益脑胶囊对小鼠免疫功能的影响和抗氧化作用的研究
作者：丁伯平 王国平 徐朝阳 王娟 陈国祥 杨解人
单位：皖南医学院1药理教研室、2教务处，芜湖 241001
关键词：抗氧化药；免疫
安徽医科大学学报000112 摘要 目的 研究益脑胶囊(Yinao capsule, YNC)对小鼠免疫功能的影响和抗氧化作用。方法 测定绵羊红细胞致敏的血清溶血素含量与胸腺、脾脏重量来分析其免疫作用；用邻苯三酚自氧化法、硫代巴比妥酸(TBA)分光光度法测定小鼠心、肝、肾、脑组织中SOD活性、MDA含量，用二硫代双硝基苯甲酸法(DTNB)测定小鼠全血GSH-Px活性。结果 YNC 3.6、1.2、0.4 g.kg-1能显著增加小鼠胸腺、脾脏重量和血清溶血素抗体含量；YNC 3.6、1.2、 0.4 g.kg-1能显著提高脑、肾、心、肝组织中SOD活性，并降低其MDA含量，提高全血GSH-Px活力。结论 提示YNC呈剂量依赖性对小鼠免疫增强与组织抗氧化作用。
, http://www.100md.com
中图分类号 R392； R979.9
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)01-0035-03
Effect of Yinao capsule (YNC) on immune function
and anti-oxidation in mice
Ding Boping, Wang Guoping, Xu Zhaoyang et al
(Dept of Pharmacology, Wannan Medical College, Wuhu 241001)
Abstract Objective To study the action of YNC on immune function and anti-oxidation in mice. Methods The immunization of YNC was proved by content of serum hemolysin against sheep red blood cell (SRBC) and the weight of spleen and thymus. The content of superoxide di,utase (SOD) and malondialdehyde (MDA) in heart, liver, brain and kidney of mice were measured by using pyrogallol autoxidation and thiobarbituric acid (TBA) method respectively. The glutathione peroxidase (GSH-Px) activity of whole blood was assayed with DTNB method. Results YNC (3.6，1.2， 0.4 g.kg-1) significantly increased the weight of spleen and thymus. higher SOD activity in brain, heart, liver and kidney, lower MDA contents in all tissues increase the GSH-Px activity of whole blood in mice. Conclusion YNC (3.6，1.2，0.4 g.kg-1) has a dose-dependent immunoenhancement and increase the anti-oxidative action in tissues of mice.
, 百拇医药
MeSH anti-oxidation drugs; immune
