非何杰金淋巴瘤银染核仁组成区研究
作者：汪惠园 刘晓颖 勇威本 初雪梅 周经芝
单位：汪惠园 刘晓颖(安徽医科大学第一附属医院血液内科，合肥 230022)；勇威本 初雪梅(北京医科大学临床肿瘤学院内科，北京 100036)；周经芝(安徽省长丰县人民医院， 231100)
关键词：淋巴瘤；非霍奇金；诊断；核仁组成区
安徽医科大学学报000406 摘要 目的 探讨应用银染核仁组成区(AgNORs)计数定量作为非何杰金淋巴瘤(NHL)鉴别诊断、病理分型、分级及预后指标的可能性。方法 用AgNORs计数定量方法分析68例NHL肿瘤组织的变化。结果 AgNORs计数低度NHL与中、高度NHL间差异有显著性(P<0.05)；但良性淋巴组织病变组与低度恶性NHL组间差异无显著性(P>0.05)，AgNORs均数值≤2.08组与>2.08组2组间生存曲线差异无显著性。结论 AgNORs计数有助于NHL的恶性度分级，无助于良恶性间鉴别诊断。以AgNORs计数均数2.08为界值分组，≤2.08组与>2.08组二组预后无明显相关性。
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中图分类号 R733.404
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)04-0264-03
Silver-binding nucleolar organizer regions (AgNORs) research
in non Hodgkin lymphoma
Wang Huiyuan, Liu Xiaoying, Yong Weiben et al
(Dept of Hematology, The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Hefei 230022)
Abstract Objective To study a silver staining technique, in which nucleolar organizer region associatedproteins was used as an objective index for non Hodgkin lymphoma(NHL) differential diagnosis, pathological type, malignant grade and prognosis. Methods AgNORs were studied in cytological smears of 68 NHL and 28 benign lymph lesions. Results AgNORs were enumerated and observed. A significant difference was found between the numbers of low grade NHL and intermediate grade, high grade NHL, but not between benign lesions and low grade NHL. The results also showed that there was no significant difference in survival between the patients having AgNORs value below 2.08 and over 2.08. Conclusion AgNORs can be used as an index of malignant grade in NHL. But it can not serve as an index of prognosis. AgNORs counts can not distinguish benign lesions from low grade NHL.
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MeSH lymphoma, non Hodgkin/diagnosis; nucleolus organizer region
近年来国内外开始重视研究银染核仁组成区(AgNORs)定量检测对NHL鉴别诊断、病理分型、恶性度分级以及预后的关系〔1〕。初步结果显示AgNORs对NHL临床诊断、分型、分级及预后可能有一定实用价值，但迄今尚未得出明确结论。国内外报道尚少，特别是有关对NHL预后的意义尚缺乏了解。本研究通过对NHL患者的肿瘤组织进行AgNORs观察计数，结合临床资料进行初步分析，探讨其临床应用价值。
1 材料和方法
1.1 标本采集 采用肿瘤组织针吸涂片标本。标本来自我科1994年12月～1998年2月的非何杰金淋巴瘤患者共68例。全部病例均经病理学确诊，其中男性46例，女性22例。年龄分布13～78岁，中位数51岁。临床分期(Ann Arbor分期)〔2〕，Ⅰ期0例，Ⅱ期5例，Ⅲ期31例，Ⅳ期31例，1例不能分期。按国际工作分类〔2〕，低度恶性组12例，中度恶性组40例，高度恶性组16例。T细胞型13例，B细胞型55例。另外良性淋巴组织病变标本28例，其中淋巴结炎症7例，淋巴结核4例，扁桃腺炎4例，猫爪病淋巴结炎1例，淋巴结不典型增生12例。
