改良神经髓鞘的依来铬氰R染色法
作者：郭瑞华 童淑兰 殷梅英
单位：郭瑞华(上海第六人民医院四肢显微外科研究所 200233)；童淑兰(上海市公利医院病理科)；殷梅英(上海市公利医院病理科)
关键词：
中华病理学杂志000125 为研究周围神经髓鞘被覆状态，我们经常要进行髓鞘染色，在实践中，我们摸索了一种便捷、有效、经济的染色方法，介绍如下。
一、材料和方法
1.取材、固定、切片：取大鼠正常坐骨神经组织，4%甲醛生理盐水固定。石蜡切片6～10 μm厚，60℃左右烘箱烘3～4 d。
2.试剂配制：(1)依来铬氰R液：依来铬氰R 0.2 g，蒸馏水96 ml，10%铁明矾液4 ml，浓硫酸0.5 ml。(2)苦味酸丽春红S液：1%丽春红S水溶液10 ml，苦味酸饱和水溶液86 ml，1%醋酸水4 ml。
3.染色程序：(1)石蜡切片，常规脱蜡水洗，吸干或烘干切片。(2)依来铬氰R液染10～20 min。(3)充分水洗3次。(4)10%铁明矾液分化，光镜下控制，分化到灰质、间质分清止，神经纤维束与外膜清晰区分，直至细胞核几乎看不见。(5)充分水洗。(6)如有需要可进行对比染色，苦味酸丽春红S液染3～5 min，不水洗。(7)常规脱水、透明、封片。
二、结果
神经髓鞘亮蓝色，细胞核呈浅蓝至几乎不染色，胶原纤维呈红色到橙红色，肌肉呈黄色到橙黄色。
三、讨论
这种染色法快速、简便、经济、鲜明。试剂依来铬氰R液及苦味酸丽春红S液配制后，放入普通冰箱内4℃左右，即可长期保存。作者曾使用配制3～4年的染液染色，效果仍然很满意。依来铬氰R液染色可用滴染法，即用吸管吸取染液滴于切片上1～2滴，覆盖组织10～20 min即可，染色用过染液可抛弃也可回收重复使用，重复使用的液体，染色时其染色时间相对延长或10%铁明矾液分化时间相应缩短，在光镜下控制分化程度。染色程序中第(4)步分化是最关键一步，分化不够，髓鞘难以与周围组织分清界限，分化过度髓鞘着色不全均可影响神经髓鞘量及有髓神经纤维的计量及其诊断，所以必须在光镜下进行观察控制其合适的分化程度，并应用正常神经切片进行对照染色效果更佳。苦味酸丽春红S液染色使胶原纤维呈鲜红色，肌肉呈黄色。用其染液进行对比染色后，胶原纤维呈橙黄色至红色，背景明亮，易于观察，染色方法也同依来铬氰R液染色点滴法，其染色后试剂可回收反复使用。应注意其染色后不要水洗，直接进入常规脱水、透明、封片；其组织切片在脱水乙醇中时间要短，这样可造成更加鲜明的背景。
收稿日期：1999-04-02, http://www.100md.com
单位：郭瑞华(上海第六人民医院四肢显微外科研究所 200233)；童淑兰(上海市公利医院病理科)；殷梅英(上海市公利医院病理科)
关键词：
中华病理学杂志000125 为研究周围神经髓鞘被覆状态，我们经常要进行髓鞘染色，在实践中，我们摸索了一种便捷、有效、经济的染色方法，介绍如下。
一、材料和方法
1.取材、固定、切片：取大鼠正常坐骨神经组织，4%甲醛生理盐水固定。石蜡切片6～10 μm厚，60℃左右烘箱烘3～4 d。
2.试剂配制：(1)依来铬氰R液：依来铬氰R 0.2 g，蒸馏水96 ml，10%铁明矾液4 ml，浓硫酸0.5 ml。(2)苦味酸丽春红S液：1%丽春红S水溶液10 ml，苦味酸饱和水溶液86 ml，1%醋酸水4 ml。
3.染色程序：(1)石蜡切片，常规脱蜡水洗，吸干或烘干切片。(2)依来铬氰R液染10～20 min。(3)充分水洗3次。(4)10%铁明矾液分化，光镜下控制，分化到灰质、间质分清止，神经纤维束与外膜清晰区分，直至细胞核几乎看不见。(5)充分水洗。(6)如有需要可进行对比染色，苦味酸丽春红S液染3～5 min，不水洗。(7)常规脱水、透明、封片。
二、结果
神经髓鞘亮蓝色，细胞核呈浅蓝至几乎不染色，胶原纤维呈红色到橙红色，肌肉呈黄色到橙黄色。
三、讨论
这种染色法快速、简便、经济、鲜明。试剂依来铬氰R液及苦味酸丽春红S液配制后，放入普通冰箱内4℃左右，即可长期保存。作者曾使用配制3～4年的染液染色，效果仍然很满意。依来铬氰R液染色可用滴染法，即用吸管吸取染液滴于切片上1～2滴，覆盖组织10～20 min即可，染色用过染液可抛弃也可回收重复使用，重复使用的液体，染色时其染色时间相对延长或10%铁明矾液分化时间相应缩短，在光镜下控制分化程度。染色程序中第(4)步分化是最关键一步，分化不够，髓鞘难以与周围组织分清界限，分化过度髓鞘着色不全均可影响神经髓鞘量及有髓神经纤维的计量及其诊断，所以必须在光镜下进行观察控制其合适的分化程度，并应用正常神经切片进行对照染色效果更佳。苦味酸丽春红S液染色使胶原纤维呈鲜红色，肌肉呈黄色。用其染液进行对比染色后，胶原纤维呈橙黄色至红色，背景明亮，易于观察，染色方法也同依来铬氰R液染色点滴法，其染色后试剂可回收反复使用。应注意其染色后不要水洗，直接进入常规脱水、透明、封片；其组织切片在脱水乙醇中时间要短，这样可造成更加鲜明的背景。
收稿日期：1999-04-02, http://www.100md.com