舌鳞状细胞癌组织中p53、p21和bcl-2基因蛋白的表达
作者：潘朝斌 黄洪章 陈伟良 李海刚 王安训
单位：中山医科大学孙逸仙纪念医院 病理科， 广东 广州 510120
关键词：舌肿瘤；免疫学；基因；p53；基因；p21；基因；bcl-2；基因表达
中山医科大学学报000403
摘 要： 【目的】 研究p53、p21和bcl-2基因蛋白在舌鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。【方法】 用免疫组化SP法检测54例舌鳞状细胞癌组织标本p53、p21和bcl-2癌基因蛋白表达。【结果】 舌鳞状细胞癌组织中p53、p21和bcl-2蛋白阳性率分别为46%、61%、46%；p53和p21蛋白表达与肿瘤细胞分化程度及颈淋巴结转移有关(P<0.05)；p53蛋白表达与p21蛋白表达有关(P<0.05)，bcl-2基因蛋白表达与p53或 p21基因蛋白表达无关(P>0.05)。【结论】 舌鳞状细胞癌组织中具有较高的p53、p21和bcl-2癌基因蛋白表达；p53和/或p21蛋白阳性病例恶性程度高，易发生颈淋巴结转移。p53和/或p21蛋白可作为舌鳞癌预后的参考指标。
, 百拇医药
中图分类号：R739.86 文献标识码： A
文章编号：1000-257X(2000)04-0248-03
Expression of p53, p21 and bcl-2 Proteins in Tongue Squamous Cell Carcinoma
PAN Chao-bin, HUANG Hong-zhang, CHEN Wei-liang,WANG An-xun
(Department of Oral and Maxillofacial Surgery; Department of Pathology, Sun Yat-sen Memorial Hospital,Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510120，China)
, 百拇医药
LI Hai-gang
(Department of Oral and Maxillofacial Surgery; Department of Pathology, Sun Yat-sen Memorial Hospital,Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510120，China)
Abstract: 【Objective】 To study the expression of p53, p21 and bcl-2 proteins in tongue squamous cell carcinomas (SCC) and their significances. 【Methods】 The expression of p53, p21 and bcl-2 proteins in 54 cases of tongue SCC was detected by immunohistochemical SP method. 【Results】 The positive expression of p53, p21 and bcl-2 proteins in tongue SCC were 46%, 61%, 46%, respectively.The expression of p53 and p21 proteins were related with tumor pathological grade (P<0.05)and cervical lymph node metastasis. The expression of p21 protein was associated with that of p53 protein (P<0.05). There was no significant relation among the expression of the three proteins. 【Conclusion】 p53, p21 and bcl-2 proteins can extensively positive express in tongue SCC. The expression of p53 and/or p21 proteins is valuable in determining the tumor biological behavior, metastasis potential and prognosis.
