输卵管性不孕与沙眼衣原体、淋病双球菌及解脲脲原体感染的关系
作者：陆静 梁占光 韩字研
单位：610031 成都市第三人民医院妇产科(陆静)；华西医科大学附属第二医院妇产科(梁占光，韩字研)
关键词：
中华妇产科杂志980620 国内针对沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)对不孕影响的研究大多数是基于血清学或对宫颈感染的调查，而输卵管感染是导致不孕的一个重要原因，本研究应用多聚酶链反应(PCR)法对不孕妇女输卵管的CT、UU和淋病双球菌(NGH)的感染情况进行分析。
一、资料和方法
1.研究对象：123例，来源于华西医科大学附属第二医院1995年9月至1996年3月因原发和继发不孕接受手术治疗的病人(不孕组)。符合以下标准：夫妇有正常性生活，未采取任何避孕措施而未妊娠至少两年以上，男方精液检查正常，手术证实为盆腔结核者除外。年龄22～38岁，平均28.2岁，按术中发现，病变为单纯输卵管与卵巢或周围其他组织粘连42例，输卵管阻塞或积水65例，子宫内膜异位症合并上述两种病变之一的16例。123例均进行了输卵管CT、NGH的检测，其中66例进行了UU的检测。正常妊娠对照源于同期60例足月妊娠行剖宫产的妇女(对照组)，年龄21～32岁，平均26.9岁，均作了输卵管CT、NGH检测，其中34例作了UU检测。
, 百拇医药
2.标本采集：在不孕病人行分离粘连手术中及正常孕妇剖宫产术中，分别用一个棉拭子插入左右侧输卵管伞端约0.5 cm，旋转数秒后抽出，置入装有1ml无菌生理盐水的离心管中充分洗涤后挤干，拭子弃去，浸出液于4℃保存备检。
3.CT、NGH及UU DNA的检测：采用PCR法，(1)标本处理及其DNA的制备：将浸出液室温下12 000 r/min离心15分钟，弃去上清液，加入50 μl裂解液(内含0.38 mg/ml的蛋白酶K)混匀，60℃30分钟，100℃水浴15分钟，14 000 r/min离心2分钟后分别取3μl上清液作为CT、NGH和UU的PCR反应模板。(2)引物设计：PCR试剂盒由上海第二医科大学生化室提供，CT PCR引物对扩增产生410 bp片段产物，NGH PCR引物对扩增产生390bp片段产物，UU PCR引物对扩增产生450bp片段产物。(3)DNA扩增：按说明书的要求配制反应体系，扩增仪为上海复旦生物实验技术研制所生产的FR-800型。94℃预变性5分钟，94℃变性1分钟，54℃退火30秒，72℃延伸60秒，循环40次。(4)结果观察：取10μl～15μl扩增物经2.5%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察有无特异性扩增带。同时设置阳性和阴性对照。
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4.统计学处理：采用χ2检验、配对资料检验和确切概率法。
二、结果
1.两组输卵管的CT、NGH及UU阳性率：不孕组的CT、NGH和UU阳性率均显著高于对照组(P<0.05，见附表)。
2.不孕组CT、NGH及UU的合并感染情况：不孕组中CT和NGH合并感染10例(8.1%)，UU和NGH合并感染3例(4.6%)，经配对计数资料的χ2检验，NGH与CT及UU的感染间均有显著相关性(P<0.05)。CT和UU合并感染2例(3.0%)，两者的感染间无显著相关性(P>0.05)。CT、NGH和UU三者合并感染者1例(1.5%)。
三、讨论
1.女性生殖道感染与不孕： 女性生殖道的急性和慢性感染所造成的生殖腔道的炎症、粘连与阻塞，是引起不孕的主要原因，可由多种微生物所引起，常见的有CT、NGH和UU。CT寄生于宿主细胞内引起变态反应[1]，常可导致反复感染，引起输卵管进行性损害、粘连、阻塞和积水，从而导致不孕，从盆腔炎病人输卵管检出CT的频度为5%～30%[2]。UU通过其特殊结构紧密地粘附于易感宿主细胞膜受体上，使宿主细胞受损[3]。有报道，阻塞性不孕病人的腹腔液UU培养阳性率10.1%，高于正常对照组的6.1%[4]。NGH同CT一样，均能引起急性输卵管炎、输卵管纤维变性及瘢痕化而致不孕。本研究中，不孕组输卵管的CT、NGH和UU阳性率，均显著高于正常妊娠妇女(P<0.05)。提示，输卵管的CT、NGH或UU感染是导致不孕的因素之一。
