子宫颈癌人乳头状瘤病毒16及18型感染与多种癌基因产物表达的关系
作者：任占平 石 陈蔚麟 凌艳娟 唐德艳 胡世红
单位：545001 广西，柳州市第一人民医院病理科
关键词：
中华妇产科杂志980317 为探讨人乳头状瘤病毒(HPV)16及18型感染与多癌基因激活的关系，我们采用原位杂交和免疫组化技术对宫颈癌组织中的HPV16及18型DNA、E6蛋白和多种癌基因或抑癌基因产物表达进行了检测，结果报道如下。
一、材料和方法
1.对象：自1990年1月至1995年12月我科收集本地区宫颈鳞状细胞癌及宫颈上皮内瘤变(CIN)组织标本共53例，其中高分化鳞癌5例，中分化鳞癌42例，低分化鳞癌4例。CIN2级2例。随机取同期手术切除慢性宫颈炎组织25例，为对照组。
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2.方法：(1)SP法免疫组化检测：SP试剂盒及p53,P21ras, c-myc单抗和c-erbB2多抗为Zymed公司产品。HPV16、18型E6单抗为Santa Cruz公司产品，免疫组化染色按参考文献[1，2]操作，用已知结肠癌和宫颈癌阳性标本作阳性对照，以PBS液取代第一抗体作阴性对照。(2)原位杂交检测：HPV16、18型DNA原位杂交试剂盒由解放军总医院分子病理室提供并按试剂盒说明书操作，以无探针杂交液作阴性对照。(3)阳性结果判断：E6、p53、c-myc以核内，而P21ras以胞浆及胞膜内侧、c-erbB2以胞膜出现棕黄色颗粒为阳性。根据着色强度及范围分为弱阳性(+)：阳性细胞数<10%，浅黄色；中度阳性(++)：阳性细胞数10～50%，棕黄色；强阳性(+++)：阳性细胞数>50%，棕褐色。原位杂交以核内出现紫蓝色颗粒为阳性。
3.统计学方法：采用χ2检验。
二、结果
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1.HPV16及18型DNA、E6蛋白阳性：宫颈癌中HPV16、18型DNA阳性为70.5%(36/51)，其中HPV16型阳性24例，HPV18型阳性3例，HPV16和18型双阳性9例，而CIN组和对照组均为阴性。E6蛋白在癌组织、CIN和对照组中的阳性分别为72.5%(37/51)、100.0%(2/2)和12.0%(3/25)。宫颈癌中HPV16型DNA及E6蛋白阳性率与对照组相比，差异有显著性(P<0.01)。此外，宫颈癌中HPV16、18型DNA原位杂交和E6免疫组化两种检测方法的联合检出率为76.4%(39/51)。其中34例显示DNA与E6呈双阳性表达，两者阳性率之间差异无显著性(P>0.05)。在26例有HPV感染特征的挖空细胞样癌细胞核中，18例显示E6阳性。10例癌旁上皮伴有CIN 2级者，8例显示E6强阳性；而对照组3例E6阳性颗粒仅在少许正常上皮基底层细胞核内。
2.HPV16、18型与多种癌基因产物表达的关系：3种癌基因产物检测的结果见附表。51例宫颈癌中，39例HPV16、18 DNA及E6阳性中同时伴有P21ras、c-erbB2和c-myc阳性者，分别为36例、32例和33例。经统计学处理，HPV与3种癌基因产物的阳性表达均具显著相关性(P<0.01)。另外，在HPV阳性中同时伴有P21ras+c-erbB2+c-myc阳性者占64.1%(25/39)，而对照组中无同时阳性表达的现象。
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3.HPV与p53阳性的关系：51例宫颈癌中p53阳性率为49.0%(25/51)，其中24例(96.0%)p53与E6呈双阳性，58.3%(14/24)显示二者阳性着色似表达在同一区域同一胞核内，即E6阳性细胞p53也显示阳性(连续切片)。2例CIN 2级中，1例E6及p53双阳性者也显示类似改变。
三、讨论
以往的研究认为：在HPV阳性的宫颈癌，癌变主要为E6、p53结合致p53降解、灭活所致；而在HPV阴性中则为p53基因的突变[3]。近年来的研究认为：除HPV16、18型的E6蛋白特异性地与野生型p53结合并在E6相关蛋白(AP)参与下，通过依赖于辅酶的蛋白水解系统致p53降解、灭活外，HPV还可经插入等方式整合到人染色体的某一位点致p53突变[3，4]。因而，HPV16、18感染后通过E6至p53灭活或突变，使其不能诱导细胞生长停滞和启动凋亡，从而成为HPV感染后宫颈癌变的关键步骤。本研究结果显示p53阳性率处于一个较高的水平，可能与我们采用敏感性较高的SP免疫组化法有关。我们认为：E6单抗是诊断HPV感染的良好标记，E6与p53的联合检测，或许有可能作为宫颈癌早期预测、早期诊断的形态学观察指标。