, 百拇医药
Key words:tongue neoplasm/immunology; gene, p53; gene, p21; gene, bcl-2; gene expression
恶性肿瘤的发生与多种癌基因激活、抑癌基因失活和细胞凋亡的调节紊乱有着密切关系。目前认为, p53和bcl-2是细胞凋亡调控中最重要的基因[1]。已发现口腔鳞状细胞癌中有多种癌基因，如ras, c-myc, p53 等的过度表达，并与肿瘤恶性程度有关[2]。本研究应用免疫组化SP法对54例舌鳞状细胞癌组织中p53、p21和bcl-2作检测，旨在探讨这3种癌基因的表达及其生物学意义。
1 材料和方法
1.1 临床资料
经手术及病理确诊的舌鳞状细胞癌组织标本54例，男31例，女23例，年龄33～75岁，平均(50±4)岁。组织病理学分级：G1(高分化)30例，G2(中分化) 13例，G3(低分化)11例。临床分期按UICC四期分类方案，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期分别为7、17、21和9例。
, 百拇医药
1.2 主要试剂
鼠抗人 p53、p21和bcl-2单克隆抗体及免疫试剂盒均购自福建迈新公司。
1.3 免疫组化SP法
① 取石蜡包埋标本切片脱蜡，水化；② 微波炉抗原修复(p53)；③ 加过氧化酶阻断内源性氧化酶活性、漂洗；④ 非免疫性动物血清封闭非特异性抗原；⑤ 单抗的孵育、漂洗；⑥ 加入生物素标记的二抗孵育、漂洗；⑦ 加链霉素生物素蛋白—过氧化物酶溶液；⑧DAB 显色、复染苏木素。实验中设阴性对照和空白对照。
1.4 结果判断
p53、p21和bcl-2显色反应：每切片随机选择4个高倍镜视野，计算100个细胞中的阳性数，取平均数，作为显色指数。显色指数为[0,1)、[1,25)、[25,50)、[50,100]时相应显色反应强度依次定性为阴性(-)，阳性(+)，较强阳性(+ +)和强阳性(+ + +)。
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1.5 统计学处理
用χ2检验，fisher精确概率法。
2 结 果
p53、p21和bcl-2蛋白阳性表达率分别为46%、61%和46%。阳性反应产物p53蛋白主要分布在细胞核，p21和bcl-2蛋白主要分布于细胞浆，3者表达率之间统计学上无显著性差异(P>0.05)。
bcl-2基因蛋白表达与p53 基因或p21基因蛋白表达无关(P>0.05)；p21基因蛋白表达与p53蛋白表达有关(P<0.05)，见表1。
表1 舌鳞状细胞癌组织中p53蛋白与p21蛋白表达的相关性
Table 1 The relationship between p53 protein expressionand p21 protein expression in tongue SCCn
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p53(+)
p53(-)
Total
p21+
11
22
33
p21-
14
7
21
Total
25
, 百拇医药
29
54
Note: compared p53 with p21, χ2=5.74, P<0.05
舌鳞状细胞癌组织中p53和p21蛋白表达与组织病理分级有关(P<0.05)，而bcl-2蛋白表达与病理学分级无关(P>0.05),见表2。
舌鳞状细胞癌颈淋巴结转移与p53和p21蛋白表达有关(P<0.05)，而与bcl-2蛋白表达无关(P>0.05)，见表3。
bcl-2蛋白表达与临床分期有关(P<0.05)，早期组阳性率为63%, 高于晚期组的33%,p21和p53蛋白表达与临床分期无关(P>0.05),见表4。
表2 3种癌基因蛋白表达与舌鳞状细胞癌病理学分级的关系
, 百拇医药
Table 2 The relationship between the expression of the three oncogenes and pathological grade in tongue SCC n(%) Pathological grade 1)
Cases
p53(+～+ + +)
p21(+～+ + +)
bcl-2(+～+ + +)
G1
30
8(27)
13(43)
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13(43)
G2
13
8(62)
10(77)
7(54)
G3
11
9(82)
10(91)
5(55)
Total
, http://www.100md.com
54
25(46)
33(61)
25(46)
1) Compared with p53 or p21, P<0.05; compared with bcl-2, P>0.05表3 3种癌基因表达与颈淋巴结转移的关系
Table 3 Association of the expression of the three oncogenes and cervical lymph node metastasisn(%) Lymph metastasis
Cases
p53(+～+ + +)
, http://www.100md.com
