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编号:10266512
应用吸烟行为团体干预法对北京医科大学学生控烟效果评价
http://www.100md.com 《首都医科大学学报》 1999年第2期
     作者:马迎华 李 红 胡长风 王 嘉 朱锡莹

    单位:马迎华 王 嘉 朱锡莹 北京医科大学儿童青少年卫生研究所,李 红 教育处;胡长风 医药卫生分析中心 ,北京 100083

    关键词:吸烟;预防和控制;学生;医科;团体干预法☆

    北京医学000317 P53蛋白在肿瘤组织中的表达水平及其与肿瘤分化、浸润、转移 以及预后的关系是近年来肿瘤研究领域的热点之一。我们应用流式细胞术检测胃癌组织P53 蛋白的表达水平,探讨其与胃癌发病的关系。

    材料与方法

    组织标本由北京天坛医院病理科提供,胃癌16例,不典型增生11例,肠上皮化生10例,浅表 性胃炎13例,正常胃粘膜10例。P53单克隆抗体pAb1801购于美国Ocogene Sci Inc。二抗为 荧光标记的羊抗小鼠抗体IgG-FITC,购于军事医学科学院微生物研究所(批号9109)。
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    1.单细胞悬液的制备:将石蜡组织块用切片机切成45μm厚的组织4~5片,加二甲苯5ml,室 温下脱蜡2天,期间更换3次,以充分脱蜡。然后,依次用95%、75%、50%梯度酒精水化,每 步10分钟,最后,用蒸馏水漂洗。捣碎组织片,加入0.5%胃蛋白酶(pH 1.5),置37℃温箱 内消化30分钟,每隔10分钟摇动一次,消化结束后加生理盐水终止消化,用400目尼龙网过 滤,滤液用生理盐水漂洗,1 000rpm离心5分钟,弃上清,加75%酒精固定,置4℃冰箱中备 检。

    2.P53蛋白的免疫荧光染色:将所制备的单细胞悬液用PBS以1 000rpm离心2分钟,洗涤2次, 弃上清,加1∶100稀释的鼠抗人P53蛋白单克隆抗体100μl,37℃水浴30分钟,用PBS离心2 次,弃上清液,加1∶20稀释的羊抗鼠IgG-FITC 100μl,37℃水浴30分钟,离心洗涤2次, 去上清,除去未结合荧光抗体,调整细胞数为1×106/ml,上机检测。

, 百拇医药     3.流式细胞仪检测:流式细胞仪为FACSCan (Becton Dickison)。所测数据用Lysys Ⅱ软件 处理。

    4.测量数据的分析:以DNA指数值(DI)作为判断DNA倍体的标准,DI=1.0±2CV为二倍体肿 瘤,DI≠1.0±2CV为异倍体肿瘤。用cell Fit软件处理得DNA组方图各期百分比,以增殖指 数(PI)表示细胞增殖活性。以荧光指数(FI)表示P53的相对含量,公式为:FI=(瘤细胞P53平 均荧光强度-对照组平均荧光强度)/正常胃粘膜细胞P53平均荧光强度,如FI>1.0为P53阳 性,FI<1.0为阴性。

    5.统计学处理:用方差分析及t检验进行统计学分析。

    结 果

    1.各组FI值:见表1。

    2.不同病变DNA倍体分布:见表2。
, 百拇医药
    3.不典型增生及胃癌的增殖活性及DNA倍体与P53蛋白表达的关系:见表3。

    表1 胃癌及癌前病变P53蛋白的FI值(±s) 组织

    例数

    FI值

    正常胃粘膜

    10

    0.602±0.077

    浅表性胃炎

    13

    0.898±0.052
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    肠上皮化生

    10

    1.050±0.074*

    不典型增生

    11

    1.143±0.060*△

    轻

    4

    0.924±0.068

    中

    3

    1.152±0.092
, 百拇医药
    重

    4

    1.501±0.096

    胃 癌

    16

    1.866±0.096*▲#△

    与正常胃粘膜组比较 * P<0.05;与浅表性胃炎组比较△ P<0.05 ;与肠上皮化生组比较▲ P<0.05;与不典型增生组比较# P<0.05表2 不同病变DNA倍体情况 组织

    例数

    二倍体

    异倍体

, 百拇医药     异倍体率(%)

    正常胃粘膜

    10

    10

    0

    0

    浅表性胃炎

    13

    13

    0

    0

    肠上皮化生

    10

    10
, 百拇医药
    0

    0

    不典型增生

    11

    8

    3

    27.2*△▲

    轻

    4

    4

    0

    中

    3

, http://www.100md.com     2

    1

    重

    4

    2

    2

    胃 癌

    16

    0

    16

    100*△▲

    与正常胃粘膜组比较* P<0.05;与浅表性胃炎组比较△ P<0.05;与肠上皮化生组比较▲ P<0.05;与不典型增生组比较# P<0.05表3 不典型增生及胃癌DNA倍体与P53蛋白表达的关系 (±s) DNA倍体
, 百拇医药
    例数

    PI

    FI

    P53阳性例数(%)

    二倍体

    8

    12.08±1.11

    1.134±0.142

    2(25)

    异倍体

    19

    25.02±6.89*
, 百拇医药
    1.883±0.202*

    13(68.4)*

    *与二倍体比较 P<0.05 讨 论

    P53是一种很独特的基因,正常时是一个肿瘤抑制基因,突变后则是一个典型的显性癌基因 。研究表明,突变体P53基因产生的P53蛋白与肿瘤的发生有关。我们应用流式细胞术检测胃 癌,癌前病变及胃炎病理组织中P53蛋白的表达水平,结果表明,胃癌及癌前病变P53蛋白的 表达水平明显高于正常胃粘膜及浅表性胃炎,胃癌高于不典型增生及肠上皮化生,均有显著 性差异(P<0.05)。同时可以看到,P53蛋白的表达水平从肠上皮化生、不典型增生到 胃癌呈递增趋势。在异倍体标本中,P53蛋白阳性为68.4%,二倍体标本P53蛋白阳性率为25 %,二者有 显著性差异(P<0.05)。从增殖活性看,异倍体标本与二倍体标本的PI值有 显著性差异(P<0.05)。有学者应用免疫组化技术研究发现胃癌P53蛋白阳性率为61%, 重度不典型增生P53蛋白阳性率为20%,还有文献报道不典型增生及胃癌P53蛋白阳性率均为6 0%。我们的结果为不典型增生P53蛋白阳性率为27%,胃癌为68%。关于阳性率的差异可能与 检测方法不同有关,但我们的结果和报道资料都表明胃癌P53蛋白的表达水平增高。因此,P 53蛋白过度表达可能与胃的发病有关,检测P53蛋白的表达水平对胃癌的诊断可能有一定的 价值。关于癌前病变P53蛋白的表达水平及其意义有待进一步探讨。

    收稿:1999-04-12

    修回:1999-11-08, 百拇医药