照射与非照射方法诱导小鼠皮肤移植耐受
作者：苑学礼 宋娴媛 谢蜀生 郭应禄
单位：苑学礼 郭应禄 北京医科大学第一医院泌尿外科泌尿外科研究所，北京 100034；宋娴媛 谢蜀生 免疫学系
关键词：皮肤移植；免疫耐受；移植物存活；辐射效应
北京医科大学学报990410 摘 要 目的：比较不同方法诱导移植耐受的效果，探讨有临床应用前景的非照射耐受诱导方法。方法：分别以主要组织相容性抗原(major histocompatibility complex, MHC)完全不同的雄性BALB/c和雌性C57BL/6小鼠作为皮肤移植的供体和受体，移植前对受体小鼠单独或联合应用5 Gy全身照射、0.1 ml抗淋巴细胞血清注射、3×107供体骨髓细胞静脉输注、每千克体重150 mg环磷酰胺腹腔注射。结果：各实验组的皮肤移植物存活时间均较对照组明显延长，混合淋巴细胞反应和迟发型超敏反应也表现为供体特异性降低。移植前应用抗淋巴细胞血清、骨髓输注和皮肤移植后注射环磷酰胺可以延长移植物存活时间，平均存活23.6 d，取得与全身照射后输入供体骨髓相似的耐受诱导效果(平均20.4 d)。结论：采用比较温和的非照射的预处理方法，在不应用免疫抑制剂的情况下，也可获得一定程度的免疫耐受，达到延长移植物存活的目的。
, http://www.100md.com
中国图书资料分类法分类号 R659-332
Transplantation tolerance to mice skin allografts induced
with irradiate and non-irradiate protocols
YUAN Xue-Li＃, SONG Xian-Yuan, XIE Shu-Sheng, GUO Ying-Lu
(#Institute of Urology, the First Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100034)
ABSTRACT Objective: To establish a transplantation tolerance induction protocol which might be applied in clinical situation in the future. Methods: Fully MHC-mismatched male BALB/c (H-2d) and female C57BL/6 (B6, H-2b) mice were used as skin transplantation donors and recipients, respectively. Before operation B6 mice were conditioned with 5 Gy whole body irradiation (WBI), 0.1 ml ALS (antilymphocytic serum)injection for three times, 3×107 donor bone marrow cells transfusion (BMT), 150 mg.kg-1 cyclophosphamide(CP) separately or combinatively. Results: When ALS was used combinatively with BMT and CP, the allograft survival was significantly prolonged, mean survival time was 23.6 days, just as the result of WBI+BMT induction. Conclusion: Transplantation tolerance can also be induced by non-irradiate pretreatment.
, 百拇医药
MeSH Skin transplantation Immune tolerance Graft survival/rad eff
诱导器官移植受体对供体器官特异性的移植耐受，是防止移植排斥反应、使移植物长期存活的理想方法。我们通过5 Gy全身照射(whole body irradiation, WBI)、骨髓细胞输注(bone marrow cells transfusion, BMT)、及环磷酰胺(cyclophosphamide, CP)腹腔注射，成功地诱导MHC完全不同的BALB/c(H-2d)和C57BL/6(H-2b)小鼠的皮肤移植耐受。本文欲探索一种非照射性的、较易于临床常规应用的移植耐受诱导方法， 为临床延长移植器官的存活、提高存活率提供一种简单易行的方法。
1 材料与方法
1.1 抗淋巴细胞血清的制备
, http://www.100md.com
