妊娠期尖锐湿疣人乳头状瘤病毒检测及药物流产时病变的变化
作者：胡丽娜 梁宪生 刘维超 顾美礼
单位：400010 重庆医科大学第二医院妇产科(胡丽娜，刘维超，顾美礼)，计划生育系(梁宪生)
关键词：
中华妇产科杂志980318 女性生殖道尖锐湿疣是由人乳头状瘤病毒(human papilloma virus, HPV)感染引起的性传播疾病，与女性生殖道癌密切相关。妊娠期感染HPV对母儿均有严重损害。本研究采用聚合酶链反应(PCR)技术检测妊娠期尖锐湿疣患者的湿疣组织、宫颈分泌物和药物流产后胚胎组织的HPV-DNA，并观察用米非司酮后湿疣病变部位的变化。
一、资料和方法
1.病例选择与取材：选择1994年9月至1995年8月来我院门诊就诊的妊娠期尖锐湿疣患者21例，年龄20～29岁。所有尖锐湿疣病例均在妇科检查时发现，并经组织病理学检查确诊。其临床表现为白带增多、外阴瘙痒，伴外阴、阴道、宫颈等部位生长毛刺状、鸡冠状或菜花状疣状物。取患者疣状物最明显处的组织约20 mg、宫颈分泌物约0.5 ml，放入Eppendorff管内，置-40℃冰箱保存。取材后即给患者服米非司酮，每天早晚各25 mg，口服3天，第4天加米索前列醇0.4 mg。流产后立即取流产物约40 mg置于Eppendorff管内，-40℃冰箱保存。开始用药后每天肉眼观察尖锐湿疣病变部位的变化，时间持续1周左右。
, 百拇医药
2.检测方法：(1) DNA提取：组织匀浆后，经蛋白酶K(0.5 mg/ml)消化裂解，常规酚-氯仿抽提，冰无水乙醇沉淀后溶于40 μl Tris-EDTA (TE)缓冲液(pH 7.4)备用。宫颈分泌物用TE缓冲液稀释后离心沉淀，加50 μl裂解液(0.1 mol NaOH, 2 mol NaCl)振荡裂解后离心沉淀，再洗涤两次，取沉淀物备用。(2)PCR检测：提取所得的DNA溶液放入含6、11、16、18型的HPV公共型引物(HPVs-primer，美国PE公司生产)、脱氧三磷酸核苷混合液、MgCl2、耐热DNA聚合酶(华美生物公司产品)反应体系内，总反应体系50 μl，在DNA扩增仪(Thermal 480型，美国PE公司产)内扩增。分别设立阴性、阳性对照。最后将扩增产物加入5%琼脂糖凝胶(含溴化乙啶)中电泳，用紫外光透视仪观察结果。
二、结果
1.妊娠期尖锐湿疣患者的湿疣组织、宫颈分泌物和流产胚胎组织HPVs-DNA阳性检出率：见附表。
, 百拇医药
附表 湿疣组织、宫颈分泌物和流产
胚胎组织的HPVs-DNA检出率 类别
检测
例数
阳性
例数
检出率
(%)
湿疣组织
21
19
90.5
宫颈分泌物
, 百拇医药
21
13
61.9
流产胚胎
21
11
52.4
2.妊娠期尖锐湿疣患者服用米非司酮后湿疣病变部位的变化：用药1周内，疣状物出现不同程度脱落，出现全部脱落者4例，大部分脱落者6例，小部分脱落者5例，无脱落者6例。以菜花状疣状物脱落较明显，而毛刺状疣状物脱落较少。
三、讨论
HPV感染不仅可致尖锐湿疣，而且与宫颈癌、宫颈上皮内瘤样变等都有密切关系，因此这些病变都称为HPV相关病变[1]。HPV有多种亚型，其中至少有27种有潜在致瘤性[2]。不同亚型可引起不同的生殖道疾病，如HPV 6与11型主要与尖锐湿疣有关，HPV 16与18型主要与宫颈癌、宫颈上皮内瘤样变有关。而同一种HPV感染疾病可检出不同的HPV亚型[1]。因此，我们采用含6与11型、16与18型亚型的公共型引物检测患者的湿疣组织、宫颈分泌物和流产胚胎组织HPVs-DNA。结果显示，三类样品中均有不同程度的HPVs DNA阳性率，提示，妊娠期HPV感染可能引起胎儿宫内感染。以前多认为通过产道是胎儿感染的主要途径，但剖宫产并不能阻止HPV母婴传播。因此，Armbruster-Moraes[2]认为，HPV母胎传播可由孕妇病毒血症引起，但宫颈部位的HPV感染也可直接传播至宫腔内。
, http://www.100md.com
研究表明，妊娠妇女比非妊娠期妇女更易感染HPV，其原因可能是激素调控增高了生殖细胞对HPV的易感性[3]。实验表明，在孕酮或糖皮质激素作用条件下，宫颈细胞HPV 16 E6及E7癌基因出现高诱导水平表达，而抗孕酮药物米非司酮能使该基因受到抑制[4，5]。我们发现，妊娠期尖锐湿疣患者用米非司酮药物流产后出现了不同程度的疣状物脱落现象。推测这可能与生殖道尖锐湿疣组织为激素依赖性组织有关。由于米非司酮的抗孕酮作用导致血和靶器官孕激素水平下降，从而抑制HPV对孕激素的依赖性表达，使疣状组织萎缩、坏死、脱落。这一现象只是本研究中的初步观察，很多问题有待于深入研究，如湿疣组织脱落后是否会再度复发；这种脱落是米非司酮的直接或间接作用，还是与妊娠时内环境改变有关；这种脱落是否与不同亚型HPV感染有关等。参考文献
