丽丝胺罗丹明B脂质体两种制备方法的比较
作者：罗招凡 刘剑雄 范侠
单位：罗招凡 范侠(中山医科大学孙逸仙纪念医院检验科； 广州， 510120)；刘剑雄(湖北医科大学附属第一医院检验科； 武汉， 430060)
关键词：脂质体；分离和提纯；显微镜检查，电子
中山医科大学学报/990326
中图号 R 446.6
脂质体(Liposome)是人工合成的双分子类脂膜性微球，其作为药物载体和生物膜模型，已得到了广泛的用途。但近些年来提出及建立的脂质体免疫试验(LIA)[1]，可用于多种临床指标的测定，如检测血浆地高辛、血清甲胎球蛋白、尿中微量白蛋白等。本文报道用两种方法制备出丽丝胺罗丹明B脂质体(LESB)，旨在为进一步建立LIA提供实验依据。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
直接超声技术(DUT)[2]稍加改良及逆相蒸发法(RPE)[3]制备LESB。分别测定游离及初始丽丝胺罗丹明(SB)经适当稀释后在565 nm处的吸光度值，按公式γ w =(1-m游/m总)×100%计算包裹率γw 。采用负染透射电镜技术观察脂质体大小与形态。LESB置4 ℃冰箱存放半年，按公式γl =(m漏/m裹)×100%计算泄漏率γc 。所有参数以
±s表示，组间均数差异用t检验统计。
2 结果
2.1 LESB形态与大小比较
, 百拇医药
经电镜观察，DUT法脂质体约(30±5) nm,属均匀的小单层脂质体(SUVs)，见图1。RPE法的为(420±30) nm，呈较均一的大单层脂质体(LUVs)，见图2。
图1.DUT法LESB负染电镜照片 (×40 000)
Fig. 1 Electronograph of LESB with DUT method
图2.RPE法LESB负染电镜 照片 (x30 000)
Fig. 2 Electronograph of LESB With RPE method
, 百拇医药
2.2 SB包裹率的比较
重复4次测定后，经统计学处理，DUT组包裹率为(9.7±0.6)% (不含cholestrol liposome)及(20.6±0.7)% (含44% cholestrol liposome)； RPE组对应为(27.3±0.5)%、(41.4±0.6)%。后者显著高于前者，P<0.05。
2.3 LESB稳定性
LESB贮存6个月后，DUT组泄漏率为(94.4±0.7)% (含cholestrol liposome)及(15.6±0.6)% (含44% cholestrol liposome); RPE组对应为(93.1±0.6)%和(1.47±0.1)%。RPE组显著低于DUT组，P<0.01。
3 讨论
制备脂质体的方法有10余种，以DUT和RPE法应用最为广泛。前者多为制备均匀SUVs，其条件温和，易于控制，缺点是包裹效率低，不易贮存，且混合类脂在双层膜的内外分布不均匀，RPE法是制备高包裹率脂质体的方法。我们采用此法获得LUVs，在电镜下观察，直径为(420±30) nm，包裹效率在41%左右，其中的胆固醇(chol)用来减低脂质体的渗透性以保证脂质体稳定性。当胆固醇含量为40%时，有最大包裹率，当胆固醇含量超过50%时，脂质体就难以制备。含44%胆固醇的LUVs于4 ℃冰箱存放6个月后，测得其泄漏率为1.47%，达到贮存的初步要求。通过对两种LESB的制备、贮存的研究，为选择包裹SB的LUVs进行体外的脂质体免疫试验提供了参考。
, 百拇医药
参考文献
1.Rongen H A H,Bult A, Van Bennekon W P. Liposomes and immunoassays(Review). J Immunol Methods, 1997,204(2):105
2.Johnson S M, Bangham A D. Hill M W, et al. Single bilayer liposomes. Biochem Biophys Acta, 1971, 233(3):820
3.Szoka F J R, Papahadjopoulos D. Procedure for preparation of liposomes with large internal aqueous space and high capture by reverse-phase evaporation. Proc Natl Acad Sci USA, 1978,75(9):4194
1998 - 12 - 01收稿
1999 - 04 - 15修回
, http://www.100md.com
单位：罗招凡 范侠(中山医科大学孙逸仙纪念医院检验科； 广州， 510120)；刘剑雄(湖北医科大学附属第一医院检验科； 武汉， 430060)