根据小鼠脑细胞与T细胞具有共同抗原(Thy-1抗原)的特点，按Mishell和Shiigi的方法[1]制取兔抗小鼠淋巴细胞血清(antilymphocytic serum, ALS)。具体步骤如下：小鼠放血后取脑，每1.5个鼠脑加入1.5 ml平衡盐溶液，用玻璃组织匀浆器制成匀浆，将匀浆与同体积完全福氏佐剂制成乳剂。每1.5个鼠脑制成的抗原免疫一只家兔，分4点后腿肌肉注射。制取的抗血清用成年鼠的骨髓细胞进行吸收以去除种特异性抗体，活体染料摄入法进行细胞溶解活性测定，1∶128(体积比)稀释后特异性的细胞毒性为95%。
1.2 实验动物
8～12周龄雄性BALB/c(H-2d)小鼠与雌性C57BL/6(H-2b)(B6)小鼠分别作为皮肤移植的供、受体；雄性昆明鼠作为无关第三品系，用以检测移植耐受状态的特异性。以上动物及制备抗淋巴细胞血清用大白兔均由北京医科大学实验动物学部提供。
, 百拇医药
1.3 耐受诱导及皮肤移植的实验分组
作为皮肤移植受体的B6小鼠在移植前、后分别或同时接受如下处理：移植前3 d开始ALS 腹腔注射每天 0.5 ml连续3 d，；移植前1 d 5 Gy全身照射(WBI)；移植当天3×107供体骨髓细胞静脉输注(BMT)；皮肤移植后第2天腹腔注射环磷酰胺每kg体重150 mg(CP)。具体实验分组如下：第1组：无处理对照；第2组：WBI+BMC；第3组：ALS+WBI+BMC；第4组：ALS+BMC+CP。
1.4 移植物存活及受体细胞免疫状态检测
1.4.1 皮肤移植物存活情况的观察 皮肤移植后1周开始每日观察移植物的颜色、硬度、有无结痂、脱落及毛发生长。如皮片变硬或结痂脱落，则判定为移植排斥，红润、柔软或鼠毛生长则认为存活或耐受。
1.4.2 混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction, MLR) 于移植后30 d，每实验组各取3只B6小鼠，放血后处死，取脾，制成脾细胞悬液，调至每毫升2×107细胞，作为反应细胞。另取3只正常BALB/c和昆明鼠的脾，制备相同细胞数浓度的脾细胞悬液，作为刺激细胞。每毫升细胞悬液加入含0.5 mg.ml-1丝裂霉素C的Hanks溶液50 μl，以此处理刺激细胞和一个等分的反应细胞，以抑制其增殖。对照和实验培养均作3个复制培养。置37 ℃下5% (体积分数) CO2孵箱孵育72 h后，用MTT法检测细胞的增殖情况，即离心去上清后每孔加入用RPM1640溶液(不加血清和二巯基乙醇)配制成的1 mg.ml-1 MTT溶液50 μl，孵育3 h再次离心培养板，小心弃去上清，每孔加入异丙醇120 μl，震荡，使染料充分溶解。用ELISA阅读计采用600 nm波长测各孔光密度值，以实验组与对照组的光密度值之差作为各实验组的增值指标。
, 百拇医药
1.4.3 诱导迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity, DTH) 输骨髓后第30天，用Hanks液将BALB/c小鼠的脾细胞调至每毫升1×108，在各实验组C57小鼠腹股沟皮下注射1×107供体脾细胞(0.1 ml)，7 d后于右后脚掌注射1×107(50 μl)个相同的脾细胞，左后脚掌注射50 μl Hanks液，24 h后用游标卡尺测量两个脚掌的厚度，取二者之差作为DTH指标。
2 结果
2.1 移植物存活
小鼠皮肤移植物的存活情况如表1所示，第1组正常对照B6小鼠的皮肤移植物，在移植后第8天开始被排斥，第13天时全部皮肤移植物无一存活，平均存活10.6 d；第2组，当受者小鼠在5 Gy照射基础上，尾静脉输注3×107供体BMC，则移植物存活明显延长，移植后第13天才出现排斥反应，存活最长者达31 d，平均存活20.3 d，与第1组比较差异有显著性；第3组，皮肤移植受体小鼠在第2组基础上，于移植前连续应用ALS 3 d，移植物平均存活28.9 d，较第2组延长，但由于两组个体之间变异太大，经统计学处理差异没有显著性。第4组，当去除照射，将ALS与CP组合，移植物的存活与第2组相似，较第1组延长，平均存活期为23.5 d，与第2组比较差异没有显著性。在所有实验组中，移植的昆明鼠的皮肤均在12 d内被排斥。
, 百拇医药
2.2 混合淋巴细胞反应(MLR)
各组皮肤移植小鼠在移植30 d后的MLR结果如图1所示，所有进行耐受诱导的B6小鼠的脾细胞，其对丝裂霉素处理的BALB/c小鼠脾细胞的增殖反应均明显降低，尤其以第3组降低最显著，而对昆明鼠脾细胞的增殖反应与正常B6小鼠脾细胞对BALB/c脾细胞的增殖反应无明显差别。
2.3 迟发型超敏反应(DTH)
正常B6小鼠的对BALB/c脾细胞抗原的DTH非常明显，5只实验小鼠的右后足掌发红及肿胀明显，以两足掌厚度之差(mm)表示的DTH指数为0.36±0.04(