益脑胶囊(Yinao capsule, YNC)系利用现代化生化技术提取肉苁蓉中有效成分肉苁蓉总甙，再与龟甲胶、五味子、远志、党参、银杏叶等生药中有效成分组成，具有补养心肾、抗衰老等作用，本实验研究YNC对小鼠免疫功能的影响与心、肝、肾、脑组织的抗氧化作用。
1 材料
1.1 药品与试剂 YNC(每粒0.3 g，含生药2 g)，由芜湖第二制药厂提供(批号980731)；安神补脑液，延边敖东制药厂生产(批号97080723)；邻苯三酚(Pyrogallol)，广州化学试剂厂生产；硫代巴比妥酸(TBA)上海试剂二厂生产；二硫代双硝基苯甲酸(DTNB)为Fluka产品；绵羊红细胞(SRBC)，购自江苏省卫生防疫站。
1.2 动物 昆明种小鼠，体重18～22 g，♀♂各半，购自南京医科大学实验动物中心(苏动质97001)。
, 百拇医药
1.3 主要仪器 722S分光光度计(上海分析仪器总厂制造)，20PR-5型高速冷冻离心机(日立公司)
2 方法与结果
2.1 YNC对小鼠免疫功能的影响
2.1.1 YNC对小鼠免疫器官重量的影响 小鼠随机分为5组(n=10)，分组用药见表1。连续给药7天，末次给药后24 h，放血处死小鼠，称量体重及胸腺、脾脏重量，并计算胸腺、脾脏指数〔1〕，结果表明YNC呈剂量依赖性增加小鼠胸腺和脾脏重量(表1)。
表1 YNC对胸腺与脾脏重量的影响(n=10，
±s) 组别
剂量(g.kg-1)
, 百拇医药
脾脏指数
(mg.kg-1)
胸腺指数
(mg.kg-1)
NS组
—
4.56±0.73
2.95±0.68
YNC
3.6
6.48±0.92**#
, 百拇医药
4.87±1.05**##
YNC
1.2
5.76±0.97**
4.29±0.78**
YNC
0.4
5.24±0.69*
3.87±1.01*
安神补脑液
1.2
, 百拇医药
5.52±0.98*
3.94±0.87*
与NS组比较，*P<0.05，**P<0.01；与安神补脑液比较，#P<0.05，##P<0.01
2.1.2 YNC对小鼠血清溶血素抗体含量的影响 小鼠随机分为5组(n=10)，分组及用药见表2，连续给药4天后，每鼠ip 20% SRBC混悬液0.2 ml致敏，致敏6天后，摘眼球取血按文献〔2〕方法测定血清溶血素含量。半数溶血值用HC50。
HC50=(样品吸收度值)/(羊红细胞半数溶血时吸收度值)×稀释倍数
, 百拇医药 结果表明：YNC呈剂量依赖性增加血清溶血素含量(表2)。
表2 YNC对小鼠血清溶血素含量的影响(n=10，±s) 组别
剂量
(g.kg-1)
HC50
NS组
—
116.7±43.5
YNC
3.6
, http://www.100md.com
196.6±51.1**#
YNC
1.2
179.3±50,4**
YNC
0.4
158.7±41.2*
安神补脑液
1.2
154.4±35.7*
与NS组相比，*P<0.05，**P<0.01；与安神补脑液相比，#P<0.05
, 百拇医药
2.2 YNC对小鼠的抗氧化作用
2.2.1 YNC对小鼠组织中SOD活性及MDA含量的影响 小鼠随机分为5组(n=10)，分组及用药见表3，连续用药28天，末次给药后2 h，脱臼处死小鼠，立即取出心、肾、肝、脑组织，用冷冻NS冲洗，组织称重，研磨制备组织匀浆，3000 r.min-1离心30 min，取其上清液备测，用邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性〔2〕，用TBA分光光度法〔3〕测定脂质过氧化物丙二醛(MDA)值。结果表明YNC 3.6、1.2 g.kg-1组能提高心、肾、肝、脑组织中SOD活性，并降低MDA含量，YNC 0.4 g.kg-1组仅对肾组织SOD活性有提高及明显降低脑组织MDA。见表3。
表3 YNC对小鼠心、肾、肝、脑组织SOD活性及MDA含量的影响(n=10,±s) 组别
, http://www.100md.com
剂量(g.
