微量元素测定对右归丸治疗家兔肾阳虚疗效的评价
作者:薛莎 汤学军 马威 马利 管竞环 吴文莉 曹阳 李均
单位:薛莎(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);汤学军(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);马威(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);马利(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);管竞环(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);吴文莉(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);曹阳(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);李均(武汉市中西医结合医院 汉口 430022)
关键词:右归丸;肾阳虚证动物模型;微量元素
湖北中医学院学报000108
摘要:使用右归丸治疗肾阳虚模型家兔,检测实验动物血中微量元素的代谢情况。结果发现:模型家兔血液微量元素发生了“平衡→失衡→再平衡”的动态变化过程。微量元素与生化指标一样,在动物体内的生物代谢过程中起着特定的作用,微量元素是正确评价病证转归和药物疗效的良好指标。从而证明了机体内血液微量元素在右归丸治疗家兔肾阳虚的过程中,有着一定的变化规律。
, 百拇医药
中图分类号:R256.5 文献标识码:A 文章编号:1008-987X(2000)01-0018-03
Evaluating Therapeutic Effect of Yougui Pill on Rabbit
with Kidney-yang Deficiency by Determining Trace Element
Xue Sha,Tang Xuejun,Ma Wei
Wuhan Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine(430022)
Abstract:To determine the variety trends and trace element in kidney-yang deficiency rabbit treated by yougui pill.
, 百拇医药
Methods:The rabbit models of kidney-yang deficiency were created by pouring hydroxyurea and treated by yougui pill.Before and after the experiments,the trace elements in blood were detected.
Results:The trace elements in rabbit blood come through balance-unbalance-rebalance state.Before experiment,the trace element in rabbit blood was balance;when animal model were created,the trace elements of them had lost balance;after treated by yougui pill,it retured to balance.
, 百拇医药
Conclusion:The trace element in blood can be a good index when we appreciated the trends of disease and effect of different drugs.
Key words:Yougui pill Trace element Animal model/Kidney-yang deficiency
有关研究指出,微量元素是中药的有效化学成分之一。为了能够评价中药有效成分在机体内的作用,笔者选择铜、铁、锰等八种微量元素及温补肾阳的右归丸来进行研究,通过观察机体内微量元素的动态变化,以证明中药在治疗过程中,微量元素起着特定的作用,是正确评价病证转归和药物疗效的重要衡量标准。
1 材料与方法
1.1 动物:日本种大耳白家兔,雄性,体重2000g左右,由武汉市生物制品研究所提供。
, http://www.100md.com
1.2 药物:
(1)右归丸组方:熟地24g,山药、菟丝子、枸杞、鹿角胶、杜仲各12g,山茱萸、当归各9g,肉桂、制附子各6g。药物基源由湖北中医学院中药系鉴定。
将上药(鹿角胶除外),经纯水漂洗后,放在干净玻璃烧杯中混匀,用纯水800ml浸渍1小时后加热,于100°C煎煮至500ml,过滤药渣后得滤液300ml。再将药渣加入400ml纯水继续煎煮至300ml,过滤药渣后得滤液200ml。合并两次煎煮液,将鹿角胶加热烊化后兑入煎煮液中,最后调至500ml。制备过程在本院微量元素研究室封闭式样本处理室完成。
(2)羟基脲片:500mg/片,由济南制药厂生产,批号:970109。
2.3 纯水
用上海亚荣生化仪器厂SZ-93自动双重纯水蒸馏器生产的实验用纯水,纯净聚乙烯塑料桶盛装,每次生产1周用量。
, 百拇医药
2.4 动物分组及处理