±s)。第2和第3组B6小鼠DTH反应引起的足掌肿胀明显减轻，其DTH指数分别为0.18±0.05和0.15±0.05(±s),对两组均数进行t检验，与第1组比较差异均有显著性(P<0.001)。但在第4组，DTH又有所增强，DTH指数为0.26±0.07，但仍低于正常对照组(P<0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
近年来，有些诱导移植耐受的方法，常涉及全身或淋巴组织照射，这些方法虽然有效，但临床不易接受。目前根据T细胞活化的“双信号”理论，应用阻断CD28/B7通路诱导移植耐受也取得了较好的效果[2]，但在目前国内条件下，临床大量使用CTLA4-Ig尚难推广。通过胸腺内注射抗原也在鼠类研究中取得肯定的效果[3]，但成年人胸腺退化，其应用前景尚待探索，同时，操作不便也限制了它的临床应用。
表1 不同方法处理小鼠的皮肤移植物存活时间(±s)
Table 1 The survival time of skin allografts
of differently treated mice (±s) Group
, 百拇医药
Treatment
n
t/d
1
Normal control
7
10.7±1.8
2
WBI+BMT
7
20.4±6.4
3
ALS+WBI+BMT
, 百拇医药
7
28.9±10.6
4
ALS+BMT+CP
7
23.6±7.2
*compared with normal control, P<0.01. There is no valuable difference among group 2, group 3 and group 4, P>0.10.
R-D, recipients to donors; R-T, recipients to the third part mice; 1, 2, 3, 4, represent different groups.
, 百拇医药
图1 皮肤移植小鼠对供体及无关品系小鼠的混合淋巴细胞反应
Figure 1 MLR of skin transplanted mice to donor and
third part mice spleen cells
在以前的研究中，我们应用5 Gy WBI后输入3×107供体BMC，并于其后2 d每千克体重注射150 mg CP，使BALB/c与B6小鼠间皮肤移植的存活明显延长，平均存活71 d左右，7只移植受体中有4只的皮肤移植物存活超过100 d。WBI是一种强烈的预处理措施，在临床上难以实施。为了探讨一种较为简单的预处理方案，以获得一定程度的耐受，本文将ALS与CP联合应用，配合输入供体的骨髓细胞，使移植物的存活时间明显延长，取得了与照射后输入供体骨髓相似的效果，表明这是一种有一定临床前景的耐受诱导方法。
, 百拇医药
环磷酰胺是一种临床常用的免疫抑制剂，Eto等[4]通过尾静脉注射108供体脾细胞，2 d后腹腔注射200 mg.kg-1环磷酰胺，诱导了部分MHC不同小鼠皮肤移植物的长期存活，但这种方法不能诱导MHC完全不同、次要组织相容性抗原(H)也不同小鼠间的皮肤移植耐受,其移植物的存活与对照组没有明显差别；他们还将此方法用于大鼠肾移植耐受的诱导，一部分肾移植物存活超过100 d。实验中所采用的BALB/c小鼠与C57BL/6小鼠性别不同，在两者之间诱导移植耐受同样既要跨越MHC完全不同的障碍，又受到次要组织相容性抗原(H-Y抗原)的影响，因此，需要给受体造成较深的免疫抑制状态，但应用ALS和CP以及BMT的非照射方法也使移植物存活明显延长，达到与应用照射的诱导方法相同的效果。能否通过进一步联合应用其它免疫抑制药物(如环孢素),加大BMT的量或多次进行BMT，达到诱导更加稳定的耐受状态的目的，以及相同的方法能否诱导部分MHC不同小鼠间的移植耐受，有待进一步研究。另外，皮肤移植物是器官和组织移植物中移植后较难存活的一种，在这种比较浅的免疫抑制状态下，也许能够诱导出稳定的对肝、肾、心等实质脏器的移植耐受。
, 百拇医药
目前在人类诱导耐受比较困难，预处理既要临床患者能够承受，又要获得深度耐受，如何解决这一问题是今后的研究方向。虽然移植耐受的最终目的是达到不应用免疫抑制药物而获得移植器官的长期存活，目前认为，现阶段在应用常规临床处理条件下通过诱导耐受提高移植物的存活率、延长存活时间，或降低免疫抑制药物的应用剂量以减少副作用，是比较现实的目标。
国家自然科学基金(39830340)重点项目资助课题。
参考文献
1 王德斌，张叔文，刘卓如.细胞免疫学方法选编.北京：人民卫生出版社，1986.467-482
2 Sayegh MS, Akalin E, Hancock WW, et al. CD28-B7 blockade after alloantigenic challenge in vivo inhibits Th1 cytokines but spares Th2. J Exp Med, 1995,181:1869-1874