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2.生殖道的合并感染： 生殖道的感染常为多种微生物的合并感染[2,5]，感染NGH妇女的宫颈中CT分离率为31%～63%，而感染CT妇女中NGH分离率为18%～42%[5]。UU感染也可合并CT或NGH感染[3]。本研究中，不孕组CT与NGH合并感染10例(8.1%),UU和NGH合并感染3例(4.6%)，NGH与CT及UU感染间均有显著相关性(P<0.05)。提示，输卵管的NGH感染可能增加了CT和UU感染的危险性。由此可见，对不孕患者行生殖道CT、NGH 及UU的全面检查，应做为一项重要的病因诊断参考依据，因病施治，全面提高不孕防治工作的效率。附表 两组输卵管CT、NGH及UU检出情况 组别
总例数
CT阳性
NGH阳性
UU阳性
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例数
阳性率(%)
例数
阳性率(%)
例数
阳性率(%)
不孕组
123
18
14.6
19
15.4
11
, 百拇医药
16.7
对照组
60
2
3.3
3
5.0
0
0
不孕组与对照组分别检测了66和34例参考文献
1 李豫峰.沙眼衣原体生殖道感染与不孕.国外医学计划生育分册,1995,14:80-82.
2 Soper DE,Brockwell NJ,Dalton HP,et al.Observations concerning the microbial etiology of acute salpingitis. Am J Obstet Gynecol,1994,170:1008-1017.
, http://www.100md.com
3 王荷英.性传播疾病中的支原体感染.中国医学论坛报,1995,10(感染专刊)：9.
4 Henry-Suchet J,Catalan F,Loffredo V,et al.Chlamydia trachomatis associated with chronic inflammation in abdominal specimens from women selected for tuboplasty.Fertil Steril,1981,36:599-605.
5 李振英.女性生殖器官沙眼衣原体感染.实用妇产科杂志,1988,4:130-132.
(收稿：1997-07-23 修回：1998-03-18), 百拇医药
单位：610031 成都市第三人民医院妇产科(陆静)；华西医科大学附属第二医院妇产科(梁占光，韩字研)
关键词：
中华妇产科杂志980620 国内针对沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)对不孕影响的研究大多数是基于血清学或对宫颈感染的调查，而输卵管感染是导致不孕的一个重要原因，本研究应用多聚酶链反应(PCR)法对不孕妇女输卵管的CT、UU和淋病双球菌(NGH)的感染情况进行分析。
一、资料和方法
1.研究对象：123例，来源于华西医科大学附属第二医院1995年9月至1996年3月因原发和继发不孕接受手术治疗的病人(不孕组)。符合以下标准：夫妇有正常性生活，未采取任何避孕措施而未妊娠至少两年以上，男方精液检查正常，手术证实为盆腔结核者除外。年龄22～38岁，平均28.2岁，按术中发现，病变为单纯输卵管与卵巢或周围其他组织粘连42例，输卵管阻塞或积水65例，子宫内膜异位症合并上述两种病变之一的16例。123例均进行了输卵管CT、NGH的检测，其中66例进行了UU的检测。正常妊娠对照源于同期60例足月妊娠行剖宫产的妇女(对照组)，年龄21～32岁，平均26.9岁，均作了输卵管CT、NGH检测，其中34例作了UU检测。
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2.标本采集：在不孕病人行分离粘连手术中及正常孕妇剖宫产术中，分别用一个棉拭子插入左右侧输卵管伞端约0.5 cm，旋转数秒后抽出，置入装有1ml无菌生理盐水的离心管中充分洗涤后挤干，拭子弃去，浸出液于4℃保存备检。
3.CT、NGH及UU DNA的检测：采用PCR法，(1)标本处理及其DNA的制备：将浸出液室温下12 000 r/min离心15分钟，弃去上清液，加入50 μl裂解液(内含0.38 mg/ml的蛋白酶K)混匀，60℃30分钟，100℃水浴15分钟，14 000 r/min离心2分钟后分别取3μl上清液作为CT、NGH和UU的PCR反应模板。(2)引物设计：PCR试剂盒由上海第二医科大学生化室提供，CT PCR引物对扩增产生410 bp片段产物，NGH PCR引物对扩增产生390bp片段产物，UU PCR引物对扩增产生450bp片段产物。(3)DNA扩增：按说明书的要求配制反应体系，扩增仪为上海复旦生物实验技术研制所生产的FR-800型。94℃预变性5分钟，94℃变性1分钟，54℃退火30秒，72℃延伸60秒，循环40次。(4)结果观察：取10μl～15μl扩增物经2.5%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察有无特异性扩增带。同时设置阳性和阴性对照。