将家兔随机分为正常组和模型组。模型组用羟基脲造模,灌胃8天,剂量为500mg/kg/d[1]。从造模完成后的第1天开始,每天早晚2次用右归丸煎煮液灌胃模型家兔,连续8天。右归丸家兔用量换算公式如下:1500克家兔日服总量=人日服总量×兔与人体表面积比=500ml×0.07=35ml[2]。
实验家兔分别于适应性饲养1周、造模第9天、右归丸灌胃第9天,三次抽取股动脉血或耳缘动脉血,定量1ml置于加盖微量元素分析试管中,置冰箱保存。
2.5 微量元素检测
检测元素:锌(Zn)、铜(Cu)、铁(Fe)、锰(Mn)、锶(Sr)、钴(Co)、镍(Ni)、铬(Cr)。
样本于消化前一天用浓硝酸催化4小时,再置于控温电热板上消化。浓缩至1ml时,交替加入浓硝酸、双氧水,至液体呈清澈透明或淡黄色,量约0.5ml时取出。自然冷却后,用纯水稀释定容为5ml,混匀装入洁净小塑料试管内,加盖备检。
, http://www.100md.com
2.6 检测仪器及条件:
(1) JOBIN-YVON48(法国)ICP-AES光量计,ICP-AES法,单色仪,固定道,全息光栅2400条/mm,一级色散率倒数0.4nm/mm,HEP-1500型射频发生器1.5KW,入射功率1KW,反射功率小于5KW。冷却氩气流量12L/min,进样氩气压强165kPa,垂直观察位置钢管线圈上方16mm处,测量积分时间7~10秒,酸分解,计算机控制,多元素同时测定Zn、Cu、Ni、Co、Sr、Fe等元素。
(2) PERKIN-ELMER 3110(美国)原子吸收光谱仪,高温灰化,酸溶测定Cr、Mn等元素。
2.7 统计学处理 所有数据采用t检验、聚类分析(非线性映射)统计学方法处理。
2 结果
2.1 实验模型家兔血液微量元素含量检测结果
, http://www.100md.com
实验家兔造模及用药前后血液微量元素含量检测结果及相应百分位含量换算值见表1、表2,并根据元素百分位含量值绘制模型家兔实验前后的血液微量元素动态变化(图1)。
表1 实验家兔血液微量元素含量检测结果(±SD)单位:mg/L
Cu
Zn
Fe
Ni
造模前
0.81±0.18&
3.80±0.60
, http://www.100md.com
754.61±127.52
0.14±0.02&
造模后
0.61±0.22
3.37±0.52
570.73±93.54
0.80±0.01
用药后
0.76±0.16#
4.09±0.56#
708.06±90.28#
, 百拇医药
0.20±0.05#
Mn
Cr
Co
Sr
造模前
0.06±0.02&
1.03±0.03
0.11±0.01
0.12±0.02
造模后
0.03±0.01
, http://www.100md.com
0.63±0.01
0.08±0.01
0.03±0.01
用药后
0.10±0.03#
1.44±0.05#
0.18±0.03#
0.08±0.01
造模后与造模前比,P<0.05;#用药后与造模后比,P<0.05;&用药后与造模前比,P<0.05
图1 家兔模型实验前后微量元素变化示意图
, http://www.100md.com
表2 实验家兔血液微量元素百分位含量值
Cu
Zn
Ni
Co
造模前
0.69
0.53
0.34
0.45
造模后
0.38
0.45
, 百拇医药
0.25
0.42
用药后
0.58
0.67
0.66
0.63
Mn
Cr
Sr
Fe
造模前
0.41
, http://www.100md.com
0.40
0.53
0.63
造模后
0.28
0.32
0.40
0.37
用药后
0.65
0.64
0.49
0.57
, 百拇医药
2.1 实验前后微量元素t检验结果:
造模后全血铜、锌、铁元素含量较造模前显著降低(P<0.05);用药后全血铜、锌、铁、镍、锰、镉元素含量较造模后显著升高(P<0.05);造模前与用药后相比,铜元素显著降低(P<0.05);镍、锰、镉元素显著升高(P<0.05)。见表1。
2.3 实验前后微量元素聚类分析结果:
将造模前、造模后及用药后三组共32份元素样本数据依次编号,1~12号为造模前组、13~22号为造模后组、23~32号为用药组,运用非线性映射法[3,4],将他们投射至二维坐标图上,如图2所示,32个数据点大致可划分为三类:
第一类(与对照组相应):2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,14,17
第二类(与造模组对应):1,13,15,16,18,19,20,21,22
, 百拇医药
第三类(与用药组对应):23,24,25,26,27,28,29,30,31,32
图2 32个样本微量元素含量二维映射
图2中造模前组居右,造模后组位于左下,用药后组位于中上。除个别数据点外,以上三类数据点几乎与其实际分组完全吻合。造模后组在灌胃右归丸后,产生了向造模前组方向上的整体位移。这种位移趋向反映了造模及用药前后机体微量元素平衡水平的动态变化。
3 讨论
3.1 模型的复制情况
羟基脲是一种抗肿瘤药物,能抑制DNA还原酶活性而使DNA合成率下降,DNA合成的抑制导致体内蛋白质合成障碍。临床上肾阳虚病人一般有DNA合成率降低现象,并且羟基脲导致的肾阳虚模型形成的微量元素含量和分布的改变,与临床报道[5]肾阳虚病人的微量元素紊乱状况相似。从结果来看,模型动物出现体重减轻、少动、反应迟钝、皮温下降等形寒肢冷的阳虚表象,说明此模型是成功的。
, 百拇医药
3.2 实验过程中模型家兔微量元素动态变化规律