, 百拇医药
3 Sayegh MH, Perico N, Imberti O, et al. Thymic recognition of class II histocompatibility complex allopeptides induces donor-specific unresponsiveness to renal allograft. Transplantation, 1993, 56: 461
4 Eto M, Nishimura Y, Matsuo K, et al. Prolongation of kidney graft survival by cyclophosphamide-induced tolerance in rats. J Urol, 1995, 153: 1693-1696
(1998-08-31收稿), http://www.100md.com
单位：苑学礼 郭应禄 北京医科大学第一医院泌尿外科泌尿外科研究所，北京 100034；宋娴媛 谢蜀生 免疫学系
关键词：皮肤移植；免疫耐受；移植物存活；辐射效应
北京医科大学学报990410 摘 要 目的：比较不同方法诱导移植耐受的效果，探讨有临床应用前景的非照射耐受诱导方法。方法：分别以主要组织相容性抗原(major histocompatibility complex, MHC)完全不同的雄性BALB/c和雌性C57BL/6小鼠作为皮肤移植的供体和受体，移植前对受体小鼠单独或联合应用5 Gy全身照射、0.1 ml抗淋巴细胞血清注射、3×107供体骨髓细胞静脉输注、每千克体重150 mg环磷酰胺腹腔注射。结果：各实验组的皮肤移植物存活时间均较对照组明显延长，混合淋巴细胞反应和迟发型超敏反应也表现为供体特异性降低。移植前应用抗淋巴细胞血清、骨髓输注和皮肤移植后注射环磷酰胺可以延长移植物存活时间，平均存活23.6 d，取得与全身照射后输入供体骨髓相似的耐受诱导效果(平均20.4 d)。结论：采用比较温和的非照射的预处理方法，在不应用免疫抑制剂的情况下，也可获得一定程度的免疫耐受，达到延长移植物存活的目的。
, http://www.100md.com
中国图书资料分类法分类号 R659-332
Transplantation tolerance to mice skin allografts induced
with irradiate and non-irradiate protocols
YUAN Xue-Li＃, SONG Xian-Yuan, XIE Shu-Sheng, GUO Ying-Lu
(#Institute of Urology, the First Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100034)
ABSTRACT Objective: To establish a transplantation tolerance induction protocol which might be applied in clinical situation in the future. Methods: Fully MHC-mismatched male BALB/c (H-2d) and female C57BL/6 (B6, H-2b) mice were used as skin transplantation donors and recipients, respectively. Before operation B6 mice were conditioned with 5 Gy whole body irradiation (WBI), 0.1 ml ALS (antilymphocytic serum)injection for three times, 3×107 donor bone marrow cells transfusion (BMT), 150 mg.kg-1 cyclophosphamide(CP) separately or combinatively. Results: When ALS was used combinatively with BMT and CP, the allograft survival was significantly prolonged, mean survival time was 23.6 days, just as the result of WBI+BMT induction. Conclusion: Transplantation tolerance can also be induced by non-irradiate pretreatment.