kg-1)
心
肾
肝
脑
SOD
(103 U.g-1)
MDA
(μmol.g-1)
SOD
, 百拇医药
(103 U.g-1)
MDA
(μmol.g-1)
SOD
(103 U.g-1)
MDA
(μmol.g-1)
SOD
(103 U.g-1)
, 百拇医药
MDA
(μmol.g-1)
NS组
—
7.21±1.50
0.67±0.12
10.23±0.72
0.49±0.08
12.55±1.42
0.51±0.08
6.26±1.35
, 百拇医药 0.38±0.04
YNC
3.6
9.15±1.41**
0.47±0.09**#
12.51±0.79**
##
0.30±0.08**
#
14.92±1.50**
0.39±0.06**
, 百拇医药
9.29±1.57**
#
0.26±0.06**
#
YNC
1.2
8.76±1.32**
0.53±0.13*
12.06±0.98**
0.34±0.11**
, 百拇医药 14.08±1.35*
0.42±0.06**
8.47±1.51**
0.29±0.06**
YNC
0.4
7.99±1.46
0.60±0.12
11.39±1.15*
0.39±0.13
13.67±1.38
, 百拇医药
0.44±0.09
7.56±1.55
0.32±0.05**
安神补脑液
1.2
8.57±1.51
0.58±0.13
11.22±1.02*
0.40±0.12
13.80±1.46
0.43±0.08*
, 百拇医药
7.78±1.60*
0.32±0.06*
与NS组相比，*P<0.05，**P<0.01；与安神补脑液相比，#P<0.05，##P<0.01
2.2.2 YNC对小鼠全血谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性的影响 小鼠随机分成5组(n=10)，分组及给药见表4，连续给药7天，末次给药后24 h，尾静脉取血10 μl，以DTNB直接法〔2〕测定GSH-Px。结果表明YNC 3.6、1.2 g.kg-1剂量组织明显增强小鼠全血GSH-Px的活力。见表4。
表4 YNC对小鼠全血GSH-Px活力的影响(n=10,±s) 组别
, 百拇医药
剂量
(g.kg-1)
GSH-Px
NS组
—
22.15±5.44
YNC
3.6
31.96±7.12**
YNC
1.2
27.69±6.23*##
, 百拇医药
YNC
0.4
25.61±6.07
安神补脑液
1.2
27.12±6.47
与NS组相比，*P<0.05，**P<0.01；与安神补脑液相比，#P<0.05，##P<0.01
2.3 统计方法 各测定结果，组间采用成组t检验〔4〕。
3 讨论
现代药理研究发现，许多疾病和人体的衰老与自由基引发的脂质过氧化反应及免疫功能低下有关〔5〕。目前大量实验和临床研究也表明〔6〕：多种具有免疫调节作用的补益类中药活性成分均具有明显的调节免疫功能和改善学习记忆功能缺陷的作用。而衰老被自由基学说解释为：随着年龄增长体内自由基的产生与消除失平衡，自由基消除酶SOD活性降低，生物膜发生脂质过氧化，过氧化代谢物MDA升高，破坏生物大分子的结构和功能，使体内主要脏器心、肝、肾、脑等受损，从而加速衰老。因此维持体内自由基的稳定和平衡、减少脂质过氧化对延缓衰老十分重要。目前的研究认为多数中药的抗衰老作用机制与其增强GSH-Px与SOD活性及抗氧化〔7〕有关，YNC主要成分肉苁蓉总甙具有明显抗氧化作用〔8〕，而银杏叶具有促进大脑循环代谢，改善记忆功能及抗氧化与增强免疫作用。本研究也发现，YNC能增加小鼠免疫器官重量，升高血清溶血素抗体含量，提高心、肝、肾、脑组织中SOD活性与降低MDA含量，增强全血GSH-Px的活力，提示YNC具有增强免疫与抗氧化作用，可能与其抗衰老促进大脑记忆机制有关。
, http://www.100md.com
基金项目：皖南医学院中青年科研启动基金(99KJ011)
作者简介：丁伯平，男，35岁，讲师
杨解人，女，43岁，教授
参考文献
1，陈，奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1993：920～962
2，陈，勤.抗衰老研究实验方法.北京：中国医药科技出版社，1996：344～466