与前期基础实验比较,在肾阳虚模型家兔生化指标逐渐恶化的同时,全血中元素铜、锌、铁等含量较造模前相比显著降低(P<0.05)。经右归丸治疗后,症状得到缓解,在生化指标明显改善的同时,元素铜、锌、铁、锰、镍、镉等含量较用药前相比显著增高(P<0.05)。
微量元素聚类分析结果表明,家兔血液微量元素系统在实验过程中发生了整体位移,位移趋向与前期实验的生理、生化转归趋向一致。
以上结果说明,造模及用药前后模型家兔体内微量元素平衡系统,经历了平衡→失衡→再平衡的动态变化过程,造模所致的机体代谢紊乱在用药后得到调节改善。
本实验反映出的模型家兔血液微量元素动态变化规律,说明血液微量元素是正确评价病证转归的良好指标,也证明了在辨证治疗过程中,蕴涵着中药对机体微量元素平衡体系的整体调控作用。
, http://www.100md.com
中药有效成分中微量元素的作用不仅取决于该元素含量的多少,还取决于生物体对该元素的吸收和利用程度。本实验通过观察机体内微量元素平衡体系的动态变化,结合其它疗效指标(生理、生化、皮脂醇),揭示了中药疗效的内在机制。
薛莎,女,1960年生,副主任医师。
参考文献
1 陈小野.实用中医证候动物模型[M].北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社,1993:128
2 陈奇.中药药理实验方法[M].北京:人民卫生出版社,1994:206
3 钟杨.数理分类的方法与程序[M].武汉:武汉大学出版社,1990:35
4 张福良.聚类分析与中药质量研究[M].北京:人民卫生出版社,1994:189
5 管竞环,李恩宽主编.中医药理论量化与微量元素[M].武汉:湖北科技出版社,1997:106
(收稿日期:1999-12-06), 百拇医药
单位:薛莎(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);汤学军(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);马威(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);马利(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);管竞环(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);吴文莉(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);曹阳(武汉市中西医结合医院 汉口 430022);李均(武汉市中西医结合医院 汉口 430022)
关键词:右归丸;肾阳虚证动物模型;微量元素
湖北中医学院学报000108
摘要:使用右归丸治疗肾阳虚模型家兔,检测实验动物血中微量元素的代谢情况。结果发现:模型家兔血液微量元素发生了“平衡→失衡→再平衡”的动态变化过程。微量元素与生化指标一样,在动物体内的生物代谢过程中起着特定的作用,微量元素是正确评价病证转归和药物疗效的良好指标。从而证明了机体内血液微量元素在右归丸治疗家兔肾阳虚的过程中,有着一定的变化规律。
, 百拇医药
中图分类号:R256.5 文献标识码:A 文章编号:1008-987X(2000)01-0018-03
Evaluating Therapeutic Effect of Yougui Pill on Rabbit
with Kidney-yang Deficiency by Determining Trace Element
Xue Sha,Tang Xuejun,Ma Wei
Wuhan Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine(430022)
Abstract:To determine the variety trends and trace element in kidney-yang deficiency rabbit treated by yougui pill.
, 百拇医药
Methods:The rabbit models of kidney-yang deficiency were created by pouring hydroxyurea and treated by yougui pill.Before and after the experiments,the trace elements in blood were detected.
Results:The trace elements in rabbit blood come through balance-unbalance-rebalance state.Before experiment,the trace element in rabbit blood was balance;when animal model were created,the trace elements of them had lost balance;after treated by yougui pill,it retured to balance.
, 百拇医药
Conclusion:The trace element in blood can be a good index when we appreciated the trends of disease and effect of different drugs.
