亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与原发性高血压的关系
作者：高原原 詹思延 尹香君 胡永华 李立明
单位：北京医科大学流行病教研室,北京 100083
关键词：高血压；亚甲基四氢叶酸还原酶☆；限制性片段长度多态性
北京医科大学学报990326 摘 要 目的：探讨上海社区人群亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase， MTHFR)基因多态性与原发性高血压的关系。方法：用聚合酶链反应-限制性片段的多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)技术，检测127例原发性高血压及170例正常对照的MTHFR基因多态性。结果：MTHFR基因第677位核苷酸呈多态性，可分为3种类型：C/C、T/T、C/T。 原发性高血压病例组3种基因型频率为： C/C，34.6%； C/T，53.5%； T/T，11.8%。对照组中分别为36.5%；49.4%；14.1%。病例组与对照组T/T基因型频率无显著性差异。结论：在上海社区人群中，MTHFR基因多态性可能不是原发性高血压的危险因素。
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中国图书资料分类法分类号 R544.1
The relationship between methylenetetrahydrofolate reductase
polymorphism and risk of essential hypertension
GAO Yuan-Yuan, ZHAN Si-Yan, YIN Xiang-Jun, HU Yong-Hua， LI Li-Ming
(Department of Epidemiology, Beijing Medical University, Beijing 100083)
ABSTRACT Objective: To explore the relationship between methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) polymorphism and risk of essential hypertension among Shanghai community-based population. Methods: polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) was carried out. Results:127 patients with essential hypertension and 170 control subjects were screened to assess the polymorphism in MTHFR. The frequency of three genotypes was C/C ( homozygous normal ), 34.6%; C/T ( heterozygous ), 53.5%; T/T (homozygous mutant ), 11.8% in patients and 36.5%; 49.4%; 14.1% in control subjects. Conclusion: No significant difference of the frequency of homozygous mutant genotype between patients and control subjects was found in this population. MTHFR polymorphism may not be associated with risk of essential hypertension.
, 百拇医药
MeSH Hypertension Methylenetetrahydrofolate reductase☆ Restriction fragment length polymorphism
研究表明同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)血清浓度增高可能与高血压的发生有关[1]。Hcy是含巯基氨基酸，它的一种代谢途径为再甲基化生成蛋氨酸，亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahy-drofolate reductase, MTHFR)是Hcy再甲基化的关键酶。近年来，Kang等[2]报道MTHFR有一种不耐热的变异株，与Hcy血清浓度增高有关。目前，已克隆出MTHFR cDNA，并检出了一种常见的突变，即677位核苷酸C-至-T (丙氨酸-至-缬氨酸)突变。携带该突变等位基因T的纯合子个体，血清Hcy水平显著增高[3]。这些研究的结果提示，MTHFR基因的突变可能与同型半胱氨酸水平增高及高血压的发生有关。本研究旨在探讨上海城市社区人群中，MTHFR基因多态性与原发性高血压的关系。
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1 材料与方法
1.1 研究对象
对上海南市区某街道所有年龄在35～75岁的居民进行调查，共发现原发性高血压病例一万多人，用单纯随机抽样选取其中三千余例进行药物干预治疗。此次研究的病例是用系统随机抽样法，从以上三千多高血压病例中选取的。病例共127例，年龄(58±10)岁，其中男性67例，女性60例。高血压诊断标准依照1993年美国全国联合会关于高血压检出、评价和治疗的第5次报告，收缩压≥140 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)和/或舒张压≥90 mmHg。对照组为来自同一社区的健康人群，也采用系统随机抽样法选取，共170例，年龄(51±11)岁；其中男性72例，女性98例；经严格体检排除有心、脑血管疾病及糖尿病肾病病史者。样本量根据文献报道的MTHFR T/T基因型频率计算。两组成员均经过基线调查，包括吸烟、饮酒, 并检测体重指数(body mass index,BMI)和血浆总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride, TG) 、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDLC) 和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol, LDLC)。所有研究对象空腹12 h取静脉血5 ml, 静置后离心，-20 ℃保存，供生化检测用；离心后试管内留下的血凝块亦于-20 ℃保存，用于各研究对象基因组DNA的提取。