3，向，荣，王鼎年.过氧化脂质硫代巴比妥酸分光光度法的改进.生物化学与生物物理进展，1990；17(3)：341～342，4，孙瑞元.定量药理学.北京：人民卫生出版社，1987：102
5，许士凯.抗衰老药物.北京：中国医药科技出版社，1994：569～578
6，魏小龙，张永样.自身免疫反应与中枢学习记忆功能障碍.中国药理学通报，1998；14(4)289～293
7，王晓东，赵军宁.中药抗氧化作用研究进展.中药药理与临床，1990；6(2)：41～43
8，王晓雯，李琳琳，木胡牙提等.肉苁蓉总甙对小鼠组织的抗氧化作用.中国中药杂志，1998；23(9)：554～555
1999-04-21收稿，1999-09-10修回, 百拇医药
单位：皖南医学院1药理教研室、2教务处，芜湖 241001
关键词：抗氧化药；免疫
安徽医科大学学报000112 摘要 目的 研究益脑胶囊(Yinao capsule, YNC)对小鼠免疫功能的影响和抗氧化作用。方法 测定绵羊红细胞致敏的血清溶血素含量与胸腺、脾脏重量来分析其免疫作用；用邻苯三酚自氧化法、硫代巴比妥酸(TBA)分光光度法测定小鼠心、肝、肾、脑组织中SOD活性、MDA含量，用二硫代双硝基苯甲酸法(DTNB)测定小鼠全血GSH-Px活性。结果 YNC 3.6、1.2、0.4 g.kg-1能显著增加小鼠胸腺、脾脏重量和血清溶血素抗体含量；YNC 3.6、1.2、 0.4 g.kg-1能显著提高脑、肾、心、肝组织中SOD活性，并降低其MDA含量，提高全血GSH-Px活力。结论 提示YNC呈剂量依赖性对小鼠免疫增强与组织抗氧化作用。
, http://www.100md.com
中图分类号 R392； R979.9
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)01-0035-03
Effect of Yinao capsule (YNC) on immune function
and anti-oxidation in mice
Ding Boping, Wang Guoping, Xu Zhaoyang et al
(Dept of Pharmacology, Wannan Medical College, Wuhu 241001)
Abstract Objective To study the action of YNC on immune function and anti-oxidation in mice. Methods The immunization of YNC was proved by content of serum hemolysin against sheep red blood cell (SRBC) and the weight of spleen and thymus. The content of superoxide di,utase (SOD) and malondialdehyde (MDA) in heart, liver, brain and kidney of mice were measured by using pyrogallol autoxidation and thiobarbituric acid (TBA) method respectively. The glutathione peroxidase (GSH-Px) activity of whole blood was assayed with DTNB method. Results YNC (3.6，1.2， 0.4 g.kg-1) significantly increased the weight of spleen and thymus. higher SOD activity in brain, heart, liver and kidney, lower MDA contents in all tissues increase the GSH-Px activity of whole blood in mice. Conclusion YNC (3.6，1.2，0.4 g.kg-1) has a dose-dependent immunoenhancement and increase the anti-oxidative action in tissues of mice.
