安体舒通对慢性低氧高二氧化碳大鼠右心室肌胶原的作用
作者：郑绿珍 龚永生 陈彦凡 胡良冈 范小芳 蒋仲荪 黄虹
单位：郑绿珍 龚永生 陈彦凡 胡良冈 范小芳 蒋仲荪(温州医学院 肺心病研究室，浙江 温州 325027)；黄虹(温州医学院附属第二医院 内科，浙江 温州 325027)
关键词：低氧，慢性；胶原；醛固酮；安体舒通
温州医学院学报000206 [摘 要] 目的:观察安体舒通对慢性低氧高二氧化碳大鼠右心室肌间质胶原的影响，探讨醛固酮在心肌间质增生中的意义。 方法:用放免法测定血浆醛固酮，改良Bergman法测定右心室肌组织羟脯氨酸以表示胶原的浓度。 结果:慢性低氧四周和八周大鼠的血浆醛固酮水平、心肌组织胶原含量与右心室重量明显升高；安体舒通能减轻低氧大鼠的右心室重量与心肌胶原含量增加的程度。结论: 醛固酮参与了慢性低氧高二氧化碳大鼠心肌间质的增生，安体舒通在大鼠心肌间质胶原增生中起较好的抑制作用。
, http://www.100md.com
[中图分类号] R364.3+1 [文献标识码] A [文章编号] 1000-2138(2000)02-0104-02
Effects of spironolactone on myocardial collagen of right ventricule in rats chronically exposed to hypoxia and hypercapnia
ZHENG Lv-zhen GONG Yong-sheng HUANG Hong
(Institute of Cor Pulmonale, Wenzhou Medical College, 325027)
Abstract： Objective：To observe the effects of spironolactone on right ventricular myocardial collagen in rats chronically exposed to hypoxia-hypercapnia and to investigate the significance of aldosterone.Methods：Plasma aldosterone concentration was measured by radioimmunoassay, and collagen was determined by means of hydroxyproline using improved Bergman method.Results：Chronic hypoxia-hypercapnia obviously increased plasma aldosterone,tissue collagen and right ventricule weight. A marked decrease in tissue collagen and right ventricule weight was found in the rats using spironolactone.Conclusion：Aldosterone may be involved in the regulation of myocardial collagen metabolism and spironolactone can inhibit the collagen accumulation in the rats chronically exposed to hypoxia-hypercapnia.
, 百拇医药
Key words： hypoxia,chronic； collagen； aldosterone； spironolactone
对慢性低氧性右心室肌间质胶原堆积与结构重建的研究，是近年来较受关注的热点之一。目前低氧性右心室间质改变的机制尚不清楚，可能与肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RASS)的激活有关[1]。本研究的目的是为探讨醛固酮在慢性低氧高二氧化碳大鼠右室心肌间质胶原代谢中的意义，观察安体舒通的防治作用，现报告如下。
1 材料和方法
1.1 动物分组 健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠54只，随机分成四周组与八周组两大组。每大组又分成三小组，共六小组，即：正常对照组(NC4、NC8)、低氧高二氧化碳模型对照组(HC4、HC8)与低氧高二氧化碳用安体舒通组(HS4、HS8)。全部动物处于同一室内饲养。
, 百拇医药
1.2 模型复制 应用本科室研制的动物饲养舱，建立慢性低氧高二氧化碳大鼠右心室肥厚的动物模型[2]。除NC4、NC8外，其余各组动物每天入饲养舱内吸入9.0%～12.0%浓度的氧、5.0%～6.5%浓度的二氧化碳，饲养10小时，每周6天。HS4与HS8组动物每天入舱前经灌胃给予安体舒通(上海信谊药厂生产)100mg/kg体重，其余各组用等量的生理盐水对照。