, 百拇医药
1.2 人基因组DNA的提取
血凝块标本用等体积4%(体积分数)十六烷基三甲基溴化铵及蒸镏水室温处理10 min,各2次，离心后收集沉淀， 用60 μg.L-1蛋白酶K 37 ℃消化过夜，次日用常规酚、氯仿法提取DNA。
1.3 PCR扩增MTHFR基因目的片段
PCR反应引物由LTI公司合成，序列为
5′-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3′(exonic)
5′-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3′(intronic)
PCR扩增条件: 94 ℃变性4 min后，94 ℃，30 s；62 ℃，45 s；共30个循环。PCR扩增仪为ERICOMP Power Block I，Taq酶购自北京鼎国生物公司。反应完成后，取5 μl，用20 g.L-1琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物的扩增情况，若在相应位置有清晰扩增条带，则进行酶切反应。
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1.4 PCR扩增产物限制性片段的长度多态性分析
PCR产物用限制性内切酶HinfⅠ 经37 ℃消化过夜后，25 g.L-1琼脂糖凝胶电泳检测。
1.5 统计方法
组间均数比较用t检验；组间频数比较用χ2检验。
2 结果
高血压病例组与对照组的吸烟率、饮酒率、体重指数、血脂水平的比较(表1)：高血压病例组的TC、LDLC水平显著高于对照组(P<0.05)， 其余指标(吸烟率、饮酒率、体重指数、TG、HDLC)的水平, 两组相比，无显著性差异。
高血压病例组与对照组MTHFR 3种基因型频率及突变等位基因频率的比较：从所有研究对象的血凝块标本中提取模板DNA，用PCR反应成功地扩增出MTHFR基因的目的片段，其长度为198 bp, PCR扩增结果见图1。PCR产物用限制性内切酶HinfⅠ 37 ℃消化过夜后，经琼脂糖凝胶电泳，EB染色，在紫外灯下观察到MTHFR基因第677位核甘酸表现多态性，可分为3种类型：仅有198 bp片段的带型，为纯合未突变型(C/C)；仅有175 bp片段的带型(酶切后应产生175 bp和23 bp两个片段，但后者已泳动至胶外)，为纯合突变型(T/T)；有198 bp和175 bp两个片段的带型，为杂合子型(C/T)。RFLP结果如图2。病例组与对照组按不同基因型可分为3组。病例组共127例，其中C/C基因型44例，占34.6%；C/T基因型68例，占53.5%；T/T基因型15例，占11.8%。对照组共170例，分别为62例(36.5%)；84例(49.4%)；24例(14.1%)。T/T基因型频率在病例组与对照组中相似，无显著性差异。突变等位基因T的频率，病例组为38.5%，对照组为31.8%。经χ2检验，P=0.95，说明病例组与对照组突变等位基因频率差异无显著性。
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3 讨论
本研究结果表明，在上海城市社区人群中，MTHFR基因的杂合和纯合突变是很普遍的。在对照组中，MTHFR 3种基因型的频率分别为(C/C),36.5%;(C/T),49.4%;(T/T),14.1%;突变等位基因频率为31.8%;与Frosst等[3]报告的114例未经选择的法裔加拿大人的相应基因型频率37%, 51%, 12%一致。本项研究的原发性高血压病例组，MTHFR 的T/T基因型频率与对照组差异无显著性，表明在本研究人群中，MTHFR基因第677位核甘酸的多态性不是原发性高血压的危险因素。
高血压是冠心病、脑卒中的主要病因。近年来，我国高血压发病率和患病率都呈逐年上升趋势。高血压发病是遗传病因和环境因素相互作用的结果。在高血压高发人群中筛选高血压候选基因，有助于了解人群中具有遗传倾向的高危对象，以采取相应的预防措施。上海市南市区是高血压高发区，已取得该社区人群的基限资料及血标本，可进行高血压候选基因的筛选。
, 百拇医药
表1 对照组、高血压病例组及高血压病例组不同基因型的比较(
±s)
Table 1 Comparison between control subjects, hypertension patients and genotype subgroups in patients (±s) Variables
Smoking rate/%
Drinking rate/%
(>100 g/d)
BMI/kg.m-2
, 百拇医药
c/mmol.L-1
TC
TG
HDLC
LDLC
Control
28.2
2.9
24.1±3.0
5.01±1.00
1.4±0.9
1.5±0.3
, 百拇医药
2.86±0.85
Patients
24.4
1.6
24.0±2.7
5.3±0.9
1.6±0.7
1.4±0.4
3.20±0.88
C/C
18.2
2.3
, 百拇医药
23.6±2.5
5.5±0.8
1.6±0.8
1.5±0.4
3.28±0.77
Patients C/T
26.5
1.5
24.2±2.8
5.3±1.0
1.6±0.8
1.4±0.3
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3.15±0.89
T/T
33.3
0
23.4±3.0
5.3±1.2
1.5±0.5
1.5±0.4
3.16±1.17
*P<0.05, compared with control.