, 百拇医药
附表 宫颈炎与宫颈癌组织中P21ras、c-erbB2及c-myc的检测结果 类 别
例数
P21ras
阳性率(%)
c-erbB-2
阳性率(%)
c-myc
阳性率(%)
-
+
++
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-
+
++
+++
-
+
++
+++
慢性宫颈炎
25
24
0
1
, 百拇医药
0
4.00
25
0
0
0
0.00
25
0
0
0
0.00
宫颈癌
51
, http://www.100md.com
9
1
25
16
82.35*
14
2
18
17
72.54*
12
17
13
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9
76.47*
*与慢性宫颈炎比较，P<0.01参考文献
1 施作榕.链霉菌亲生物素蛋白-生物素酶标免疫组化染色法的初步研究.中国免疫学杂志，1986，2：169-171.
2 任占平，石，陈蔚麟，等.HPV16、18及E6蛋白与P21ras、p53在食管癌组织中表达.临床与实验病理学杂志，1996，12：203-205.
3 Herrington CS. Human papillomaviruses and cervical neoplasia: interaction of HPV with other factors. J Clin Pathol, 1995, 48:1-6.
4 笪冀平，胡益云，陈乐真，等.肺癌人乳头瘤病毒感染与p53基因突变的研究.中华肿瘤杂志，1996，18：27-29.
(收稿：1997-04-28 修回：1997-12-24), 百拇医药
单位：545001 广西，柳州市第一人民医院病理科
关键词：
中华妇产科杂志980317 为探讨人乳头状瘤病毒(HPV)16及18型感染与多癌基因激活的关系，我们采用原位杂交和免疫组化技术对宫颈癌组织中的HPV16及18型DNA、E6蛋白和多种癌基因或抑癌基因产物表达进行了检测，结果报道如下。
一、材料和方法
1.对象：自1990年1月至1995年12月我科收集本地区宫颈鳞状细胞癌及宫颈上皮内瘤变(CIN)组织标本共53例，其中高分化鳞癌5例，中分化鳞癌42例，低分化鳞癌4例。CIN2级2例。随机取同期手术切除慢性宫颈炎组织25例，为对照组。
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2.方法：(1)SP法免疫组化检测：SP试剂盒及p53,P21ras, c-myc单抗和c-erbB2多抗为Zymed公司产品。HPV16、18型E6单抗为Santa Cruz公司产品，免疫组化染色按参考文献[1，2]操作，用已知结肠癌和宫颈癌阳性标本作阳性对照，以PBS液取代第一抗体作阴性对照。(2)原位杂交检测：HPV16、18型DNA原位杂交试剂盒由解放军总医院分子病理室提供并按试剂盒说明书操作，以无探针杂交液作阴性对照。(3)阳性结果判断：E6、p53、c-myc以核内，而P21ras以胞浆及胞膜内侧、c-erbB2以胞膜出现棕黄色颗粒为阳性。根据着色强度及范围分为弱阳性(+)：阳性细胞数<10%，浅黄色；中度阳性(++)：阳性细胞数10～50%，棕黄色；强阳性(+++)：阳性细胞数>50%，棕褐色。原位杂交以核内出现紫蓝色颗粒为阳性。
3.统计学方法：采用χ2检验。
二、结果
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1.HPV16及18型DNA、E6蛋白阳性：宫颈癌中HPV16、18型DNA阳性为70.5%(36/51)，其中HPV16型阳性24例，HPV18型阳性3例，HPV16和18型双阳性9例，而CIN组和对照组均为阴性。E6蛋白在癌组织、CIN和对照组中的阳性分别为72.5%(37/51)、100.0%(2/2)和12.0%(3/25)。宫颈癌中HPV16型DNA及E6蛋白阳性率与对照组相比，差异有显著性(P<0.01)。此外，宫颈癌中HPV16、18型DNA原位杂交和E6免疫组化两种检测方法的联合检出率为76.4%(39/51)。其中34例显示DNA与E6呈双阳性表达，两者阳性率之间差异无显著性(P>0.05)。在26例有HPV感染特征的挖空细胞样癌细胞核中，18例显示E6阳性。10例癌旁上皮伴有CIN 2级者，8例显示E6强阳性；而对照组3例E6阳性颗粒仅在少许正常上皮基底层细胞核内。