p21(+～+ + +)
bcl-2(+～+ + +)
Positive
18
13(72) 1)
15(83) 1)
12(33)
Negative
36
12(33)
18(50)
, 百拇医药 17(53)
Total
54
25(46)
33(61)
29(46)
Compared to negative group, 1) P<0.05表4 3种癌基因蛋白表达与临床分期的关系
Table 4 Association between the expression of the three oncogenes and clinical stage of the tongue SCCn(%) Stage
Cases
, 百拇医药
p53(+～+ + +)
p21(+～+ + +)
bcl-2(+～+ + +)
Early
24
11(46)
12(50)
5(63) 1)
Advanced
30
14(47)
21(70)
, 百拇医药
10(33)
Total
54
25(46)
33(61)
25(46)
Compared to advanced group, 1) P>0.05
3 讨 论
ras癌基因突变及其p21蛋白表达可引起细胞形态改变，促进细胞分裂增殖。p21蛋白表达与某些肿瘤发生、生物学行为及预后有密切关系，p21蛋白阳性表达者恶性程度高，预后差[3]。本研究中舌鳞状细胞癌组织p21蛋白表达率达61%，与陆蔚人等[4]的结果相似；p21蛋白表达随肿瘤恶性程度增加而增高，与颈淋巴结转移有相关性。我们认为，p21蛋白表达可作为舌鳞状细胞癌恶性程度及颈淋巴结转移潜能的参考指标。
, 百拇医药
p53基因异常是目前发现的人类癌症中最常见及关键的基因改变，免疫组化分析发现口腔鳞状细胞癌p53蛋白表达率达50%～80%。Atula等[5]的研究证实其阳性率达51.5%，本研究结果与之相似。Brennan等[6]用免疫组化检测口腔鳞状细胞癌、白斑、扁平苔藓中p53蛋白表达，结果表明p53基因突变可能发生在口腔癌发生的早期。本组资料显示p53在早晚期舌鳞状细胞癌中表达无差异，p53基因突变可能涉及舌鳞癌发生、发展的整个过程。另外发现p53蛋白表达与癌组织分化程度及颈淋巴结转移有关。我们认为检测p53蛋白有利于判断舌鳞状细胞癌的恶性程度及颈淋巴结转移的可能性。
bcl-2基因编码蛋白可能作用于各种原因诱导的细胞凋亡，它在不增加细胞增殖情况下通过抑制细胞程序性死亡，破坏机体内由细胞增殖和细胞死亡形成的平衡，从而导致肿瘤发生[7]。有关bcl-2基因在舌鳞状细胞癌组织中表达的研究比较少，本研究发现bcl-2 蛋白表达率达46%。早期舌鳞状细胞癌组(Ⅰ、Ⅱ期)阳性率为63%，明显高于晚期(Ⅲ、Ⅳ期)的33%(P<0.05)，其表达与肿瘤分化程度及颈淋巴结转移无关。这可能提示bcl-2基因突变主要发生在舌鳞状细胞癌癌变早期。
, http://www.100md.com
我们对该3种癌基因蛋白相互关系的分析发现：bcl-2 蛋白表达与p21或p53蛋白表达统计学无相关性，p21蛋白表达与p53蛋白表达有相关性(P<0.05)，其内在机制有待进一步研究。
作者简介：潘朝斌(1965-)，男，壮族，广西武宣人，博士生，讲师.
参考文献：
[1] John F R K, Clay M W, Brian V H. Apoptosis, its significance in cancer and cancer therapy [J]. Cancer, 1994,73(8):2013.
[2] Saranath D, Panchal R G, Nair R, et al. Oncogene amplification in squamous cell carcinoma of the oral cavity [J]. JPN J Cancer Res, 1989, 80(5):430.
, http://www.100md.com
[3] Jansson D S, Radosevich J A, Carney W P, et al. An immunohistochemical analysis of ras oncogen expression in epithelial neoplasms of the colon [J]. Cancer,1990, 65(6):1329.
[4] 陆蔚人，张永福，蒋爱兴，等. ras 、p21和p53蛋白与口腔鳞癌的关系[J]. 中华口腔医学杂志, 1997, 32(2):128.
[5] Atula S, Grenman R, Laippala P, et al. Cancer of the tongue in patients younger than 40 years, a distinct entity? [J]. Arch Otolaryngol, 1996,122(12):1313.
, 百拇医药
[6] Brennan J A. Molecular assessment of histopathological staging in squamous cell carcinoma of the head and neck [J]. N Engl J Med. 1995,332(7):429.
