主要试剂：人重组FL购自美国Immugenex；小牛血清、RPIM 1640(GIBCO)、GM-CSF、人重组IL-6由上海生化所刘新恒教授赠送。
1.3 实验方法：FL标准品用RPIM 1640进行稀释成1、5、25μg/L,每种浓度作3个复份，在96个孔板中每孔加入5000个细胞，37℃、5%CO2培养箱中共同培养7h，终止培养前4h加入5μg/L MTT(20μl/孔)，培养终止后，离心去上清，用0.04mol/L盐酸异丙醇(每孔100μl)溶解甲月 赞颗粒，用酶标仪测定吸光度(光密度OD)值，比色波长为570nm。
1.4 结果：人重组FL对白血病细胞株的体外增殖作用结果如图1所示，人重组FL对HL60，Raji、Ecv(内皮细胞株)细胞的体外作用见图2。结果表明，人重组FL对大多数白血病和淋巴瘤细胞株如Jurkat、8266、U266、Daudi、Baf、TF1、B9、XG-1、KG1-a的体外增殖无明显效应。
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图1 FL对不同白血病及淋巴瘤细胞株的体外作用
图2 FL对HL60、Raji、Ecv细胞的体外作用
2 讨论
有研究[3]表明，在许多造血前体细胞和白血病细胞有FL受体的表达，尤其在急性白血病中，单核细胞和髓性细胞来源的白血病细胞均表达FL受体，而红系和巨噬细胞系来源的白血病细胞不表达FL受体。由于FL能刺激表达FL受体的造血前体细胞增殖，所以人们推测该因子可能刺激表达FL受体的白血病细胞的生长。进一步阐明，人重组FL对白血病细胞的作用，无疑将为FL作为造血因子的临床运用提供理论依据。
本研究结果表明，髓系来源的HL60细胞和淋巴瘤Raji细胞对FL有一定的促增殖效应，但不同浓度的FL对骨髓瘤细胞株8266、U266、XG-1、淋巴瘤Daudi、Jurkat及白血病细胞株Baf、TF1、B9、KG1-a的体外生长无明显作用。上述结果可能存在以下几种解释：(1)重组FL仅对一些来自单核细胞系的白血病及某些淋巴瘤细胞的体外生长有促进增殖作用。这与文献报道的结果相应；(2)大多数白血病和淋巴细胞不表达FL受体，所以也不对外源性FL产生增殖反应；(3)在某些情况下，该因子并不产生增殖作用，而是分化作用。这些值得进一步分析FL对上述细胞的分化和抗凋亡的作用。最后，我们发现FL在较低浓度时可刺激内皮细胞Ecv的增殖，该作用尚未见报道。但人重组FL是通过FL受体还是通过间接途径起作用，尚需进一步研究。目前，已有研究证实内皮细胞可以分泌FL，推测FL可能在刺激内皮细胞增殖和生长过程中起自分泌作用。Krishnasswany等[4]发现，内皮细胞参与炎症发生的病理过程，可产生IL-1、IL-6、IL-8、IL-11、IL-15、GM-CSF、G-CSF、M-CSF及其它一些细胞因子。这些因子在炎症和造血过程中起重要作用。所以，我们认为人重组FL刺激内皮细胞的增殖，可能在造血和炎症的病理过程中起直接或间接作用。
, 百拇医药
*国际预研项目资助课题(Y5573162)
△硕士研究生 △△导师
参考文献
1 Hans GD,et al. Effects of Flt3 ligand on proliferation and survival of myeloid leukemia cells.Leukemia and Lymphoma,1999，33(1-2)∶83
2 Olivier R,et al.Human Flt3/Flk2 gene:cDNAcloning and expression in hematopoietic cells.Blood,1993,182(4)∶1110
3 Drexler H.Expression of Flt3 receptorand response to Flt3 ligand by leukemic cells.Leukemia,1996,10(4)∶588
4 Krishnaswamy G,et al.Human endothelium as a sourse of multifunctional cytokines:molecular regulation and possible in human disease.Interferon Cytokine Res,1999,19(2)∶91
(1999年7月18日收稿), http://www.100md.com(李颖△ 许志祥 黄伟达 顾宗江 张学光△△)