, 百拇医药
MeSH anti-oxidation drugs; immune
益脑胶囊(Yinao capsule, YNC)系利用现代化生化技术提取肉苁蓉中有效成分肉苁蓉总甙，再与龟甲胶、五味子、远志、党参、银杏叶等生药中有效成分组成，具有补养心肾、抗衰老等作用，本实验研究YNC对小鼠免疫功能的影响与心、肝、肾、脑组织的抗氧化作用。
1 材料
1.1 药品与试剂 YNC(每粒0.3 g，含生药2 g)，由芜湖第二制药厂提供(批号980731)；安神补脑液，延边敖东制药厂生产(批号97080723)；邻苯三酚(Pyrogallol)，广州化学试剂厂生产；硫代巴比妥酸(TBA)上海试剂二厂生产；二硫代双硝基苯甲酸(DTNB)为Fluka产品；绵羊红细胞(SRBC)，购自江苏省卫生防疫站。
1.2 动物 昆明种小鼠，体重18～22 g，♀♂各半，购自南京医科大学实验动物中心(苏动质97001)。
, 百拇医药
1.3 主要仪器 722S分光光度计(上海分析仪器总厂制造)，20PR-5型高速冷冻离心机(日立公司)
2 方法与结果
2.1 YNC对小鼠免疫功能的影响
2.1.1 YNC对小鼠免疫器官重量的影响 小鼠随机分为5组(n=10)，分组用药见表1。连续给药7天，末次给药后24 h，放血处死小鼠，称量体重及胸腺、脾脏重量，并计算胸腺、脾脏指数〔1〕，结果表明YNC呈剂量依赖性增加小鼠胸腺和脾脏重量(表1)。
表1 YNC对胸腺与脾脏重量的影响(n=10，
±s) 组别剂量(g.kg-1)
, 百拇医药
脾脏指数
(mg.kg-1)
胸腺指数
(mg.kg-1)
NS组
—
4.56±0.73
2.95±0.68
YNC
3.6
6.48±0.92**#
, 百拇医药
4.87±1.05**##
YNC
1.2
5.76±0.97**
4.29±0.78**
YNC
0.4
5.24±0.69*
3.87±1.01*
安神补脑液
1.2
, 百拇医药
5.52±0.98*
3.94±0.87*
与NS组比较，*P<0.05，**P<0.01；与安神补脑液比较，#P<0.05，##P<0.01
2.1.2 YNC对小鼠血清溶血素抗体含量的影响 小鼠随机分为5组(n=10)，分组及用药见表2，连续给药4天后，每鼠ip 20% SRBC混悬液0.2 ml致敏，致敏6天后，摘眼球取血按文献〔2〕方法测定血清溶血素含量。半数溶血值用HC50。
HC50=(样品吸收度值)/(羊红细胞半数溶血时吸收度值)×稀释倍数
, 百拇医药 结果表明：YNC呈剂量依赖性增加血清溶血素含量(表2)。
表2 YNC对小鼠血清溶血素含量的影响(n=10，
±s) 组别剂量
(g.kg-1)
HC50
NS组
—
116.7±43.5
YNC
3.6
, http://www.100md.com
196.6±51.1**#
YNC
1.2
179.3±50,4**
YNC
0.4
158.7±41.2*
安神补脑液
1.2
154.4±35.7*
与NS组相比，*P<0.05，**P<0.01；与安神补脑液相比，#P<0.05
, 百拇医药
2.2 YNC对小鼠的抗氧化作用
2.2.1 YNC对小鼠组织中SOD活性及MDA含量的影响 小鼠随机分为5组(n=10)，分组及用药见表3，连续用药28天，末次给药后2 h，脱臼处死小鼠，立即取出心、肾、肝、脑组织，用冷冻NS冲洗，组织称重，研磨制备组织匀浆，3000 r.min-1离心30 min，取其上清液备测，用邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性〔2〕，用TBA分光光度法〔3〕测定脂质过氧化物丙二醛(MDA)值。结果表明YNC 3.6、1.2 g.kg-1组能提高心、肾、肝、脑组织中SOD活性，并降低MDA含量，YNC 0.4 g.kg-1组仅对肾组织SOD活性有提高及明显降低脑组织MDA。见表3。
表3 YNC对小鼠心、肾、肝、脑组织SOD活性及MDA含量的影响(n=10,
±s) 组别, http://www.100md.com
剂量(g.