1 郝焕峰.人乳头瘤病毒感染与妇科疾病.国外医学妇幼保健分册，1996，7：28-31.
, 百拇医药
2 Ambruster-Moraes E. Presence of human papillomavirus DNA in aminotic fluids of pregnant women with cervical cesions. Gynecol Oncol, 1994, 54:152-158.
3 Patsner B, Baker DA, Orr JW Jr. Human papillomavirus genital tract infections during pregnancy. Clin Obstet Gynecol, 1990, 33:258-267.
4 Chan WK, Klock G, Bernard HU. Progesterone and glucocorticoid response elements occur in the long control regions of several human papillomaviruses involved in anogenital neoplasia. J Virol, 1989, 63:3261-3269.
5 Mittal R, Tsatsumi K, Pater A, et al. Human papillomavirus type 16 expression in cervical kerationcytes: role of progesterone and glucocorticoid hormones. Obstet Gynecol, 1993, 81:5-12.
(收稿：1997-03-13 修回：1997-10-20), 百拇医药
单位：400010 重庆医科大学第二医院妇产科(胡丽娜，刘维超，顾美礼)，计划生育系(梁宪生)
关键词：
中华妇产科杂志980318 女性生殖道尖锐湿疣是由人乳头状瘤病毒(human papilloma virus, HPV)感染引起的性传播疾病，与女性生殖道癌密切相关。妊娠期感染HPV对母儿均有严重损害。本研究采用聚合酶链反应(PCR)技术检测妊娠期尖锐湿疣患者的湿疣组织、宫颈分泌物和药物流产后胚胎组织的HPV-DNA，并观察用米非司酮后湿疣病变部位的变化。
一、资料和方法
1.病例选择与取材：选择1994年9月至1995年8月来我院门诊就诊的妊娠期尖锐湿疣患者21例，年龄20～29岁。所有尖锐湿疣病例均在妇科检查时发现，并经组织病理学检查确诊。其临床表现为白带增多、外阴瘙痒，伴外阴、阴道、宫颈等部位生长毛刺状、鸡冠状或菜花状疣状物。取患者疣状物最明显处的组织约20 mg、宫颈分泌物约0.5 ml，放入Eppendorff管内，置-40℃冰箱保存。取材后即给患者服米非司酮，每天早晚各25 mg，口服3天，第4天加米索前列醇0.4 mg。流产后立即取流产物约40 mg置于Eppendorff管内，-40℃冰箱保存。开始用药后每天肉眼观察尖锐湿疣病变部位的变化，时间持续1周左右。
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2.检测方法：(1) DNA提取：组织匀浆后，经蛋白酶K(0.5 mg/ml)消化裂解，常规酚-氯仿抽提，冰无水乙醇沉淀后溶于40 μl Tris-EDTA (TE)缓冲液(pH 7.4)备用。宫颈分泌物用TE缓冲液稀释后离心沉淀，加50 μl裂解液(0.1 mol NaOH, 2 mol NaCl)振荡裂解后离心沉淀，再洗涤两次，取沉淀物备用。(2)PCR检测：提取所得的DNA溶液放入含6、11、16、18型的HPV公共型引物(HPVs-primer，美国PE公司生产)、脱氧三磷酸核苷混合液、MgCl2、耐热DNA聚合酶(华美生物公司产品)反应体系内，总反应体系50 μl，在DNA扩增仪(Thermal 480型，美国PE公司产)内扩增。分别设立阴性、阳性对照。最后将扩增产物加入5%琼脂糖凝胶(含溴化乙啶)中电泳，用紫外光透视仪观察结果。
二、结果
1.妊娠期尖锐湿疣患者的湿疣组织、宫颈分泌物和流产胚胎组织HPVs-DNA阳性检出率：见附表。