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1.2 试剂和方法 涂片用95%乙醇∶乙醚(1∶1内加5滴冰醋酸)固定液固定20 min，去离子水充分洗涤，然后用银胶染色液(1份2 g明胶+0.01 g甲酸100 ml与2份0.5 AgNORs充分混匀)、在室温暗盒中染色30 min。洗涤，自然干燥后经二甲苯透明树胶封片，油镜下观察200个淋巴瘤细胞(良性病变计数淋巴细胞)核内AgNORs颗粒总数，计算每个细胞核的颗粒数平均值。颗粒形态分三型，Ⅰ型：颗粒规则，近园形，1～3个大颗粒，Ⅱ型：多数散在细小颗粒，Ⅲ型：具有成簇分布多个细小颗粒。
1.3 统计学方法 疗效及生存期标准按WHO标准，生存期统计采用Kaplan-Meier方法，显著性检验用Logrank方法。各组AgNORs颗粒计数显著性检验采用两两间多重比较S检验法。
2 结果
淋巴结良性病变组和非何杰金淋巴瘤各组AgNORs颗粒如表1所示，良性病变组与低度NHL组间差异无显著性(P>0.05)，良性病变组与中度及高度NHL组间差异有高度显著性(P<0.01)，低度NHL组与中度或高度NHL组间差异有显著性(P<0.05)，中度NHL与高度NHL组间差异无显著性(P>0.05)。T细胞NHL组与B细胞NHL组AgNORs颗粒计数差异无显著性(P>0.05)，NHLⅡ、Ⅲ、Ⅳ期三组病例经t检验差异均无显著性(P>0.05)。
, 百拇医药
AgNORs颗粒定量计数与生存期的关系：低度NHL组2年生存率为100%，中度NHL组为74.9%，高度NHL组为16.9%。低度组与中度组生存曲线差异无显著性(P>0.05)，但与中度加高度组差异有显著性(P<0.05)，低度与高度组间差异有显著性，中度与高度组间差异有显著性(P<0.05)。AgNORs颗粒均数以2.08为界值，计数≤2.08组2年生存率84.4%，计数>2.08组2年生存率62.0%，2组生存曲线差异无显著性(P>0.05)。
按临床分期比较，Ⅲ期病例中AgNORs≤2.08组2年生存率64.6%，>2.08组75.3%，2组间差异无显著性(P>0.05)，Ⅳ期病例中≤2.08组2年生存率80.2%，>2.08组2年生存率47.1%，2组间差异有显著性(P<0.01)。
表1 AgNORs颗粒定量计数与病理类型(
±s) 分组
, 百拇医药
n
AgNORs
良性病变
28
2.10±0.65**
低度NHL
12
2.08±0.79*
中度NHL
40
3.26±1.43
高度NHL
, 百拇医药
16
3.47±1.46
T细胞型
13
2.79±1.22
B细胞型
55
3.19±1.50
与中高度相比：*P<0.05，**P<0.013 讨论
细胞核的核仁由某些染色体特殊部位的核仁组成区产生，AgNOR的数量和形态可能反映细胞的增殖活跃程度，因此目前开始重视研究AgNORs定量在肿瘤诊断、分级及预后的应用价值。本研究表明良性病变组或低度NHL与中度或高度NHL组差异有显著性。说明AgNOR颗粒计数有助于良性淋巴组织病变与中、高度NHL鉴别以及低度NHL与中高度NHL的恶性度分级。这一结果与多数文献报道是一致的〔3〕。但是本研究表明AgNORs颗粒计数对良性淋巴组织病变与低度NHL两组间的AgNORs颗粒计数及颗粒形态分布差异均无显著性。这可能因为低度恶性NHL的细胞分化良好，细胞分裂增殖不活跃，难以与良性淋巴结炎症或反应性增生区别。Crocker等同时应用流式细胞仪DNA检测观察到NHL细胞AgNORs颗粒均数和S期细胞的百分比间有很好的直线关系。提示AgNORs的颗粒数可能与细胞分裂比率有关〔4〕，与部分学者认为AgNORs定量可作为良恶性淋巴组织病变鉴别的结果不同〔5，6〕。本研究AgNORs均数≤2.08组与超过2.08组，生存曲线除Ⅳ期病例外差异均无显著性。因此，尚不能证明AgNORs定量与NHL预后的相关性。我们推测AgNORs增多与细胞分裂增殖活跃有关，而NHL属化疗敏感肿瘤，瘤细胞增殖比愈高化疗疗效愈好，这可能明显影响预后。因此患者在治疗影响下，AgNORs定量不能独立反应预后。
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作者简介：汪惠园，男，34岁，主治医师，硕士研究生；
勇威本，男，62岁，教授，博士生导师
参考文献
1，王瑞年. Ag-NOR肿瘤研究的一项新指标. 国外医学肿瘤学分册， 1989；10(1)：22～25
2，陈灏珠主编. 内科学. 第4版， 北京：人民卫生出版社， 1996：588～590
3，王蘅文主编. 实验肿瘤学基础. 北京：人民卫生出版社， 1992：192～194
4，Crocker J, Macartney JC, Smith PJ et al. Correlation between DNA flow cytometric and nucleolar organizer region data in non Hodgkins lymphomas. J Pathol, 1988;154(2):151～156
, 百拇医药