, 百拇医药
MeSH Skin transplantation Immune tolerance Graft survival/rad eff
诱导器官移植受体对供体器官特异性的移植耐受，是防止移植排斥反应、使移植物长期存活的理想方法。我们通过5 Gy全身照射(whole body irradiation, WBI)、骨髓细胞输注(bone marrow cells transfusion, BMT)、及环磷酰胺(cyclophosphamide, CP)腹腔注射，成功地诱导MHC完全不同的BALB/c(H-2d)和C57BL/6(H-2b)小鼠的皮肤移植耐受。本文欲探索一种非照射性的、较易于临床常规应用的移植耐受诱导方法， 为临床延长移植器官的存活、提高存活率提供一种简单易行的方法。
1 材料与方法
1.1 抗淋巴细胞血清的制备
, http://www.100md.com
根据小鼠脑细胞与T细胞具有共同抗原(Thy-1抗原)的特点，按Mishell和Shiigi的方法[1]制取兔抗小鼠淋巴细胞血清(antilymphocytic serum, ALS)。具体步骤如下：小鼠放血后取脑，每1.5个鼠脑加入1.5 ml平衡盐溶液，用玻璃组织匀浆器制成匀浆，将匀浆与同体积完全福氏佐剂制成乳剂。每1.5个鼠脑制成的抗原免疫一只家兔，分4点后腿肌肉注射。制取的抗血清用成年鼠的骨髓细胞进行吸收以去除种特异性抗体，活体染料摄入法进行细胞溶解活性测定，1∶128(体积比)稀释后特异性的细胞毒性为95%。
1.2 实验动物
8～12周龄雄性BALB/c(H-2d)小鼠与雌性C57BL/6(H-2b)(B6)小鼠分别作为皮肤移植的供、受体；雄性昆明鼠作为无关第三品系，用以检测移植耐受状态的特异性。以上动物及制备抗淋巴细胞血清用大白兔均由北京医科大学实验动物学部提供。
, 百拇医药
1.3 耐受诱导及皮肤移植的实验分组
作为皮肤移植受体的B6小鼠在移植前、后分别或同时接受如下处理：移植前3 d开始ALS 腹腔注射每天 0.5 ml连续3 d，；移植前1 d 5 Gy全身照射(WBI)；移植当天3×107供体骨髓细胞静脉输注(BMT)；皮肤移植后第2天腹腔注射环磷酰胺每kg体重150 mg(CP)。具体实验分组如下：第1组：无处理对照；第2组：WBI+BMC；第3组：ALS+WBI+BMC；第4组：ALS+BMC+CP。
1.4 移植物存活及受体细胞免疫状态检测
1.4.1 皮肤移植物存活情况的观察 皮肤移植后1周开始每日观察移植物的颜色、硬度、有无结痂、脱落及毛发生长。如皮片变硬或结痂脱落，则判定为移植排斥，红润、柔软或鼠毛生长则认为存活或耐受。
1.4.2 混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction, MLR) 于移植后30 d，每实验组各取3只B6小鼠，放血后处死，取脾，制成脾细胞悬液，调至每毫升2×107细胞，作为反应细胞。另取3只正常BALB/c和昆明鼠的脾，制备相同细胞数浓度的脾细胞悬液，作为刺激细胞。每毫升细胞悬液加入含0.5 mg.ml-1丝裂霉素C的Hanks溶液50 μl，以此处理刺激细胞和一个等分的反应细胞，以抑制其增殖。对照和实验培养均作3个复制培养。置37 ℃下5% (体积分数) CO2孵箱孵育72 h后，用MTT法检测细胞的增殖情况，即离心去上清后每孔加入用RPM1640溶液(不加血清和二巯基乙醇)配制成的1 mg.ml-1 MTT溶液50 μl，孵育3 h再次离心培养板，小心弃去上清，每孔加入异丙醇120 μl，震荡，使染料充分溶解。用ELISA阅读计采用600 nm波长测各孔光密度值，以实验组与对照组的光密度值之差作为各实验组的增值指标。