1.3 动物处理 动物分别饲养到四周和八周后次日，用戊巴比妥钠(30mg/kg体重)腹腔麻醉，行颈总动脉插管，取血约1.5ml，立即注入含肝素抗凝的塑料离心管中，离心(4℃、3000r/min、10min，Universal 16R，德国)后，取上清液于-30℃下保存待测。以上所有操作过程均在冰水浴中进行。取血后，快速放血处死。随即取出心脏，分离并称取右心室游离壁(RV)和左心室加室间隔(LV+S)的重量。并计算出RV/100g体重与RV/(LV+S)，作为衡量右室肥厚的两个指标。
, 百拇医药
1.4 血浆醛固酮含量的测定 采用放免法(FJ 2008c自动γ免疫计数器)，试剂盒由北京北方免疫试剂研究所提供。
1.5 右心室肌组织胶原含量的测定 称取右心室组织约100mg，剪碎后用6mol/L HCl 110℃水解24小时，70℃水浴蒸干，加1ml蒸溜水复溶，过滤。采用改良Bergman法[3]测定羟脯氨酸浓度，再乘以7.46换算成胶原含量。结果以每克组织胶原含量表示。
1.6 统计分析 组间比较采用one-way ANOVA组间q检验。
2 结果
右心室重量的变化见表1。血浆醛固酮的浓度和右心室肌组织胶原含量见表2。
表1 大鼠右心室重量的变化(
±s) 组别
, 百拇医药
n
RV/100g体重
RV/(LV+S)
NC4
8
0.0641±0.0070**
0.291±0.018**
HC4
10
0.0750±0.0044
0.332±0.028
, 百拇医药
HS4
9
0.0681±0.0038**
0.312±0.017**
NC8
8
0.0672±0.0069**
0.295±0.030**
HC8
10
, http://www.100md.com
0.0776±0.0057
0.335±0.015
HS8
9
0.0710±0.0029*
0.303±0.018*
分别与相应时间的HC组相比：* P<0.05, ** P<0.01表2 各组大鼠血浆醛固酮与右心室肌胶原含量的变化(±s) 组别
n
血浆醛固酮(pg/ml)
, http://www.100md.com
组织胶原[毫克/(克.组织)]
NC4
8
415±57**
4.81±0.57**
HC4
10
514±51
5.86±0.65
HS4
9
, 百拇医药
548±62
4.98±0.70**
NC8
8
302±31**
4.23±0.55**
HC8
10
412±57
6.01±0.78
HS8
, http://www.100md.com
9
439±66
5.10±0.62**△△
分别与相应时间的HC组相比：* P<0.05, ** P<0.01 ，同NC8比：△△P<0.013 讨论
心肌肥厚包括心肌细胞的肥大及心肌间质的改变。以往对慢性低氧导致心肌细胞肥大的研究较多。近年来，非心肌细胞及细胞外间质的作用日益受到人们的关注。心肌胶原是细胞外间质的主要成分，对心肌细胞具有支持、连接和网架支持作用。胶原是一种稳定的蛋白质，正常情况下主要由成纤维细胞分泌。心肌间质胶原的堆积可降低心肌的顺应性，从而损害其舒张功能，严重时，可使其收缩功能也明显降低。有关心肌间质结构重塑的不少研究表明[5] ，左室肥厚时存在心肌间质胶原含量明显增加。但对慢性低氧性右室肥厚时间质改变的研究，特别是符合慢性阻塞性肺部疾病(COPD)临床的低氧高二氧化碳性右室肥厚心肌间质改变的研究尚少。本实验发现，慢性低氧高二氧化碳使右心室明显增厚，心肌间质胶原含量增加。
, 百拇医药
低氧性右心室肥厚与间质胶原堆积的机制甚为复杂，与多种血管活性物质与生长因子等有关。其中肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活的作用与胶原代谢的调节作用尤为人们所重视[4]。本研究室先前的工作表明，血管紧张素转换酶抑制剂(培哚普利)有明显的抑制慢性低氧高二氧化碳大鼠的右室肥厚与心肌组织胶原含量的作用。醛固酮在高血压性左室肥厚与心肌间质结构改建中的意义，已有了不少的研究[5]，但在低氧性右室改变中的作用的研究尚较少。本研究发现慢性低氧大鼠心肌醛固酮明显增加，醛固酮受体拮抗剂——安体舒通有显著减轻右室肥厚及降低右室组织胶原的作用。
醛固酮可通过胞浆Ⅰ型类皮质激素受体[6]使成纤维细胞合成胶原增加。安体舒通可能直接作用于该受体，从而阻断了醛固酮促进心肌间质胶原增生的作用。安体舒通虽基本上能抑制低氧四周组大鼠心肌胶原的增加，但不能完全阻抑低氧八周组大鼠的胶原堆积，也说明了胶原代谢机制的复杂性，安体舒通只能部分抑制其作用。
, 百拇医药
基金项目：浙江省卫生厅科研基金资助。
作者简介：郑绿珍(1964-)，女，浙江温州人，讲师，主要研究方向：低氧性肺动脉高压及肺心病的研究。
参考文献
[1] 龚永生,郑绿珍,王卫，等.培哚普利抑制慢性缺氧高二氧化碳 大鼠肺动脉高压的形成[J].温州医学院学报,1997,27(2):73.