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附表 湿疣组织、宫颈分泌物和流产
胚胎组织的HPVs-DNA检出率 类别
检测
例数
阳性
例数
检出率
(%)
湿疣组织
21
19
90.5
宫颈分泌物
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21
13
61.9
流产胚胎
21
11
52.4
2.妊娠期尖锐湿疣患者服用米非司酮后湿疣病变部位的变化：用药1周内，疣状物出现不同程度脱落，出现全部脱落者4例，大部分脱落者6例，小部分脱落者5例，无脱落者6例。以菜花状疣状物脱落较明显，而毛刺状疣状物脱落较少。
三、讨论
HPV感染不仅可致尖锐湿疣，而且与宫颈癌、宫颈上皮内瘤样变等都有密切关系，因此这些病变都称为HPV相关病变[1]。HPV有多种亚型，其中至少有27种有潜在致瘤性[2]。不同亚型可引起不同的生殖道疾病，如HPV 6与11型主要与尖锐湿疣有关，HPV 16与18型主要与宫颈癌、宫颈上皮内瘤样变有关。而同一种HPV感染疾病可检出不同的HPV亚型[1]。因此，我们采用含6与11型、16与18型亚型的公共型引物检测患者的湿疣组织、宫颈分泌物和流产胚胎组织HPVs-DNA。结果显示，三类样品中均有不同程度的HPVs DNA阳性率，提示，妊娠期HPV感染可能引起胎儿宫内感染。以前多认为通过产道是胎儿感染的主要途径，但剖宫产并不能阻止HPV母婴传播。因此，Armbruster-Moraes[2]认为，HPV母胎传播可由孕妇病毒血症引起，但宫颈部位的HPV感染也可直接传播至宫腔内。
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研究表明，妊娠妇女比非妊娠期妇女更易感染HPV，其原因可能是激素调控增高了生殖细胞对HPV的易感性[3]。实验表明，在孕酮或糖皮质激素作用条件下，宫颈细胞HPV 16 E6及E7癌基因出现高诱导水平表达，而抗孕酮药物米非司酮能使该基因受到抑制[4，5]。我们发现，妊娠期尖锐湿疣患者用米非司酮药物流产后出现了不同程度的疣状物脱落现象。推测这可能与生殖道尖锐湿疣组织为激素依赖性组织有关。由于米非司酮的抗孕酮作用导致血和靶器官孕激素水平下降，从而抑制HPV对孕激素的依赖性表达，使疣状组织萎缩、坏死、脱落。这一现象只是本研究中的初步观察，很多问题有待于深入研究，如湿疣组织脱落后是否会再度复发；这种脱落是米非司酮的直接或间接作用，还是与妊娠时内环境改变有关；这种脱落是否与不同亚型HPV感染有关等。参考文献
1 郝焕峰.人乳头瘤病毒感染与妇科疾病.国外医学妇幼保健分册，1996，7：28-31.
, 百拇医药
2 Ambruster-Moraes E. Presence of human papillomavirus DNA in aminotic fluids of pregnant women with cervical cesions. Gynecol Oncol, 1994, 54:152-158.
3 Patsner B, Baker DA, Orr JW Jr. Human papillomavirus genital tract infections during pregnancy. Clin Obstet Gynecol, 1990, 33:258-267.
4 Chan WK, Klock G, Bernard HU. Progesterone and glucocorticoid response elements occur in the long control regions of several human papillomaviruses involved in anogenital neoplasia. J Virol, 1989, 63:3261-3269.
5 Mittal R, Tsatsumi K, Pater A, et al. Human papillomavirus type 16 expression in cervical kerationcytes: role of progesterone and glucocorticoid hormones. Obstet Gynecol, 1993, 81:5-12.
(收稿：1997-03-13 修回：1997-10-20), 百拇医药