, 百拇医药
1.4.3 诱导迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity, DTH) 输骨髓后第30天，用Hanks液将BALB/c小鼠的脾细胞调至每毫升1×108，在各实验组C57小鼠腹股沟皮下注射1×107供体脾细胞(0.1 ml)，7 d后于右后脚掌注射1×107(50 μl)个相同的脾细胞，左后脚掌注射50 μl Hanks液，24 h后用游标卡尺测量两个脚掌的厚度，取二者之差作为DTH指标。
2 结果
2.1 移植物存活
小鼠皮肤移植物的存活情况如表1所示，第1组正常对照B6小鼠的皮肤移植物，在移植后第8天开始被排斥，第13天时全部皮肤移植物无一存活，平均存活10.6 d；第2组，当受者小鼠在5 Gy照射基础上，尾静脉输注3×107供体BMC，则移植物存活明显延长，移植后第13天才出现排斥反应，存活最长者达31 d，平均存活20.3 d，与第1组比较差异有显著性；第3组，皮肤移植受体小鼠在第2组基础上，于移植前连续应用ALS 3 d，移植物平均存活28.9 d，较第2组延长，但由于两组个体之间变异太大，经统计学处理差异没有显著性。第4组，当去除照射，将ALS与CP组合，移植物的存活与第2组相似，较第1组延长，平均存活期为23.5 d，与第2组比较差异没有显著性。在所有实验组中，移植的昆明鼠的皮肤均在12 d内被排斥。
, 百拇医药
2.2 混合淋巴细胞反应(MLR)
各组皮肤移植小鼠在移植30 d后的MLR结果如图1所示，所有进行耐受诱导的B6小鼠的脾细胞，其对丝裂霉素处理的BALB/c小鼠脾细胞的增殖反应均明显降低，尤其以第3组降低最显著，而对昆明鼠脾细胞的增殖反应与正常B6小鼠脾细胞对BALB/c脾细胞的增殖反应无明显差别。
2.3 迟发型超敏反应(DTH)
正常B6小鼠的对BALB/c脾细胞抗原的DTH非常明显，5只实验小鼠的右后足掌发红及肿胀明显，以两足掌厚度之差(mm)表示的DTH指数为0.36±0.04(
±s)。第2和第3组B6小鼠DTH反应引起的足掌肿胀明显减轻，其DTH指数分别为0.18±0.05和0.15±0.05(±s),对两组均数进行t检验，与第1组比较差异均有显著性(P<0.001)。但在第4组，DTH又有所增强，DTH指数为0.26±0.07，但仍低于正常对照组(P<0.05)。, 百拇医药
3 讨论
近年来，有些诱导移植耐受的方法，常涉及全身或淋巴组织照射，这些方法虽然有效，但临床不易接受。目前根据T细胞活化的“双信号”理论，应用阻断CD28/B7通路诱导移植耐受也取得了较好的效果[2]，但在目前国内条件下，临床大量使用CTLA4-Ig尚难推广。通过胸腺内注射抗原也在鼠类研究中取得肯定的效果[3]，但成年人胸腺退化，其应用前景尚待探索，同时，操作不便也限制了它的临床应用。
表1 不同方法处理小鼠的皮肤移植物存活时间(
±s)Table 1 The survival time of skin allografts
of differently treated mice (
±s) Group, 百拇医药
Treatment
n
t/d
1
Normal control
7
10.7±1.8
2
WBI+BMT
7
20.4±6.4
3
ALS+WBI+BMT
, 百拇医药
7
28.9±10.6
4
ALS+BMT+CP
7
23.6±7.2
*compared with normal control, P<0.01. There is no valuable difference among group 2, group 3 and group 4, P>0.10.