Key words:Yougui pill Trace element Animal model/Kidney-yang deficiency
有关研究指出,微量元素是中药的有效化学成分之一。为了能够评价中药有效成分在机体内的作用,笔者选择铜、铁、锰等八种微量元素及温补肾阳的右归丸来进行研究,通过观察机体内微量元素的动态变化,以证明中药在治疗过程中,微量元素起着特定的作用,是正确评价病证转归和药物疗效的重要衡量标准。
1 材料与方法
1.1 动物:日本种大耳白家兔,雄性,体重2000g左右,由武汉市生物制品研究所提供。
, http://www.100md.com
1.2 药物:
(1)右归丸组方:熟地24g,山药、菟丝子、枸杞、鹿角胶、杜仲各12g,山茱萸、当归各9g,肉桂、制附子各6g。药物基源由湖北中医学院中药系鉴定。
将上药(鹿角胶除外),经纯水漂洗后,放在干净玻璃烧杯中混匀,用纯水800ml浸渍1小时后加热,于100°C煎煮至500ml,过滤药渣后得滤液300ml。再将药渣加入400ml纯水继续煎煮至300ml,过滤药渣后得滤液200ml。合并两次煎煮液,将鹿角胶加热烊化后兑入煎煮液中,最后调至500ml。制备过程在本院微量元素研究室封闭式样本处理室完成。
(2)羟基脲片:500mg/片,由济南制药厂生产,批号:970109。
2.3 纯水
用上海亚荣生化仪器厂SZ-93自动双重纯水蒸馏器生产的实验用纯水,纯净聚乙烯塑料桶盛装,每次生产1周用量。
, 百拇医药
2.4 动物分组及处理
将家兔随机分为正常组和模型组。模型组用羟基脲造模,灌胃8天,剂量为500mg/kg/d[1]。从造模完成后的第1天开始,每天早晚2次用右归丸煎煮液灌胃模型家兔,连续8天。右归丸家兔用量换算公式如下:1500克家兔日服总量=人日服总量×兔与人体表面积比=500ml×0.07=35ml[2]。
实验家兔分别于适应性饲养1周、造模第9天、右归丸灌胃第9天,三次抽取股动脉血或耳缘动脉血,定量1ml置于加盖微量元素分析试管中,置冰箱保存。
2.5 微量元素检测
检测元素:锌(Zn)、铜(Cu)、铁(Fe)、锰(Mn)、锶(Sr)、钴(Co)、镍(Ni)、铬(Cr)。
样本于消化前一天用浓硝酸催化4小时,再置于控温电热板上消化。浓缩至1ml时,交替加入浓硝酸、双氧水,至液体呈清澈透明或淡黄色,量约0.5ml时取出。自然冷却后,用纯水稀释定容为5ml,混匀装入洁净小塑料试管内,加盖备检。
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2.6 检测仪器及条件:
(1) JOBIN-YVON48(法国)ICP-AES光量计,ICP-AES法,单色仪,固定道,全息光栅2400条/mm,一级色散率倒数0.4nm/mm,HEP-1500型射频发生器1.5KW,入射功率1KW,反射功率小于5KW。冷却氩气流量12L/min,进样氩气压强165kPa,垂直观察位置钢管线圈上方16mm处,测量积分时间7~10秒,酸分解,计算机控制,多元素同时测定Zn、Cu、Ni、Co、Sr、Fe等元素。
(2) PERKIN-ELMER 3110(美国)原子吸收光谱仪,高温灰化,酸溶测定Cr、Mn等元素。
2.7 统计学处理 所有数据采用t检验、聚类分析(非线性映射)统计学方法处理。
2 结果
2.1 实验模型家兔血液微量元素含量检测结果
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实验家兔造模及用药前后血液微量元素含量检测结果及相应百分位含量换算值见表1、表2,并根据元素百分位含量值绘制模型家兔实验前后的血液微量元素动态变化(图1)。
表1 实验家兔血液微量元素含量检测结果(±SD)单位:mg/L
Cu
Zn
Fe
Ni
造模前
0.81±0.18&
3.80±0.60
, http://www.100md.com
754.61±127.52
0.14±0.02&
造模后
0.61±0.22
3.37±0.52
570.73±93.54
0.80±0.01
用药后
0.76±0.16#
4.09±0.56#
708.06±90.28#
, 百拇医药
0.20±0.05#
Mn
Cr
Co
Sr
造模前
0.06±0.02&
1.03±0.03
0.11±0.01
0.12±0.02
造模后
0.03±0.01
, http://www.100md.com
0.63±0.01
0.08±0.01
0.03±0.01
用药后
0.10±0.03#
1.44±0.05#
0.18±0.03#
0.08±0.01
造模后与造模前比,P<0.05;#用药后与造模后比,P<0.05;&用药后与造模前比,P<0.05
图1 家兔模型实验前后微量元素变化示意图