[7] Yan J J, Chen F F, Tsai Y C, et al. Immunohistochemical detection of bcl-2 protein in small cell carcinoma [J]. Oncology, 1996,53(1):6.
收稿日期：1999-12-31, 百拇医药
单位：中山医科大学孙逸仙纪念医院 病理科， 广东 广州 510120
关键词：舌肿瘤；免疫学；基因；p53；基因；p21；基因；bcl-2；基因表达
中山医科大学学报000403
摘 要： 【目的】 研究p53、p21和bcl-2基因蛋白在舌鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。【方法】 用免疫组化SP法检测54例舌鳞状细胞癌组织标本p53、p21和bcl-2癌基因蛋白表达。【结果】 舌鳞状细胞癌组织中p53、p21和bcl-2蛋白阳性率分别为46%、61%、46%；p53和p21蛋白表达与肿瘤细胞分化程度及颈淋巴结转移有关(P<0.05)；p53蛋白表达与p21蛋白表达有关(P<0.05)，bcl-2基因蛋白表达与p53或 p21基因蛋白表达无关(P>0.05)。【结论】 舌鳞状细胞癌组织中具有较高的p53、p21和bcl-2癌基因蛋白表达；p53和/或p21蛋白阳性病例恶性程度高，易发生颈淋巴结转移。p53和/或p21蛋白可作为舌鳞癌预后的参考指标。
, 百拇医药
中图分类号：R739.86 文献标识码： A
文章编号：1000-257X(2000)04-0248-03
Expression of p53, p21 and bcl-2 Proteins in Tongue Squamous Cell Carcinoma
PAN Chao-bin, HUANG Hong-zhang, CHEN Wei-liang,WANG An-xun
(Department of Oral and Maxillofacial Surgery; Department of Pathology, Sun Yat-sen Memorial Hospital,Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510120，China)
, 百拇医药
LI Hai-gang
(Department of Oral and Maxillofacial Surgery; Department of Pathology, Sun Yat-sen Memorial Hospital,Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510120，China)
Abstract: 【Objective】 To study the expression of p53, p21 and bcl-2 proteins in tongue squamous cell carcinomas (SCC) and their significances. 【Methods】 The expression of p53, p21 and bcl-2 proteins in 54 cases of tongue SCC was detected by immunohistochemical SP method. 【Results】 The positive expression of p53, p21 and bcl-2 proteins in tongue SCC were 46%, 61%, 46%, respectively.The expression of p53 and p21 proteins were related with tumor pathological grade (P<0.05)and cervical lymph node metastasis. The expression of p21 protein was associated with that of p53 protein (P<0.05). There was no significant relation among the expression of the three proteins. 【Conclusion】 p53, p21 and bcl-2 proteins can extensively positive express in tongue SCC. The expression of p53 and/or p21 proteins is valuable in determining the tumor biological behavior, metastasis potential and prognosis.