[2] 胡良冈,武宗寅,龚永生，等.低氧高二氧化碳动物饲养舱的研 制[J].医疗卫生装备,1997,(1):8.
[3] Bergman I, Loxley R. Two improve and simplified methods for the spectrophotometric determination of hydroxyproline[J]. Anal Chem,1963,35(12):1961.
, 百拇医药
[4] Campbell SE, Janicki JS, Weber KT. Temporal differences in fibroblast proliferation and phenotype in response to chronic administration of angiotensin Ⅱ or aldosterone[J]. J Mol Cell Cardiol,1995,27(8):1545.
[5] 杜宏,李俭春,李辉.自发性高血压大鼠心肌胶原增生与心肌局 部血管紧张素Ⅱ及醛固酮[J].高血压杂志,1997,5(1):17.
[6] Brilla CG, Zhou G, Matsubara L, et al. Collagen metabolism in cultured adult rat cardiac fibroblasts: response to angiotensin Ⅱ and aldosterone[J]. J Mol Cell Cardial,1994,26(7):809.
收稿日期：1999-11-01
修回日期：2000-01-05, 百拇医药
单位：郑绿珍 龚永生 陈彦凡 胡良冈 范小芳 蒋仲荪(温州医学院 肺心病研究室，浙江 温州 325027)；黄虹(温州医学院附属第二医院 内科，浙江 温州 325027)
关键词：低氧，慢性；胶原；醛固酮；安体舒通
温州医学院学报000206 [摘 要] 目的:观察安体舒通对慢性低氧高二氧化碳大鼠右心室肌间质胶原的影响，探讨醛固酮在心肌间质增生中的意义。 方法:用放免法测定血浆醛固酮，改良Bergman法测定右心室肌组织羟脯氨酸以表示胶原的浓度。 结果:慢性低氧四周和八周大鼠的血浆醛固酮水平、心肌组织胶原含量与右心室重量明显升高；安体舒通能减轻低氧大鼠的右心室重量与心肌胶原含量增加的程度。结论: 醛固酮参与了慢性低氧高二氧化碳大鼠心肌间质的增生，安体舒通在大鼠心肌间质胶原增生中起较好的抑制作用。
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[中图分类号] R364.3+1 [文献标识码] A [文章编号] 1000-2138(2000)02-0104-02
Effects of spironolactone on myocardial collagen of right ventricule in rats chronically exposed to hypoxia and hypercapnia
ZHENG Lv-zhen GONG Yong-sheng HUANG Hong
(Institute of Cor Pulmonale, Wenzhou Medical College, 325027)
Abstract： Objective：To observe the effects of spironolactone on right ventricular myocardial collagen in rats chronically exposed to hypoxia-hypercapnia and to investigate the significance of aldosterone.Methods：Plasma aldosterone concentration was measured by radioimmunoassay, and collagen was determined by means of hydroxyproline using improved Bergman method.Results：Chronic hypoxia-hypercapnia obviously increased plasma aldosterone,tissue collagen and right ventricule weight. A marked decrease in tissue collagen and right ventricule weight was found in the rats using spironolactone.Conclusion：Aldosterone may be involved in the regulation of myocardial collagen metabolism and spironolactone can inhibit the collagen accumulation in the rats chronically exposed to hypoxia-hypercapnia.
