HPLC法测定茶碱葡萄糖注射液中茶碱的含量
作者：李立 丁刚 吴菊蕙
单位：安徽省阜阳制药厂，236018
关键词：茶碱；分析；色谱法
安徽医科大学学报000137 中图书分类号 R 972.4；R 977.7
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)01-0082-01
美国药典对茶碱的分析方法中所采用的流动相中的乙腈对操作者毒害大，且使用代价大，本法在参考美国药典方法USP法的基础上使用毒性小、代价低的甲醇代替乙腈建立了茶碱的分析方法(HPLC法)，实验效果良好。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 岛津LC-6A高效液相色谱仪，SPD-6AV紫外检测器，C-R4A数据处理机，CTO-6A柱温箱，色谱柱：Shimpack CLC-CDS(150×6 mm)。
, 百拇医药
1.2 试剂 甲醇、乙腈均为液相色谱专用试剂(浙江黄岩化学实验厂)，可可碱、醋酸钠、冰醋酸为分析纯，水为两次蒸馏水。
1.3 药品 茶碱对照品(中国药品生物制品检定所，纯度为98%以上)，茶碱葡萄糖注射液(安徽省阜阳制药厂)。
2 实验方法
2.1 标准溶液的配制 取可可碱50 mg, 置100 ml量瓶中，加6 mol.L-1 氢氧化铵10.0 ml使之溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀。精密称取茶碱对照品，用流动相溶解并稀释，制得每ml约含1 mg的溶液。精密量取此溶液5.0 ml，置50 ml量瓶中，加入内标10.0 ml，用流动相稀释至刻度，摇匀。
2.2 色谱条件 流动相：甲醇-醋酸钠溶液(1.36 g CH3COONa.3H2O，加100 ml水溶解，加冰醋5.0 ml，用水稀释至1000 ml，pH3.6)。流速：1.0 ml.min-1，柱温：35℃，检测波长：280 nm。
, 百拇医药
2.3 供试品溶液的制备 精密量取本品(约相当于茶碱5 mg)，置50 ml量瓶中，加入内标溶液10.0 ml，用流动相稀释至刻度，摇匀。
2.4 实验方法 分别精密量取对照品溶液及供试品溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按照内标法峰面积计算。
3 结果
取对照品适量，精密称量，按照实验方法内容操作，配制系列对照品溶液，浓度分别为0.2022 g.L-1、0.1011 g.L-1、0.05055 g.L-1、0.025275 g.L-1、0.0126375 g.L-1，以进样量(mg)对茶碱与内标可可碱的峰面积比值进行直线回归，得回归方程：
=0.0108+0.7722X， r=0.99996。从实验结果看，茶碱浓度在0.0126375～0.2022 g.L-1时线性良好。
, http://www.100md.com
按照实验方法内容操作，测定回收率，回收率分别为99.54%±0.48%及100.60%±1.09%。样品日内标准相对偏差为0.50%～0.81%，日间标准相对偏差为0.62%～1.02%。分别取两个浓度规格的样品，按照实验方法内容操作，含量测定结果与美国药典方法实验结果比较见表1。
4 讨论
本方法采用高效液相色谱将茶碱与葡萄糖与茶碱原料可能带来的其它生物碱进行分离后进行紫外检测，有效地避免了测定中杂质的干扰。从对供试品的测定结果看，本品与美国药典中方法基本无区别。通过对图谱的分析表明，以甲醇-醋酸钠缓冲液作为流动相代替美国药典方法中的乙腈-醋酸钠缓冲液，降低分析成本和减轻对操作者毒害的同时，也改善了样品与内标的分离。
表1 HPLC法与USP法比较结果 测定方法
批号
, 百拇医药
960901
960902
960903
961001
961002
961003
含量(g.L-1)
标示量
(%)
含量
(g.L-1)
, 百拇医药 标示量
(%)
含量
(g.L-1)
标示量
(%)
含量
(g.L-1)
标示量
(%)
含量
(g.L-1)
, http://www.100md.com
标示量
(%)
含量
(g.L-1)
标示量
(%)
USP法
0.0788
98.5
0.0803
100.3
0.0795
, http://www.100md.com
99.4
0.155
96.9
0.162
101.2
0.157
98.1
HPLC法
0.0792
99.0
0.0801
100.1
0.0793
99.1
0.158
98.8
0.158
99.4
0.156
97.8
作者简介：李 立，男，31岁，工程师
1999-09-28收稿，1999-12-09修回, http://www.100md.com