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Key words:tongue neoplasm/immunology; gene, p53; gene, p21; gene, bcl-2; gene expression
恶性肿瘤的发生与多种癌基因激活、抑癌基因失活和细胞凋亡的调节紊乱有着密切关系。目前认为, p53和bcl-2是细胞凋亡调控中最重要的基因[1]。已发现口腔鳞状细胞癌中有多种癌基因，如ras, c-myc, p53 等的过度表达，并与肿瘤恶性程度有关[2]。本研究应用免疫组化SP法对54例舌鳞状细胞癌组织中p53、p21和bcl-2作检测，旨在探讨这3种癌基因的表达及其生物学意义。
1 材料和方法
1.1 临床资料
经手术及病理确诊的舌鳞状细胞癌组织标本54例，男31例，女23例，年龄33～75岁，平均(50±4)岁。组织病理学分级：G1(高分化)30例，G2(中分化) 13例，G3(低分化)11例。临床分期按UICC四期分类方案，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期分别为7、17、21和9例。
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1.2 主要试剂
鼠抗人 p53、p21和bcl-2单克隆抗体及免疫试剂盒均购自福建迈新公司。
1.3 免疫组化SP法
① 取石蜡包埋标本切片脱蜡，水化；② 微波炉抗原修复(p53)；③ 加过氧化酶阻断内源性氧化酶活性、漂洗；④ 非免疫性动物血清封闭非特异性抗原；⑤ 单抗的孵育、漂洗；⑥ 加入生物素标记的二抗孵育、漂洗；⑦ 加链霉素生物素蛋白—过氧化物酶溶液；⑧DAB 显色、复染苏木素。实验中设阴性对照和空白对照。
1.4 结果判断
p53、p21和bcl-2显色反应：每切片随机选择4个高倍镜视野，计算100个细胞中的阳性数，取平均数，作为显色指数。显色指数为[0,1)、[1,25)、[25,50)、[50,100]时相应显色反应强度依次定性为阴性(-)，阳性(+)，较强阳性(+ +)和强阳性(+ + +)。
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1.5 统计学处理
用χ2检验，fisher精确概率法。
2 结 果
p53、p21和bcl-2蛋白阳性表达率分别为46%、61%和46%。阳性反应产物p53蛋白主要分布在细胞核，p21和bcl-2蛋白主要分布于细胞浆，3者表达率之间统计学上无显著性差异(P>0.05)。
bcl-2基因蛋白表达与p53 基因或p21基因蛋白表达无关(P>0.05)；p21基因蛋白表达与p53蛋白表达有关(P<0.05)，见表1。
表1 舌鳞状细胞癌组织中p53蛋白与p21蛋白表达的相关性
Table 1 The relationship between p53 protein expressionand p21 protein expression in tongue SCCn
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p53(+)
p53(-)
Total
p21+
11
22
33
p21-
14
7
21
Total
25
, 百拇医药
29
54
Note: compared p53 with p21, χ2=5.74, P<0.05
舌鳞状细胞癌组织中p53和p21蛋白表达与组织病理分级有关(P<0.05)，而bcl-2蛋白表达与病理学分级无关(P>0.05),见表2。
舌鳞状细胞癌颈淋巴结转移与p53和p21蛋白表达有关(P<0.05)，而与bcl-2蛋白表达无关(P>0.05)，见表3。
bcl-2蛋白表达与临床分期有关(P<0.05)，早期组阳性率为63%, 高于晚期组的33%,p21和p53蛋白表达与临床分期无关(P>0.05),见表4。
表2 3种癌基因蛋白表达与舌鳞状细胞癌病理学分级的关系
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Table 2 The relationship between the expression of the three oncogenes and pathological grade in tongue SCC n(%) Pathological grade 1)
Cases
p53(+～+ + +)
p21(+～+ + +)
bcl-2(+～+ + +)
G1
30
8(27)
13(43)
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13(43)
G2
13
8(62)
10(77)
7(54)
G3
11
9(82)
10(91)
5(55)
Total
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54
25(46)
33(61)
25(46)
1) Compared with p53 or p21, P<0.05; compared with bcl-2, P>0.05表3 3种癌基因表达与颈淋巴结转移的关系
Table 3 Association of the expression of the three oncogenes and cervical lymph node metastasisn(%) Lymph metastasis
Cases
p53(+～+ + +)
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p21(+～+ + +)
