HPLC法测定银翘解毒软胶囊中绿原酸含量
作者：陈坚
单位：江苏省连云港市药品检验所(222001)
关键词：绿原酸；高效液相色谱法
首都医药990424摘要 本文采用0.2mol/L磷酸二氢钠-甲醇(75∶25 pH3.2)为流动相，在ODS反相柱上采用外标法测定了银翘解毒软胶囊中绿原酸的含量。本法简便、快速、可靠。
银翘解毒软胶囊是由金银花、连翘、牛蒡子等九味中药经加工制备而成的软胶囊；具有清热解毒、辛凉解表的功效，用于风热感冒、发热头痛、咳嗽、咽喉疼痛等。其中所含绿原酸为金银花的有效成分。本文采用反相高效液相色谱法，分析了银翘解毒软胶囊中绿原酸的含量。该法操作简便，准确可靠。
1 仪器与条件
美国SP8810型高效液相色谱仪；SP-100型紫外检测器接SP 4600型数据处理机；SB 3200型超声波清洗器；色谱柱：SP ODS柱(150mm×4mm)，流动相：0.2mol/L磷酸二氢钠-甲醇(75∶25)，磷酸调至pH3.2，流速：0.8ml/min，检测波长330nm。
, 百拇医药
2 药品与试剂
绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所)
银翘解毒软胶囊(连云港康绿制药有限责任公司)
磷酸二氢钠、甲醇等试剂均为分析纯。
3 实验方法
3.1 标准曲线的制备 精密称取绿原酸对照品约10mg，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每1ml含绿原酸1mg的对照品溶液；精密吸取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml分别置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别注入高效液相色谱仪20μl，测定峰面积；以峰面积为纵座标，浓度为横座标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=0.0005C+10.629 r=0.999
3.2 样品的测定 精密称取样品内容物约1g，置具塞的锥形瓶中，加甲醇20ml，超声提取30分钟，滤过，残渣及容器用甲醇30ml分次洗涤，合并滤液和洗液置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，进样20μl分析，结果见表1。
, 百拇医药
3.3 加样回收率试验 精密称取绿原酸对照品约1mg，加入到已测定含量的样品中，按样品测定方法进样分析，结果见表2。
表1 银翘解毒软胶囊中绿原酸含量 批 号
绿原酸的含量(1%)
961203
0.55
961205
0.46
961209
0.68
961218
0.41
, http://www.100md.com
961226
0.61
961229
0.36
平均
0.51
表2加样回收率试验结果 序 号
加入量(mg)
测得量(mg)
回收率
1
1.0060
0.9710
, 百拇医药
96.5%
2
1.0205
0.9804
96.1%
3
1.0147
0.9678
95.4%
4
1.0251
0.9800
95.6%
, 百拇医药
5
1.0308
0.9916
96.2%
6
1.0107
0.9693
95.9%
平均
96.0%
3.4 精密度试验 精密称取同一批号样品按样品测定方法，重复测定5次，结果见表3。表3 银翘解毒软胶囊中绿原酸精密度试验 次 数
, http://www.100md.com 1
2
3
4
5
绿原酸含量(%)
0.40
0.42
0.42
0.41
0.43
RSD (%)
1.1
, http://www.100md.com
4 讨论
4.1 绿原酸对照品溶液应贮存在棕色量瓶内，置冰箱中冷藏，因绿原酸见光受热易分解。
4.2 样品提取条件的选择 经比较认为，以甲醇为溶剂，超声提取30分钟为适宜。
4.3 样品提取液的紫外光谱扫描，在329nm的波长处有最大吸收，故选择330nm为检测波长，流速以0.8ml/min为佳。 参考文献
1 孟品佳等.高效液相色谱法分离金银花成分及测定绿原酸的含量.药物分析杂志，1990，10(1)：58
2 林启寿.中草药成分化学.北京：科学出版社，1977，146, http://www.100md.com
单位：江苏省连云港市药品检验所(222001)
关键词：绿原酸；高效液相色谱法
首都医药990424摘要 本文采用0.2mol/L磷酸二氢钠-甲醇(75∶25 pH3.2)为流动相，在ODS反相柱上采用外标法测定了银翘解毒软胶囊中绿原酸的含量。本法简便、快速、可靠。
银翘解毒软胶囊是由金银花、连翘、牛蒡子等九味中药经加工制备而成的软胶囊；具有清热解毒、辛凉解表的功效，用于风热感冒、发热头痛、咳嗽、咽喉疼痛等。其中所含绿原酸为金银花的有效成分。本文采用反相高效液相色谱法，分析了银翘解毒软胶囊中绿原酸的含量。该法操作简便，准确可靠。
1 仪器与条件
美国SP8810型高效液相色谱仪；SP-100型紫外检测器接SP 4600型数据处理机；SB 3200型超声波清洗器；色谱柱：SP ODS柱(150mm×4mm)，流动相：0.2mol/L磷酸二氢钠-甲醇(75∶25)，磷酸调至pH3.2，流速：0.8ml/min，检测波长330nm。
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2 药品与试剂
绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所)
银翘解毒软胶囊(连云港康绿制药有限责任公司)
磷酸二氢钠、甲醇等试剂均为分析纯。
3 实验方法
3.1 标准曲线的制备 精密称取绿原酸对照品约10mg，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每1ml含绿原酸1mg的对照品溶液；精密吸取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml分别置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别注入高效液相色谱仪20μl，测定峰面积；以峰面积为纵座标，浓度为横座标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=0.0005C+10.629 r=0.999
3.2 样品的测定 精密称取样品内容物约1g，置具塞的锥形瓶中，加甲醇20ml，超声提取30分钟，滤过，残渣及容器用甲醇30ml分次洗涤，合并滤液和洗液置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，进样20μl分析，结果见表1。
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3.3 加样回收率试验 精密称取绿原酸对照品约1mg，加入到已测定含量的样品中，按样品测定方法进样分析，结果见表2。
表1 银翘解毒软胶囊中绿原酸含量 批 号
绿原酸的含量(1%)
961203
0.55
961205
0.46
961209
0.68
961218
0.41
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961226
0.61
961229
0.36
平均
0.51
表2加样回收率试验结果 序 号
加入量(mg)
测得量(mg)
回收率
1
1.0060
0.9710
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96.5%
2
1.0205
0.9804
96.1%
3
1.0147
0.9678
95.4%
4
1.0251
0.9800
95.6%
, 百拇医药
5
1.0308
0.9916
96.2%
6
1.0107
0.9693
95.9%
平均
96.0%
3.4 精密度试验 精密称取同一批号样品按样品测定方法，重复测定5次，结果见表3。表3 银翘解毒软胶囊中绿原酸精密度试验 次 数
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2
3
4
5
绿原酸含量(%)
0.40
0.42
0.42
0.41
0.43
RSD (%)
1.1
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4 讨论
4.1 绿原酸对照品溶液应贮存在棕色量瓶内，置冰箱中冷藏，因绿原酸见光受热易分解。
4.2 样品提取条件的选择 经比较认为，以甲醇为溶剂，超声提取30分钟为适宜。
4.3 样品提取液的紫外光谱扫描，在329nm的波长处有最大吸收，故选择330nm为检测波长，流速以0.8ml/min为佳。 参考文献
1 孟品佳等.高效液相色谱法分离金银花成分及测定绿原酸的含量.药物分析杂志，1990，10(1)：58
2 林启寿.中草药成分化学.北京：科学出版社，1977，146, http://www.100md.com