图1 PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳
, 百拇医药
Figure 1 Agarose electrophoresis for products of PCR amplification
M: PGEM-3Zf (+)/HaeⅢ markers 1～5: products
of PCR amplification of samples from No. 1 to No. 5
图2 MTHFR基因限制性片段长度多态性分析
Figure 2 Analysis of PCR-RFLP for MTHFR gene
近年来，对Hcy血浆水平增高、MTHFR基因多态性与心血管疾病关系的研究多有报道，而与高血压发病的关系的研究，尚只见Nishio等[4]的报道。Nishio等[4]发现在129例日本中年男性中，MTHFR 3种基因型的频率分别为(C/C), 35%; ( C/T ), 54%; ( T/T ), 11%；高血压病例组与正常对照组相比，突变等位基因频率和3种基因型的频率无差异。我们对上海城市社区人群MTHFR基因多态性与原发性高血压的关系的研究，也有类似结果。
, 百拇医药
国外的研究结果发现，当血浆叶酸质量浓度很低时(小于2.23 μg.L-1)，MTHFR基因是纯合突变型的，与纯合未突变型及杂合型的相比，Hcy血浆水平显著增高，而叶酸质量浓度高时，Hcy血浆水平则与MTHFR基因型无关。这种结果提示，Hcy血浆水平受遗传及环境(特别是营养因素)的影响，叶酸摄入水平较低时，MTHFR基因突变可导致血浆Hcy水平增高，而体内叶酸质量浓度较高时，MTHFR的这种普遍的遗传变异对血浆Hcy水平影响很小[5～6]。考虑到高水平同型半胱氨酸可能与高血压发生有关，MTHFR基因多态性可能通过影响血浆Hcy水平，而对高血压的危险因素发生作用。所以，在高血压高发区，对人群MTHFR基因多态性与血浆Hcy水平、血浆叶酸浓度的关系，值得进一步探讨。
“九五”国家科技攻关项目；
☆ 自由词。
参考文献
, 百拇医药
1 Sutton-tyrrell K. High homocysteine levels are independently related to isolated systolic hypertension in older adults. Circulation, 1997:96:1 745-1 749
2 Kang SS, Passen EL, Ruggie N, et al. Thermolabile defect of methylene tetrahydrofolate reducatse in coronary artery disease. Circulation, 1993,88:1 463-1 480
3 Frosst P, Blom HJ, Milos R, et al. A candidate genetic risk factor for vascular disease: a common mutation in methylenetetra-hydrofolate reductase. Nat Genet, 1995,10:111-113
, 百拇医药
4 Nishio H, Lee MJ, Fujii M, et al. A common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase gene among the Japanese population. Jpn J Hum Genet, 1996,41:247-251
5 Ma J, Stampfer MJ, Hennekens CH, et al. Methylenetetrahydrofolate reductase polymorphism, plasma folate, homocysteine, and risk of myocardial infarction in US physicians. Circulation, 1996,94:2 410-2 416
6 Jaques PF, Bostom AG, Williams RR, et al. Relation between folate status, a common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase, and plasma homocysteine concentrations. Circulation, 1996,93:7-9
(1998-07-10收稿), 百拇医药
单位：北京医科大学流行病教研室,北京 100083
关键词：高血压；亚甲基四氢叶酸还原酶☆；限制性片段长度多态性
北京医科大学学报990326 摘 要 目的：探讨上海社区人群亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase， MTHFR)基因多态性与原发性高血压的关系。方法：用聚合酶链反应-限制性片段的多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)技术，检测127例原发性高血压及170例正常对照的MTHFR基因多态性。结果：MTHFR基因第677位核苷酸呈多态性，可分为3种类型：C/C、T/T、C/T。 原发性高血压病例组3种基因型频率为： C/C，34.6%； C/T，53.5%； T/T，11.8%。对照组中分别为36.5%；49.4%；14.1%。病例组与对照组T/T基因型频率无显著性差异。结论：在上海社区人群中，MTHFR基因多态性可能不是原发性高血压的危险因素。