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表2 实验家兔血液微量元素百分位含量值
Cu
Zn
Ni
Co
造模前
0.69
0.53
0.34
0.45
造模后
0.38
0.45
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0.25
0.42
用药后
0.58
0.67
0.66
0.63
Mn
Cr
Sr
Fe
造模前
0.41
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0.40
0.53
0.63
造模后
0.28
0.32
0.40
0.37
用药后
0.65
0.64
0.49
0.57
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2.1 实验前后微量元素t检验结果:
造模后全血铜、锌、铁元素含量较造模前显著降低(P<0.05);用药后全血铜、锌、铁、镍、锰、镉元素含量较造模后显著升高(P<0.05);造模前与用药后相比,铜元素显著降低(P<0.05);镍、锰、镉元素显著升高(P<0.05)。见表1。
2.3 实验前后微量元素聚类分析结果:
将造模前、造模后及用药后三组共32份元素样本数据依次编号,1~12号为造模前组、13~22号为造模后组、23~32号为用药组,运用非线性映射法[3,4],将他们投射至二维坐标图上,如图2所示,32个数据点大致可划分为三类:
第一类(与对照组相应):2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,14,17
第二类(与造模组对应):1,13,15,16,18,19,20,21,22
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第三类(与用药组对应):23,24,25,26,27,28,29,30,31,32
图2 32个样本微量元素含量二维映射
图2中造模前组居右,造模后组位于左下,用药后组位于中上。除个别数据点外,以上三类数据点几乎与其实际分组完全吻合。造模后组在灌胃右归丸后,产生了向造模前组方向上的整体位移。这种位移趋向反映了造模及用药前后机体微量元素平衡水平的动态变化。
3 讨论
3.1 模型的复制情况
羟基脲是一种抗肿瘤药物,能抑制DNA还原酶活性而使DNA合成率下降,DNA合成的抑制导致体内蛋白质合成障碍。临床上肾阳虚病人一般有DNA合成率降低现象,并且羟基脲导致的肾阳虚模型形成的微量元素含量和分布的改变,与临床报道[5]肾阳虚病人的微量元素紊乱状况相似。从结果来看,模型动物出现体重减轻、少动、反应迟钝、皮温下降等形寒肢冷的阳虚表象,说明此模型是成功的。
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3.2 实验过程中模型家兔微量元素动态变化规律
与前期基础实验比较,在肾阳虚模型家兔生化指标逐渐恶化的同时,全血中元素铜、锌、铁等含量较造模前相比显著降低(P<0.05)。经右归丸治疗后,症状得到缓解,在生化指标明显改善的同时,元素铜、锌、铁、锰、镍、镉等含量较用药前相比显著增高(P<0.05)。
微量元素聚类分析结果表明,家兔血液微量元素系统在实验过程中发生了整体位移,位移趋向与前期实验的生理、生化转归趋向一致。
以上结果说明,造模及用药前后模型家兔体内微量元素平衡系统,经历了平衡→失衡→再平衡的动态变化过程,造模所致的机体代谢紊乱在用药后得到调节改善。
本实验反映出的模型家兔血液微量元素动态变化规律,说明血液微量元素是正确评价病证转归的良好指标,也证明了在辨证治疗过程中,蕴涵着中药对机体微量元素平衡体系的整体调控作用。
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中药有效成分中微量元素的作用不仅取决于该元素含量的多少,还取决于生物体对该元素的吸收和利用程度。本实验通过观察机体内微量元素平衡体系的动态变化,结合其它疗效指标(生理、生化、皮脂醇),揭示了中药疗效的内在机制。
薛莎,女,1960年生,副主任医师。
参考文献
1 陈小野.实用中医证候动物模型[M].北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社,1993:128
2 陈奇.中药药理实验方法[M].北京:人民卫生出版社,1994:206
3 钟杨.数理分类的方法与程序[M].武汉:武汉大学出版社,1990:35
4 张福良.聚类分析与中药质量研究[M].北京:人民卫生出版社,1994:189
5 管竞环,李恩宽主编.中医药理论量化与微量元素[M].武汉:湖北科技出版社,1997:106
(收稿日期:1999-12-06), 百拇医药