kg-1)
心
肾
肝
脑
SOD
(103 U.g-1)
MDA
(μmol.g-1)
SOD
, 百拇医药
(103 U.g-1)
MDA
(μmol.g-1)
SOD
(103 U.g-1)
MDA
(μmol.g-1)
SOD
(103 U.g-1)
, 百拇医药
MDA
(μmol.g-1)
NS组
—
7.21±1.50
0.67±0.12
10.23±0.72
0.49±0.08
12.55±1.42
0.51±0.08
6.26±1.35
, 百拇医药 0.38±0.04
YNC
3.6
9.15±1.41**
0.47±0.09**#
12.51±0.79**
##
0.30±0.08**
#
14.92±1.50**
0.39±0.06**
, 百拇医药
9.29±1.57**
#
0.26±0.06**
#
YNC
1.2
8.76±1.32**
0.53±0.13*
12.06±0.98**
0.34±0.11**
, 百拇医药 14.08±1.35*
0.42±0.06**
8.47±1.51**
0.29±0.06**
YNC
0.4
7.99±1.46
0.60±0.12
11.39±1.15*
0.39±0.13
13.67±1.38
, 百拇医药
0.44±0.09
7.56±1.55
0.32±0.05**
安神补脑液
1.2
8.57±1.51
0.58±0.13
11.22±1.02*
0.40±0.12
13.80±1.46
0.43±0.08*
, 百拇医药
7.78±1.60*
0.32±0.06*
与NS组相比，*P<0.05，**P<0.01；与安神补脑液相比，#P<0.05，##P<0.01
2.2.2 YNC对小鼠全血谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性的影响 小鼠随机分成5组(n=10)，分组及给药见表4，连续给药7天，末次给药后24 h，尾静脉取血10 μl，以DTNB直接法〔2〕测定GSH-Px。结果表明YNC 3.6、1.2 g.kg-1剂量组织明显增强小鼠全血GSH-Px的活力。见表4。
表4 YNC对小鼠全血GSH-Px活力的影响(n=10,
±s) 组别, 百拇医药
剂量
(g.kg-1)
GSH-Px
NS组
—
22.15±5.44
YNC
3.6
31.96±7.12**
YNC
1.2
27.69±6.23*##
, 百拇医药
YNC
0.4
25.61±6.07
安神补脑液
1.2
27.12±6.47
与NS组相比，*P<0.05，**P<0.01；与安神补脑液相比，#P<0.05，##P<0.01
2.3 统计方法 各测定结果，组间采用成组t检验〔4〕。
3 讨论
现代药理研究发现，许多疾病和人体的衰老与自由基引发的脂质过氧化反应及免疫功能低下有关〔5〕。目前大量实验和临床研究也表明〔6〕：多种具有免疫调节作用的补益类中药活性成分均具有明显的调节免疫功能和改善学习记忆功能缺陷的作用。而衰老被自由基学说解释为：随着年龄增长体内自由基的产生与消除失平衡，自由基消除酶SOD活性降低，生物膜发生脂质过氧化，过氧化代谢物MDA升高，破坏生物大分子的结构和功能，使体内主要脏器心、肝、肾、脑等受损，从而加速衰老。因此维持体内自由基的稳定和平衡、减少脂质过氧化对延缓衰老十分重要。目前的研究认为多数中药的抗衰老作用机制与其增强GSH-Px与SOD活性及抗氧化〔7〕有关，YNC主要成分肉苁蓉总甙具有明显抗氧化作用〔8〕，而银杏叶具有促进大脑循环代谢，改善记忆功能及抗氧化与增强免疫作用。本研究也发现，YNC能增加小鼠免疫器官重量，升高血清溶血素抗体含量，提高心、肝、肾、脑组织中SOD活性与降低MDA含量，增强全血GSH-Px的活力，提示YNC具有增强免疫与抗氧化作用，可能与其抗衰老促进大脑记忆机制有关。
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基金项目：皖南医学院中青年科研启动基金(99KJ011)
作者简介：丁伯平，男，35岁，讲师
杨解人，女，43岁，教授
参考文献
1，陈，奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1993：920～962
2，陈，勤.抗衰老研究实验方法.北京：中国医药科技出版社，1996：344～466
3，向，荣，王鼎年.过氧化脂质硫代巴比妥酸分光光度法的改进.生物化学与生物物理进展，1990；17(3)：341～342，4，孙瑞元.定量药理学.北京：人民卫生出版社，1987：102
5，许士凯.抗衰老药物.北京：中国医药科技出版社，1994：569～578
6，魏小龙，张永样.自身免疫反应与中枢学习记忆功能障碍.中国药理学通报，1998；14(4)289～293
7，王晓东，赵军宁.中药抗氧化作用研究进展.中药药理与临床，1990；6(2)：41～43
8，王晓雯，李琳琳，木胡牙提等.肉苁蓉总甙对小鼠组织的抗氧化作用.中国中药杂志，1998；23(9)：554～555
1999-04-21收稿，1999-09-10修回, 百拇医药