2.HPV16、18型与多种癌基因产物表达的关系：3种癌基因产物检测的结果见附表。51例宫颈癌中，39例HPV16、18 DNA及E6阳性中同时伴有P21ras、c-erbB2和c-myc阳性者，分别为36例、32例和33例。经统计学处理，HPV与3种癌基因产物的阳性表达均具显著相关性(P<0.01)。另外，在HPV阳性中同时伴有P21ras+c-erbB2+c-myc阳性者占64.1%(25/39)，而对照组中无同时阳性表达的现象。
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3.HPV与p53阳性的关系：51例宫颈癌中p53阳性率为49.0%(25/51)，其中24例(96.0%)p53与E6呈双阳性，58.3%(14/24)显示二者阳性着色似表达在同一区域同一胞核内，即E6阳性细胞p53也显示阳性(连续切片)。2例CIN 2级中，1例E6及p53双阳性者也显示类似改变。
三、讨论
以往的研究认为：在HPV阳性的宫颈癌，癌变主要为E6、p53结合致p53降解、灭活所致；而在HPV阴性中则为p53基因的突变[3]。近年来的研究认为：除HPV16、18型的E6蛋白特异性地与野生型p53结合并在E6相关蛋白(AP)参与下，通过依赖于辅酶的蛋白水解系统致p53降解、灭活外，HPV还可经插入等方式整合到人染色体的某一位点致p53突变[3，4]。因而，HPV16、18感染后通过E6至p53灭活或突变，使其不能诱导细胞生长停滞和启动凋亡，从而成为HPV感染后宫颈癌变的关键步骤。本研究结果显示p53阳性率处于一个较高的水平，可能与我们采用敏感性较高的SP免疫组化法有关。我们认为：E6单抗是诊断HPV感染的良好标记，E6与p53的联合检测，或许有可能作为宫颈癌早期预测、早期诊断的形态学观察指标。
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附表 宫颈炎与宫颈癌组织中P21ras、c-erbB2及c-myc的检测结果 类 别
例数
P21ras
阳性率(%)
c-erbB-2
阳性率(%)
c-myc
阳性率(%)
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慢性宫颈炎
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4.00
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宫颈癌
51
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9
1
25
16
82.35*
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72.54*
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*与慢性宫颈炎比较，P<0.01参考文献
1 施作榕.链霉菌亲生物素蛋白-生物素酶标免疫组化染色法的初步研究.中国免疫学杂志，1986，2：169-171.
2 任占平，石，陈蔚麟，等.HPV16、18及E6蛋白与P21ras、p53在食管癌组织中表达.临床与实验病理学杂志，1996，12：203-205.
3 Herrington CS. Human papillomaviruses and cervical neoplasia: interaction of HPV with other factors. J Clin Pathol, 1995, 48:1-6.
4 笪冀平，胡益云，陈乐真，等.肺癌人乳头瘤病毒感染与p53基因突变的研究.中华肿瘤杂志，1996，18：27-29.
(收稿：1997-04-28 修回：1997-12-24), 百拇医药