5，王艳华. 乳腺疾患中核仁组成区相关蛋白计量与类固醇激素受体表达的关系. 中华病理学杂志， 1992；21(1)：54～55
6，黄应桂. 大肠上皮性肿瘤核仁组成区嗜银相关蛋白的定量观察. 中华病理学杂志， 1992；21(4)：217
7，Giri DD, Nottingham JF, Lawry J et al. Silver binding nucleolar organizer regions(AgNORs) in benign and malignant breast lesions: correlation with pliody and growth phase by DNA flow cytometry. J Pathol, 1989;157(4):307～313
8，Korkolopoulou P, Angelopoulou MK, Kontopidou F et al. Prognostic implications of proliferating cell nuclear antigen (PCNA), AgNORs and p53 in non-Hodgkin's lymphomas. Leuk Lymphoma, 1998;30(5～6)：625～636
2000-03-20收稿，2000-04-25修回, http://www.100md.com
单位：汪惠园 刘晓颖(安徽医科大学第一附属医院血液内科，合肥 230022)；勇威本 初雪梅(北京医科大学临床肿瘤学院内科，北京 100036)；周经芝(安徽省长丰县人民医院， 231100)
关键词：淋巴瘤；非霍奇金；诊断；核仁组成区
安徽医科大学学报000406 摘要 目的 探讨应用银染核仁组成区(AgNORs)计数定量作为非何杰金淋巴瘤(NHL)鉴别诊断、病理分型、分级及预后指标的可能性。方法 用AgNORs计数定量方法分析68例NHL肿瘤组织的变化。结果 AgNORs计数低度NHL与中、高度NHL间差异有显著性(P<0.05)；但良性淋巴组织病变组与低度恶性NHL组间差异无显著性(P>0.05)，AgNORs均数值≤2.08组与>2.08组2组间生存曲线差异无显著性。结论 AgNORs计数有助于NHL的恶性度分级，无助于良恶性间鉴别诊断。以AgNORs计数均数2.08为界值分组，≤2.08组与>2.08组二组预后无明显相关性。
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中图分类号 R733.404
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)04-0264-03
Silver-binding nucleolar organizer regions (AgNORs) research
in non Hodgkin lymphoma
Wang Huiyuan, Liu Xiaoying, Yong Weiben et al
(Dept of Hematology, The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Hefei 230022)
Abstract Objective To study a silver staining technique, in which nucleolar organizer region associatedproteins was used as an objective index for non Hodgkin lymphoma(NHL) differential diagnosis, pathological type, malignant grade and prognosis. Methods AgNORs were studied in cytological smears of 68 NHL and 28 benign lymph lesions. Results AgNORs were enumerated and observed. A significant difference was found between the numbers of low grade NHL and intermediate grade, high grade NHL, but not between benign lesions and low grade NHL. The results also showed that there was no significant difference in survival between the patients having AgNORs value below 2.08 and over 2.08. Conclusion AgNORs can be used as an index of malignant grade in NHL. But it can not serve as an index of prognosis. AgNORs counts can not distinguish benign lesions from low grade NHL.