bcl-2(+～+ + +)
Positive
18
13(72) 1)
15(83) 1)
12(33)
Negative
36
12(33)
18(50)
, 百拇医药 17(53)
Total
54
25(46)
33(61)
29(46)
Compared to negative group, 1) P<0.05表4 3种癌基因蛋白表达与临床分期的关系
Table 4 Association between the expression of the three oncogenes and clinical stage of the tongue SCCn(%) Stage
Cases
, 百拇医药
p53(+～+ + +)
p21(+～+ + +)
bcl-2(+～+ + +)
Early
24
11(46)
12(50)
5(63) 1)
Advanced
30
14(47)
21(70)
, 百拇医药
10(33)
Total
54
25(46)
33(61)
25(46)
Compared to advanced group, 1) P>0.05
3 讨 论
ras癌基因突变及其p21蛋白表达可引起细胞形态改变，促进细胞分裂增殖。p21蛋白表达与某些肿瘤发生、生物学行为及预后有密切关系，p21蛋白阳性表达者恶性程度高，预后差[3]。本研究中舌鳞状细胞癌组织p21蛋白表达率达61%，与陆蔚人等[4]的结果相似；p21蛋白表达随肿瘤恶性程度增加而增高，与颈淋巴结转移有相关性。我们认为，p21蛋白表达可作为舌鳞状细胞癌恶性程度及颈淋巴结转移潜能的参考指标。
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p53基因异常是目前发现的人类癌症中最常见及关键的基因改变，免疫组化分析发现口腔鳞状细胞癌p53蛋白表达率达50%～80%。Atula等[5]的研究证实其阳性率达51.5%，本研究结果与之相似。Brennan等[6]用免疫组化检测口腔鳞状细胞癌、白斑、扁平苔藓中p53蛋白表达，结果表明p53基因突变可能发生在口腔癌发生的早期。本组资料显示p53在早晚期舌鳞状细胞癌中表达无差异，p53基因突变可能涉及舌鳞癌发生、发展的整个过程。另外发现p53蛋白表达与癌组织分化程度及颈淋巴结转移有关。我们认为检测p53蛋白有利于判断舌鳞状细胞癌的恶性程度及颈淋巴结转移的可能性。
bcl-2基因编码蛋白可能作用于各种原因诱导的细胞凋亡，它在不增加细胞增殖情况下通过抑制细胞程序性死亡，破坏机体内由细胞增殖和细胞死亡形成的平衡，从而导致肿瘤发生[7]。有关bcl-2基因在舌鳞状细胞癌组织中表达的研究比较少，本研究发现bcl-2 蛋白表达率达46%。早期舌鳞状细胞癌组(Ⅰ、Ⅱ期)阳性率为63%，明显高于晚期(Ⅲ、Ⅳ期)的33%(P<0.05)，其表达与肿瘤分化程度及颈淋巴结转移无关。这可能提示bcl-2基因突变主要发生在舌鳞状细胞癌癌变早期。
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我们对该3种癌基因蛋白相互关系的分析发现：bcl-2 蛋白表达与p21或p53蛋白表达统计学无相关性，p21蛋白表达与p53蛋白表达有相关性(P<0.05)，其内在机制有待进一步研究。
作者简介：潘朝斌(1965-)，男，壮族，广西武宣人，博士生，讲师.
参考文献：
[1] John F R K, Clay M W, Brian V H. Apoptosis, its significance in cancer and cancer therapy [J]. Cancer, 1994,73(8):2013.
[2] Saranath D, Panchal R G, Nair R, et al. Oncogene amplification in squamous cell carcinoma of the oral cavity [J]. JPN J Cancer Res, 1989, 80(5):430.
, http://www.100md.com
[3] Jansson D S, Radosevich J A, Carney W P, et al. An immunohistochemical analysis of ras oncogen expression in epithelial neoplasms of the colon [J]. Cancer,1990, 65(6):1329.
[4] 陆蔚人，张永福，蒋爱兴，等. ras 、p21和p53蛋白与口腔鳞癌的关系[J]. 中华口腔医学杂志, 1997, 32(2):128.
[5] Atula S, Grenman R, Laippala P, et al. Cancer of the tongue in patients younger than 40 years, a distinct entity? [J]. Arch Otolaryngol, 1996,122(12):1313.
, 百拇医药
[6] Brennan J A. Molecular assessment of histopathological staging in squamous cell carcinoma of the head and neck [J]. N Engl J Med. 1995,332(7):429.
[7] Yan J J, Chen F F, Tsai Y C, et al. Immunohistochemical detection of bcl-2 protein in small cell carcinoma [J]. Oncology, 1996,53(1):6.
收稿日期：1999-12-31, 百拇医药