单位：安徽省阜阳制药厂，236018
关键词：茶碱；分析；色谱法
安徽医科大学学报000137 中图书分类号 R 972.4；R 977.7
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)01-0082-01
美国药典对茶碱的分析方法中所采用的流动相中的乙腈对操作者毒害大，且使用代价大，本法在参考美国药典方法USP法的基础上使用毒性小、代价低的甲醇代替乙腈建立了茶碱的分析方法(HPLC法)，实验效果良好。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 岛津LC-6A高效液相色谱仪，SPD-6AV紫外检测器，C-R4A数据处理机，CTO-6A柱温箱，色谱柱：Shimpack CLC-CDS(150×6 mm)。
, 百拇医药
1.2 试剂 甲醇、乙腈均为液相色谱专用试剂(浙江黄岩化学实验厂)，可可碱、醋酸钠、冰醋酸为分析纯，水为两次蒸馏水。
1.3 药品 茶碱对照品(中国药品生物制品检定所，纯度为98%以上)，茶碱葡萄糖注射液(安徽省阜阳制药厂)。
2 实验方法
2.1 标准溶液的配制 取可可碱50 mg, 置100 ml量瓶中，加6 mol.L-1 氢氧化铵10.0 ml使之溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀。精密称取茶碱对照品，用流动相溶解并稀释，制得每ml约含1 mg的溶液。精密量取此溶液5.0 ml，置50 ml量瓶中，加入内标10.0 ml，用流动相稀释至刻度，摇匀。
2.2 色谱条件 流动相：甲醇-醋酸钠溶液(1.36 g CH3COONa.3H2O，加100 ml水溶解，加冰醋5.0 ml，用水稀释至1000 ml，pH3.6)。流速：1.0 ml.min-1，柱温：35℃，检测波长：280 nm。
, 百拇医药
2.3 供试品溶液的制备 精密量取本品(约相当于茶碱5 mg)，置50 ml量瓶中，加入内标溶液10.0 ml，用流动相稀释至刻度，摇匀。
2.4 实验方法 分别精密量取对照品溶液及供试品溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按照内标法峰面积计算。
3 结果
取对照品适量，精密称量，按照实验方法内容操作，配制系列对照品溶液，浓度分别为0.2022 g.L-1、0.1011 g.L-1、0.05055 g.L-1、0.025275 g.L-1、0.0126375 g.L-1，以进样量(mg)对茶碱与内标可可碱的峰面积比值进行直线回归，得回归方程：
=0.0108+0.7722X， r=0.99996。从实验结果看，茶碱浓度在0.0126375～0.2022 g.L-1时线性良好。, http://www.100md.com
按照实验方法内容操作，测定回收率，回收率分别为99.54%±0.48%及100.60%±1.09%。样品日内标准相对偏差为0.50%～0.81%，日间标准相对偏差为0.62%～1.02%。分别取两个浓度规格的样品，按照实验方法内容操作，含量测定结果与美国药典方法实验结果比较见表1。
4 讨论
本方法采用高效液相色谱将茶碱与葡萄糖与茶碱原料可能带来的其它生物碱进行分离后进行紫外检测，有效地避免了测定中杂质的干扰。从对供试品的测定结果看，本品与美国药典中方法基本无区别。通过对图谱的分析表明，以甲醇-醋酸钠缓冲液作为流动相代替美国药典方法中的乙腈-醋酸钠缓冲液，降低分析成本和减轻对操作者毒害的同时，也改善了样品与内标的分离。
表1 HPLC法与USP法比较结果 测定方法
批号
, 百拇医药
960901
960902
960903
961001
961002
961003
含量(g.L-1)
标示量
(%)
含量
(g.L-1)
, 百拇医药 标示量
(%)
含量
(g.L-1)
标示量
(%)
含量
(g.L-1)
标示量
(%)
含量
(g.L-1)
, http://www.100md.com
标示量
(%)
含量
(g.L-1)
标示量
(%)
USP法
0.0788
98.5
0.0803
100.3
0.0795
, http://www.100md.com
99.4
0.155
96.9
0.162
101.2
0.157
98.1
HPLC法
0.0792
99.0
0.0801
100.1
0.0793
99.1
0.158
98.8
0.158
99.4
0.156
97.8
作者简介：李 立，男，31岁，工程师
1999-09-28收稿，1999-12-09修回, http://www.100md.com