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4.统计学处理：采用χ2检验、配对资料检验和确切概率法。
二、结果
1.两组输卵管的CT、NGH及UU阳性率：不孕组的CT、NGH和UU阳性率均显著高于对照组(P<0.05，见附表)。
2.不孕组CT、NGH及UU的合并感染情况：不孕组中CT和NGH合并感染10例(8.1%)，UU和NGH合并感染3例(4.6%)，经配对计数资料的χ2检验，NGH与CT及UU的感染间均有显著相关性(P<0.05)。CT和UU合并感染2例(3.0%)，两者的感染间无显著相关性(P>0.05)。CT、NGH和UU三者合并感染者1例(1.5%)。
三、讨论
1.女性生殖道感染与不孕： 女性生殖道的急性和慢性感染所造成的生殖腔道的炎症、粘连与阻塞，是引起不孕的主要原因，可由多种微生物所引起，常见的有CT、NGH和UU。CT寄生于宿主细胞内引起变态反应[1]，常可导致反复感染，引起输卵管进行性损害、粘连、阻塞和积水，从而导致不孕，从盆腔炎病人输卵管检出CT的频度为5%～30%[2]。UU通过其特殊结构紧密地粘附于易感宿主细胞膜受体上，使宿主细胞受损[3]。有报道，阻塞性不孕病人的腹腔液UU培养阳性率10.1%，高于正常对照组的6.1%[4]。NGH同CT一样，均能引起急性输卵管炎、输卵管纤维变性及瘢痕化而致不孕。本研究中，不孕组输卵管的CT、NGH和UU阳性率，均显著高于正常妊娠妇女(P<0.05)。提示，输卵管的CT、NGH或UU感染是导致不孕的因素之一。
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2.生殖道的合并感染： 生殖道的感染常为多种微生物的合并感染[2,5]，感染NGH妇女的宫颈中CT分离率为31%～63%，而感染CT妇女中NGH分离率为18%～42%[5]。UU感染也可合并CT或NGH感染[3]。本研究中，不孕组CT与NGH合并感染10例(8.1%),UU和NGH合并感染3例(4.6%)，NGH与CT及UU感染间均有显著相关性(P<0.05)。提示，输卵管的NGH感染可能增加了CT和UU感染的危险性。由此可见，对不孕患者行生殖道CT、NGH 及UU的全面检查，应做为一项重要的病因诊断参考依据，因病施治，全面提高不孕防治工作的效率。附表 两组输卵管CT、NGH及UU检出情况 组别
总例数
CT阳性
NGH阳性
UU阳性
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例数
阳性率(%)
例数
阳性率(%)
例数
阳性率(%)
不孕组
123
18
14.6
19
15.4
11
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16.7
对照组
60
2
3.3
3
5.0
0
0
不孕组与对照组分别检测了66和34例参考文献
1 李豫峰.沙眼衣原体生殖道感染与不孕.国外医学计划生育分册,1995,14:80-82.
2 Soper DE,Brockwell NJ,Dalton HP,et al.Observations concerning the microbial etiology of acute salpingitis. Am J Obstet Gynecol,1994,170:1008-1017.
, http://www.100md.com
3 王荷英.性传播疾病中的支原体感染.中国医学论坛报,1995,10(感染专刊)：9.
4 Henry-Suchet J,Catalan F,Loffredo V,et al.Chlamydia trachomatis associated with chronic inflammation in abdominal specimens from women selected for tuboplasty.Fertil Steril,1981,36:599-605.
5 李振英.女性生殖器官沙眼衣原体感染.实用妇产科杂志,1988,4:130-132.
(收稿：1997-07-23 修回：1998-03-18), 百拇医药