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中国图书资料分类法分类号 R544.1
The relationship between methylenetetrahydrofolate reductase
polymorphism and risk of essential hypertension
GAO Yuan-Yuan, ZHAN Si-Yan, YIN Xiang-Jun, HU Yong-Hua， LI Li-Ming
(Department of Epidemiology, Beijing Medical University, Beijing 100083)
ABSTRACT Objective: To explore the relationship between methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) polymorphism and risk of essential hypertension among Shanghai community-based population. Methods: polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) was carried out. Results:127 patients with essential hypertension and 170 control subjects were screened to assess the polymorphism in MTHFR. The frequency of three genotypes was C/C ( homozygous normal ), 34.6%; C/T ( heterozygous ), 53.5%; T/T (homozygous mutant ), 11.8% in patients and 36.5%; 49.4%; 14.1% in control subjects. Conclusion: No significant difference of the frequency of homozygous mutant genotype between patients and control subjects was found in this population. MTHFR polymorphism may not be associated with risk of essential hypertension.
, 百拇医药
MeSH Hypertension Methylenetetrahydrofolate reductase☆ Restriction fragment length polymorphism
研究表明同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)血清浓度增高可能与高血压的发生有关[1]。Hcy是含巯基氨基酸，它的一种代谢途径为再甲基化生成蛋氨酸，亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahy-drofolate reductase, MTHFR)是Hcy再甲基化的关键酶。近年来，Kang等[2]报道MTHFR有一种不耐热的变异株，与Hcy血清浓度增高有关。目前，已克隆出MTHFR cDNA，并检出了一种常见的突变，即677位核苷酸C-至-T (丙氨酸-至-缬氨酸)突变。携带该突变等位基因T的纯合子个体，血清Hcy水平显著增高[3]。这些研究的结果提示，MTHFR基因的突变可能与同型半胱氨酸水平增高及高血压的发生有关。本研究旨在探讨上海城市社区人群中，MTHFR基因多态性与原发性高血压的关系。
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1 材料与方法
1.1 研究对象
对上海南市区某街道所有年龄在35～75岁的居民进行调查，共发现原发性高血压病例一万多人，用单纯随机抽样选取其中三千余例进行药物干预治疗。此次研究的病例是用系统随机抽样法，从以上三千多高血压病例中选取的。病例共127例，年龄(58±10)岁，其中男性67例，女性60例。高血压诊断标准依照1993年美国全国联合会关于高血压检出、评价和治疗的第5次报告，收缩压≥140 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)和/或舒张压≥90 mmHg。对照组为来自同一社区的健康人群，也采用系统随机抽样法选取，共170例，年龄(51±11)岁；其中男性72例，女性98例；经严格体检排除有心、脑血管疾病及糖尿病肾病病史者。样本量根据文献报道的MTHFR T/T基因型频率计算。两组成员均经过基线调查，包括吸烟、饮酒, 并检测体重指数(body mass index,BMI)和血浆总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride, TG) 、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDLC) 和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol, LDLC)。所有研究对象空腹12 h取静脉血5 ml, 静置后离心，-20 ℃保存，供生化检测用；离心后试管内留下的血凝块亦于-20 ℃保存，用于各研究对象基因组DNA的提取。
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1.2 人基因组DNA的提取