关键词：脂质体；分离和提纯；显微镜检查，电子
中山医科大学学报/990326
中图号 R 446.6
脂质体(Liposome)是人工合成的双分子类脂膜性微球，其作为药物载体和生物膜模型，已得到了广泛的用途。但近些年来提出及建立的脂质体免疫试验(LIA)[1]，可用于多种临床指标的测定，如检测血浆地高辛、血清甲胎球蛋白、尿中微量白蛋白等。本文报道用两种方法制备出丽丝胺罗丹明B脂质体(LESB)，旨在为进一步建立LIA提供实验依据。
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1 材料与方法
直接超声技术(DUT)[2]稍加改良及逆相蒸发法(RPE)[3]制备LESB。分别测定游离及初始丽丝胺罗丹明(SB)经适当稀释后在565 nm处的吸光度值，按公式γ w =(1-m游/m总)×100%计算包裹率γw 。采用负染透射电镜技术观察脂质体大小与形态。LESB置4 ℃冰箱存放半年，按公式γl =(m漏/m裹)×100%计算泄漏率γc 。所有参数以
±s表示，组间均数差异用t检验统计。2 结果
2.1 LESB形态与大小比较
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经电镜观察，DUT法脂质体约(30±5) nm,属均匀的小单层脂质体(SUVs)，见图1。RPE法的为(420±30) nm，呈较均一的大单层脂质体(LUVs)，见图2。
图1.DUT法LESB负染电镜照片 (×40 000)
Fig. 1 Electronograph of LESB with DUT method
图2.RPE法LESB负染电镜 照片 (x30 000)
Fig. 2 Electronograph of LESB With RPE method
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2.2 SB包裹率的比较
重复4次测定后，经统计学处理，DUT组包裹率为(9.7±0.6)% (不含cholestrol liposome)及(20.6±0.7)% (含44% cholestrol liposome)； RPE组对应为(27.3±0.5)%、(41.4±0.6)%。后者显著高于前者，P<0.05。
2.3 LESB稳定性
LESB贮存6个月后，DUT组泄漏率为(94.4±0.7)% (含cholestrol liposome)及(15.6±0.6)% (含44% cholestrol liposome); RPE组对应为(93.1±0.6)%和(1.47±0.1)%。RPE组显著低于DUT组，P<0.01。
3 讨论
制备脂质体的方法有10余种，以DUT和RPE法应用最为广泛。前者多为制备均匀SUVs，其条件温和，易于控制，缺点是包裹效率低，不易贮存，且混合类脂在双层膜的内外分布不均匀，RPE法是制备高包裹率脂质体的方法。我们采用此法获得LUVs，在电镜下观察，直径为(420±30) nm，包裹效率在41%左右，其中的胆固醇(chol)用来减低脂质体的渗透性以保证脂质体稳定性。当胆固醇含量为40%时，有最大包裹率，当胆固醇含量超过50%时，脂质体就难以制备。含44%胆固醇的LUVs于4 ℃冰箱存放6个月后，测得其泄漏率为1.47%，达到贮存的初步要求。通过对两种LESB的制备、贮存的研究，为选择包裹SB的LUVs进行体外的脂质体免疫试验提供了参考。
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参考文献
1.Rongen H A H,Bult A, Van Bennekon W P. Liposomes and immunoassays(Review). J Immunol Methods, 1997,204(2):105
2.Johnson S M, Bangham A D. Hill M W, et al. Single bilayer liposomes. Biochem Biophys Acta, 1971, 233(3):820
3.Szoka F J R, Papahadjopoulos D. Procedure for preparation of liposomes with large internal aqueous space and high capture by reverse-phase evaporation. Proc Natl Acad Sci USA, 1978,75(9):4194
1998 - 12 - 01收稿
1999 - 04 - 15修回
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