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Key words： hypoxia,chronic； collagen； aldosterone； spironolactone
对慢性低氧性右心室肌间质胶原堆积与结构重建的研究，是近年来较受关注的热点之一。目前低氧性右心室间质改变的机制尚不清楚，可能与肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RASS)的激活有关[1]。本研究的目的是为探讨醛固酮在慢性低氧高二氧化碳大鼠右室心肌间质胶原代谢中的意义，观察安体舒通的防治作用，现报告如下。
1 材料和方法
1.1 动物分组 健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠54只，随机分成四周组与八周组两大组。每大组又分成三小组，共六小组，即：正常对照组(NC4、NC8)、低氧高二氧化碳模型对照组(HC4、HC8)与低氧高二氧化碳用安体舒通组(HS4、HS8)。全部动物处于同一室内饲养。
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1.2 模型复制 应用本科室研制的动物饲养舱，建立慢性低氧高二氧化碳大鼠右心室肥厚的动物模型[2]。除NC4、NC8外，其余各组动物每天入饲养舱内吸入9.0%～12.0%浓度的氧、5.0%～6.5%浓度的二氧化碳，饲养10小时，每周6天。HS4与HS8组动物每天入舱前经灌胃给予安体舒通(上海信谊药厂生产)100mg/kg体重，其余各组用等量的生理盐水对照。
1.3 动物处理 动物分别饲养到四周和八周后次日，用戊巴比妥钠(30mg/kg体重)腹腔麻醉，行颈总动脉插管，取血约1.5ml，立即注入含肝素抗凝的塑料离心管中，离心(4℃、3000r/min、10min，Universal 16R，德国)后，取上清液于-30℃下保存待测。以上所有操作过程均在冰水浴中进行。取血后，快速放血处死。随即取出心脏，分离并称取右心室游离壁(RV)和左心室加室间隔(LV+S)的重量。并计算出RV/100g体重与RV/(LV+S)，作为衡量右室肥厚的两个指标。
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1.4 血浆醛固酮含量的测定 采用放免法(FJ 2008c自动γ免疫计数器)，试剂盒由北京北方免疫试剂研究所提供。
1.5 右心室肌组织胶原含量的测定 称取右心室组织约100mg，剪碎后用6mol/L HCl 110℃水解24小时，70℃水浴蒸干，加1ml蒸溜水复溶，过滤。采用改良Bergman法[3]测定羟脯氨酸浓度，再乘以7.46换算成胶原含量。结果以每克组织胶原含量表示。
1.6 统计分析 组间比较采用one-way ANOVA组间q检验。
2 结果
右心室重量的变化见表1。血浆醛固酮的浓度和右心室肌组织胶原含量见表2。
表1 大鼠右心室重量的变化(
±s) 组别, 百拇医药
n
RV/100g体重
RV/(LV+S)
NC4
8
0.0641±0.0070**
0.291±0.018**
HC4
10
0.0750±0.0044
0.332±0.028
, 百拇医药
HS4
9
0.0681±0.0038**
0.312±0.017**
NC8
8
0.0672±0.0069**
0.295±0.030**
HC8
10
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0.0776±0.0057
0.335±0.015
HS8
9
0.0710±0.0029*
0.303±0.018*
分别与相应时间的HC组相比：* P<0.05, ** P<0.01表2 各组大鼠血浆醛固酮与右心室肌胶原含量的变化(
±s) 组别n
血浆醛固酮(pg/ml)
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组织胶原[毫克/(克.组织)]
NC4
8
415±57**
4.81±0.57**
HC4
10
514±51
5.86±0.65
HS4
9
, 百拇医药
548±62
4.98±0.70**
NC8
8
302±31**
4.23±0.55**
HC8
10
412±57
6.01±0.78
HS8