血凝块标本用等体积4%(体积分数)十六烷基三甲基溴化铵及蒸镏水室温处理10 min,各2次，离心后收集沉淀， 用60 μg.L-1蛋白酶K 37 ℃消化过夜，次日用常规酚、氯仿法提取DNA。
1.3 PCR扩增MTHFR基因目的片段
PCR反应引物由LTI公司合成，序列为
5′-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3′(exonic)
5′-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3′(intronic)
PCR扩增条件: 94 ℃变性4 min后，94 ℃，30 s；62 ℃，45 s；共30个循环。PCR扩增仪为ERICOMP Power Block I，Taq酶购自北京鼎国生物公司。反应完成后，取5 μl，用20 g.L-1琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物的扩增情况，若在相应位置有清晰扩增条带，则进行酶切反应。
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1.4 PCR扩增产物限制性片段的长度多态性分析
PCR产物用限制性内切酶HinfⅠ 经37 ℃消化过夜后，25 g.L-1琼脂糖凝胶电泳检测。
1.5 统计方法
组间均数比较用t检验；组间频数比较用χ2检验。
2 结果
高血压病例组与对照组的吸烟率、饮酒率、体重指数、血脂水平的比较(表1)：高血压病例组的TC、LDLC水平显著高于对照组(P<0.05)， 其余指标(吸烟率、饮酒率、体重指数、TG、HDLC)的水平, 两组相比，无显著性差异。
高血压病例组与对照组MTHFR 3种基因型频率及突变等位基因频率的比较：从所有研究对象的血凝块标本中提取模板DNA，用PCR反应成功地扩增出MTHFR基因的目的片段，其长度为198 bp, PCR扩增结果见图1。PCR产物用限制性内切酶HinfⅠ 37 ℃消化过夜后，经琼脂糖凝胶电泳，EB染色，在紫外灯下观察到MTHFR基因第677位核甘酸表现多态性，可分为3种类型：仅有198 bp片段的带型，为纯合未突变型(C/C)；仅有175 bp片段的带型(酶切后应产生175 bp和23 bp两个片段，但后者已泳动至胶外)，为纯合突变型(T/T)；有198 bp和175 bp两个片段的带型，为杂合子型(C/T)。RFLP结果如图2。病例组与对照组按不同基因型可分为3组。病例组共127例，其中C/C基因型44例，占34.6%；C/T基因型68例，占53.5%；T/T基因型15例，占11.8%。对照组共170例，分别为62例(36.5%)；84例(49.4%)；24例(14.1%)。T/T基因型频率在病例组与对照组中相似，无显著性差异。突变等位基因T的频率，病例组为38.5%，对照组为31.8%。经χ2检验，P=0.95，说明病例组与对照组突变等位基因频率差异无显著性。
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3 讨论
本研究结果表明，在上海城市社区人群中，MTHFR基因的杂合和纯合突变是很普遍的。在对照组中，MTHFR 3种基因型的频率分别为(C/C),36.5%;(C/T),49.4%;(T/T),14.1%;突变等位基因频率为31.8%;与Frosst等[3]报告的114例未经选择的法裔加拿大人的相应基因型频率37%, 51%, 12%一致。本项研究的原发性高血压病例组，MTHFR 的T/T基因型频率与对照组差异无显著性，表明在本研究人群中，MTHFR基因第677位核甘酸的多态性不是原发性高血压的危险因素。
高血压是冠心病、脑卒中的主要病因。近年来，我国高血压发病率和患病率都呈逐年上升趋势。高血压发病是遗传病因和环境因素相互作用的结果。在高血压高发人群中筛选高血压候选基因，有助于了解人群中具有遗传倾向的高危对象，以采取相应的预防措施。上海市南市区是高血压高发区，已取得该社区人群的基限资料及血标本，可进行高血压候选基因的筛选。
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表1 对照组、高血压病例组及高血压病例组不同基因型的比较(
±s)Table 1 Comparison between control subjects, hypertension patients and genotype subgroups in patients (
±s) VariablesSmoking rate/%
Drinking rate/%
(>100 g/d)
BMI/kg.m-2
, 百拇医药
c/mmol.L-1
TC
TG
HDLC
LDLC
Control
28.2
2.9
24.1±3.0
5.01±1.00
1.4±0.9
1.5±0.3
, 百拇医药
2.86±0.85
Patients
24.4
1.6
24.0±2.7
5.3±0.9
1.6±0.7
1.4±0.4
3.20±0.88
C/C
18.2
2.3
, 百拇医药
23.6±2.5
5.5±0.8
1.6±0.8
1.5±0.4
3.28±0.77
Patients C/T
26.5
1.5
24.2±2.8
5.3±1.0
1.6±0.8
1.4±0.3
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3.15±0.89
T/T
33.3
0
23.4±3.0
5.3±1.2
1.5±0.5
1.5±0.4
3.16±1.17
*P<0.05, compared with control.