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MeSH lymphoma, non Hodgkin/diagnosis; nucleolus organizer region
近年来国内外开始重视研究银染核仁组成区(AgNORs)定量检测对NHL鉴别诊断、病理分型、恶性度分级以及预后的关系〔1〕。初步结果显示AgNORs对NHL临床诊断、分型、分级及预后可能有一定实用价值，但迄今尚未得出明确结论。国内外报道尚少，特别是有关对NHL预后的意义尚缺乏了解。本研究通过对NHL患者的肿瘤组织进行AgNORs观察计数，结合临床资料进行初步分析，探讨其临床应用价值。
1 材料和方法
1.1 标本采集 采用肿瘤组织针吸涂片标本。标本来自我科1994年12月～1998年2月的非何杰金淋巴瘤患者共68例。全部病例均经病理学确诊，其中男性46例，女性22例。年龄分布13～78岁，中位数51岁。临床分期(Ann Arbor分期)〔2〕，Ⅰ期0例，Ⅱ期5例，Ⅲ期31例，Ⅳ期31例，1例不能分期。按国际工作分类〔2〕，低度恶性组12例，中度恶性组40例，高度恶性组16例。T细胞型13例，B细胞型55例。另外良性淋巴组织病变标本28例，其中淋巴结炎症7例，淋巴结核4例，扁桃腺炎4例，猫爪病淋巴结炎1例，淋巴结不典型增生12例。
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1.2 试剂和方法 涂片用95%乙醇∶乙醚(1∶1内加5滴冰醋酸)固定液固定20 min，去离子水充分洗涤，然后用银胶染色液(1份2 g明胶+0.01 g甲酸100 ml与2份0.5 AgNORs充分混匀)、在室温暗盒中染色30 min。洗涤，自然干燥后经二甲苯透明树胶封片，油镜下观察200个淋巴瘤细胞(良性病变计数淋巴细胞)核内AgNORs颗粒总数，计算每个细胞核的颗粒数平均值。颗粒形态分三型，Ⅰ型：颗粒规则，近园形，1～3个大颗粒，Ⅱ型：多数散在细小颗粒，Ⅲ型：具有成簇分布多个细小颗粒。
1.3 统计学方法 疗效及生存期标准按WHO标准，生存期统计采用Kaplan-Meier方法，显著性检验用Logrank方法。各组AgNORs颗粒计数显著性检验采用两两间多重比较S检验法。
2 结果
淋巴结良性病变组和非何杰金淋巴瘤各组AgNORs颗粒如表1所示，良性病变组与低度NHL组间差异无显著性(P>0.05)，良性病变组与中度及高度NHL组间差异有高度显著性(P<0.01)，低度NHL组与中度或高度NHL组间差异有显著性(P<0.05)，中度NHL与高度NHL组间差异无显著性(P>0.05)。T细胞NHL组与B细胞NHL组AgNORs颗粒计数差异无显著性(P>0.05)，NHLⅡ、Ⅲ、Ⅳ期三组病例经t检验差异均无显著性(P>0.05)。
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AgNORs颗粒定量计数与生存期的关系：低度NHL组2年生存率为100%，中度NHL组为74.9%，高度NHL组为16.9%。低度组与中度组生存曲线差异无显著性(P>0.05)，但与中度加高度组差异有显著性(P<0.05)，低度与高度组间差异有显著性，中度与高度组间差异有显著性(P<0.05)。AgNORs颗粒均数以2.08为界值，计数≤2.08组2年生存率84.4%，计数>2.08组2年生存率62.0%，2组生存曲线差异无显著性(P>0.05)。
按临床分期比较，Ⅲ期病例中AgNORs≤2.08组2年生存率64.6%，>2.08组75.3%，2组间差异无显著性(P>0.05)，Ⅳ期病例中≤2.08组2年生存率80.2%，>2.08组2年生存率47.1%，2组间差异有显著性(P<0.01)。
表1 AgNORs颗粒定量计数与病理类型(
±s) 分组, 百拇医药
n
AgNORs
良性病变
28
2.10±0.65**
低度NHL
12
2.08±0.79*
中度NHL