R-D, recipients to donors; R-T, recipients to the third part mice; 1, 2, 3, 4, represent different groups.
, 百拇医药
图1 皮肤移植小鼠对供体及无关品系小鼠的混合淋巴细胞反应
Figure 1 MLR of skin transplanted mice to donor and
third part mice spleen cells
在以前的研究中，我们应用5 Gy WBI后输入3×107供体BMC，并于其后2 d每千克体重注射150 mg CP，使BALB/c与B6小鼠间皮肤移植的存活明显延长，平均存活71 d左右，7只移植受体中有4只的皮肤移植物存活超过100 d。WBI是一种强烈的预处理措施，在临床上难以实施。为了探讨一种较为简单的预处理方案，以获得一定程度的耐受，本文将ALS与CP联合应用，配合输入供体的骨髓细胞，使移植物的存活时间明显延长，取得了与照射后输入供体骨髓相似的效果，表明这是一种有一定临床前景的耐受诱导方法。
, 百拇医药
环磷酰胺是一种临床常用的免疫抑制剂，Eto等[4]通过尾静脉注射108供体脾细胞，2 d后腹腔注射200 mg.kg-1环磷酰胺，诱导了部分MHC不同小鼠皮肤移植物的长期存活，但这种方法不能诱导MHC完全不同、次要组织相容性抗原(H)也不同小鼠间的皮肤移植耐受,其移植物的存活与对照组没有明显差别；他们还将此方法用于大鼠肾移植耐受的诱导，一部分肾移植物存活超过100 d。实验中所采用的BALB/c小鼠与C57BL/6小鼠性别不同，在两者之间诱导移植耐受同样既要跨越MHC完全不同的障碍，又受到次要组织相容性抗原(H-Y抗原)的影响，因此，需要给受体造成较深的免疫抑制状态，但应用ALS和CP以及BMT的非照射方法也使移植物存活明显延长，达到与应用照射的诱导方法相同的效果。能否通过进一步联合应用其它免疫抑制药物(如环孢素),加大BMT的量或多次进行BMT，达到诱导更加稳定的耐受状态的目的，以及相同的方法能否诱导部分MHC不同小鼠间的移植耐受，有待进一步研究。另外，皮肤移植物是器官和组织移植物中移植后较难存活的一种，在这种比较浅的免疫抑制状态下，也许能够诱导出稳定的对肝、肾、心等实质脏器的移植耐受。
, 百拇医药
目前在人类诱导耐受比较困难，预处理既要临床患者能够承受，又要获得深度耐受，如何解决这一问题是今后的研究方向。虽然移植耐受的最终目的是达到不应用免疫抑制药物而获得移植器官的长期存活，目前认为，现阶段在应用常规临床处理条件下通过诱导耐受提高移植物的存活率、延长存活时间，或降低免疫抑制药物的应用剂量以减少副作用，是比较现实的目标。
国家自然科学基金(39830340)重点项目资助课题。
参考文献
1 王德斌，张叔文，刘卓如.细胞免疫学方法选编.北京：人民卫生出版社，1986.467-482
2 Sayegh MS, Akalin E, Hancock WW, et al. CD28-B7 blockade after alloantigenic challenge in vivo inhibits Th1 cytokines but spares Th2. J Exp Med, 1995,181:1869-1874
, 百拇医药
3 Sayegh MH, Perico N, Imberti O, et al. Thymic recognition of class II histocompatibility complex allopeptides induces donor-specific unresponsiveness to renal allograft. Transplantation, 1993, 56: 461
4 Eto M, Nishimura Y, Matsuo K, et al. Prolongation of kidney graft survival by cyclophosphamide-induced tolerance in rats. J Urol, 1995, 153: 1693-1696
(1998-08-31收稿), http://www.100md.com