图1 PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳
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Figure 1 Agarose electrophoresis for products of PCR amplification
M: PGEM-3Zf (+)/HaeⅢ markers 1～5: products
of PCR amplification of samples from No. 1 to No. 5
图2 MTHFR基因限制性片段长度多态性分析
Figure 2 Analysis of PCR-RFLP for MTHFR gene
近年来，对Hcy血浆水平增高、MTHFR基因多态性与心血管疾病关系的研究多有报道，而与高血压发病的关系的研究，尚只见Nishio等[4]的报道。Nishio等[4]发现在129例日本中年男性中，MTHFR 3种基因型的频率分别为(C/C), 35%; ( C/T ), 54%; ( T/T ), 11%；高血压病例组与正常对照组相比，突变等位基因频率和3种基因型的频率无差异。我们对上海城市社区人群MTHFR基因多态性与原发性高血压的关系的研究，也有类似结果。
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国外的研究结果发现，当血浆叶酸质量浓度很低时(小于2.23 μg.L-1)，MTHFR基因是纯合突变型的，与纯合未突变型及杂合型的相比，Hcy血浆水平显著增高，而叶酸质量浓度高时，Hcy血浆水平则与MTHFR基因型无关。这种结果提示，Hcy血浆水平受遗传及环境(特别是营养因素)的影响，叶酸摄入水平较低时，MTHFR基因突变可导致血浆Hcy水平增高，而体内叶酸质量浓度较高时，MTHFR的这种普遍的遗传变异对血浆Hcy水平影响很小[5～6]。考虑到高水平同型半胱氨酸可能与高血压发生有关，MTHFR基因多态性可能通过影响血浆Hcy水平，而对高血压的危险因素发生作用。所以，在高血压高发区，对人群MTHFR基因多态性与血浆Hcy水平、血浆叶酸浓度的关系，值得进一步探讨。
“九五”国家科技攻关项目；
☆ 自由词。
参考文献
, 百拇医药
1 Sutton-tyrrell K. High homocysteine levels are independently related to isolated systolic hypertension in older adults. Circulation, 1997:96:1 745-1 749
2 Kang SS, Passen EL, Ruggie N, et al. Thermolabile defect of methylene tetrahydrofolate reducatse in coronary artery disease. Circulation, 1993,88:1 463-1 480
3 Frosst P, Blom HJ, Milos R, et al. A candidate genetic risk factor for vascular disease: a common mutation in methylenetetra-hydrofolate reductase. Nat Genet, 1995,10:111-113
, 百拇医药
4 Nishio H, Lee MJ, Fujii M, et al. A common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase gene among the Japanese population. Jpn J Hum Genet, 1996,41:247-251
5 Ma J, Stampfer MJ, Hennekens CH, et al. Methylenetetrahydrofolate reductase polymorphism, plasma folate, homocysteine, and risk of myocardial infarction in US physicians. Circulation, 1996,94:2 410-2 416
6 Jaques PF, Bostom AG, Williams RR, et al. Relation between folate status, a common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase, and plasma homocysteine concentrations. Circulation, 1996,93:7-9
(1998-07-10收稿), 百拇医药