40
3.26±1.43
高度NHL
, 百拇医药
16
3.47±1.46
T细胞型
13
2.79±1.22
B细胞型
55
3.19±1.50
与中高度相比：*P<0.05，**P<0.013 讨论
细胞核的核仁由某些染色体特殊部位的核仁组成区产生，AgNOR的数量和形态可能反映细胞的增殖活跃程度，因此目前开始重视研究AgNORs定量在肿瘤诊断、分级及预后的应用价值。本研究表明良性病变组或低度NHL与中度或高度NHL组差异有显著性。说明AgNOR颗粒计数有助于良性淋巴组织病变与中、高度NHL鉴别以及低度NHL与中高度NHL的恶性度分级。这一结果与多数文献报道是一致的〔3〕。但是本研究表明AgNORs颗粒计数对良性淋巴组织病变与低度NHL两组间的AgNORs颗粒计数及颗粒形态分布差异均无显著性。这可能因为低度恶性NHL的细胞分化良好，细胞分裂增殖不活跃，难以与良性淋巴结炎症或反应性增生区别。Crocker等同时应用流式细胞仪DNA检测观察到NHL细胞AgNORs颗粒均数和S期细胞的百分比间有很好的直线关系。提示AgNORs的颗粒数可能与细胞分裂比率有关〔4〕，与部分学者认为AgNORs定量可作为良恶性淋巴组织病变鉴别的结果不同〔5，6〕。本研究AgNORs均数≤2.08组与超过2.08组，生存曲线除Ⅳ期病例外差异均无显著性。因此，尚不能证明AgNORs定量与NHL预后的相关性。我们推测AgNORs增多与细胞分裂增殖活跃有关，而NHL属化疗敏感肿瘤，瘤细胞增殖比愈高化疗疗效愈好，这可能明显影响预后。因此患者在治疗影响下，AgNORs定量不能独立反应预后。
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作者简介：汪惠园，男，34岁，主治医师，硕士研究生；
勇威本，男，62岁，教授，博士生导师
参考文献
1，王瑞年. Ag-NOR肿瘤研究的一项新指标. 国外医学肿瘤学分册， 1989；10(1)：22～25
2，陈灏珠主编. 内科学. 第4版， 北京：人民卫生出版社， 1996：588～590
3，王蘅文主编. 实验肿瘤学基础. 北京：人民卫生出版社， 1992：192～194
4，Crocker J, Macartney JC, Smith PJ et al. Correlation between DNA flow cytometric and nucleolar organizer region data in non Hodgkins lymphomas. J Pathol, 1988;154(2):151～156
, 百拇医药
5，王艳华. 乳腺疾患中核仁组成区相关蛋白计量与类固醇激素受体表达的关系. 中华病理学杂志， 1992；21(1)：54～55
6，黄应桂. 大肠上皮性肿瘤核仁组成区嗜银相关蛋白的定量观察. 中华病理学杂志， 1992；21(4)：217
7，Giri DD, Nottingham JF, Lawry J et al. Silver binding nucleolar organizer regions(AgNORs) in benign and malignant breast lesions: correlation with pliody and growth phase by DNA flow cytometry. J Pathol, 1989;157(4):307～313
8，Korkolopoulou P, Angelopoulou MK, Kontopidou F et al. Prognostic implications of proliferating cell nuclear antigen (PCNA), AgNORs and p53 in non-Hodgkin's lymphomas. Leuk Lymphoma, 1998;30(5～6)：625～636
2000-03-20收稿，2000-04-25修回, http://www.100md.com