, http://www.100md.com
9
439±66
5.10±0.62**△△
分别与相应时间的HC组相比：* P<0.05, ** P<0.01 ，同NC8比：△△P<0.013 讨论
心肌肥厚包括心肌细胞的肥大及心肌间质的改变。以往对慢性低氧导致心肌细胞肥大的研究较多。近年来，非心肌细胞及细胞外间质的作用日益受到人们的关注。心肌胶原是细胞外间质的主要成分，对心肌细胞具有支持、连接和网架支持作用。胶原是一种稳定的蛋白质，正常情况下主要由成纤维细胞分泌。心肌间质胶原的堆积可降低心肌的顺应性，从而损害其舒张功能，严重时，可使其收缩功能也明显降低。有关心肌间质结构重塑的不少研究表明[5] ，左室肥厚时存在心肌间质胶原含量明显增加。但对慢性低氧性右室肥厚时间质改变的研究，特别是符合慢性阻塞性肺部疾病(COPD)临床的低氧高二氧化碳性右室肥厚心肌间质改变的研究尚少。本实验发现，慢性低氧高二氧化碳使右心室明显增厚，心肌间质胶原含量增加。
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低氧性右心室肥厚与间质胶原堆积的机制甚为复杂，与多种血管活性物质与生长因子等有关。其中肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活的作用与胶原代谢的调节作用尤为人们所重视[4]。本研究室先前的工作表明，血管紧张素转换酶抑制剂(培哚普利)有明显的抑制慢性低氧高二氧化碳大鼠的右室肥厚与心肌组织胶原含量的作用。醛固酮在高血压性左室肥厚与心肌间质结构改建中的意义，已有了不少的研究[5]，但在低氧性右室改变中的作用的研究尚较少。本研究发现慢性低氧大鼠心肌醛固酮明显增加，醛固酮受体拮抗剂——安体舒通有显著减轻右室肥厚及降低右室组织胶原的作用。
醛固酮可通过胞浆Ⅰ型类皮质激素受体[6]使成纤维细胞合成胶原增加。安体舒通可能直接作用于该受体，从而阻断了醛固酮促进心肌间质胶原增生的作用。安体舒通虽基本上能抑制低氧四周组大鼠心肌胶原的增加，但不能完全阻抑低氧八周组大鼠的胶原堆积，也说明了胶原代谢机制的复杂性，安体舒通只能部分抑制其作用。
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基金项目：浙江省卫生厅科研基金资助。
作者简介：郑绿珍(1964-)，女，浙江温州人，讲师，主要研究方向：低氧性肺动脉高压及肺心病的研究。
参考文献
[1] 龚永生,郑绿珍,王卫，等.培哚普利抑制慢性缺氧高二氧化碳 大鼠肺动脉高压的形成[J].温州医学院学报,1997,27(2):73.
[2] 胡良冈,武宗寅,龚永生，等.低氧高二氧化碳动物饲养舱的研 制[J].医疗卫生装备,1997,(1):8.
[3] Bergman I, Loxley R. Two improve and simplified methods for the spectrophotometric determination of hydroxyproline[J]. Anal Chem,1963,35(12):1961.
, 百拇医药
[4] Campbell SE, Janicki JS, Weber KT. Temporal differences in fibroblast proliferation and phenotype in response to chronic administration of angiotensin Ⅱ or aldosterone[J]. J Mol Cell Cardiol,1995,27(8):1545.
[5] 杜宏,李俭春,李辉.自发性高血压大鼠心肌胶原增生与心肌局 部血管紧张素Ⅱ及醛固酮[J].高血压杂志,1997,5(1):17.
[6] Brilla CG, Zhou G, Matsubara L, et al. Collagen metabolism in cultured adult rat cardiac fibroblasts: response to angiotensin Ⅱ and aldosterone[J]. J Mol Cell Cardial,1994,26(7):809.
收稿日期：1999-11-01
修回日期：2000-01-05, 百拇医药
参见：首页 > 医疗版 > 疾病专题 > 内分泌科 > 肾上腺疾病 > 原发性醛固酮增多症