胎儿胰岛素样生长因子-Ⅰ的检测及意义
作者：万贵平 俞淑 刘嘉茵 王海琦
单位：210029 南京医科大学第一附属医院妇产科
关键词：胰岛素样生长因子-Ⅰ；胎儿；胎盘；放射免疫测定
中华妇产科杂志981205 摘要 目的 评估胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)在胎儿、胎盘生长发育中的作用。方法 用放射免疫分析法(RIA)测定大于胎龄儿(LGA)组30例，适于胎龄儿(AGA)组36例及小于胎龄儿(SGA)组36例的脐血清IGF-Ⅰ的水平。用线性相关分析法分析各组变量之间的相关关系。结果 3组胎儿脐血清IGF-Ⅰ与胎龄、胎儿体重、胎盘重量均呈显著正相关(r=0.32，P<0.001；r=0.68，P<0.001；r=0.75，P<0.001)，其中与胎盘重量呈高度正相关。脐血清IGF-Ⅰ水平，AGA组为144.59±46.73 μg/L；SGA组为90.80 μg/L(t=4.77，P<0.001)，LGA组为209.17 μg/L(t=7.97, P<0.001)。结论 IGF-Ⅰ是胎儿、胎盘生长发育的重要调节因子，对巨大儿、小于胎龄儿的形成有重要作用。
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Serum Concentration of Insulin-like Growth Factor-I in Cord Blood Wan Guiping, Yu Shu, Liu Jiayin, et al. First Affiliated Hospital, Nanjing Medical University, Nanjing 210029
【Abstract】 Objective To evaluate the role of insulin-like growth factor-Ⅰ(IGF-Ⅰ) in fetal growth and placental growth. Methods Cord blood IGF-Ⅰ was determined by radioimmunoassay (RIA) after serum samples were extracted with acid-ethanol. Linear correlation between variables was tested by calculating pearson's correlation coefficient. student's test was used to compare mean values between groups. Results In 102 tested samples, the concentration of cord blood serum IGF-Ⅰ was correlated with the gestational age, the birth weight of neonates and placental weight (r=0.32, P<0.001, r=0.68, P<0.001, r=0.75, P<0.001). The mean serum level of IGF-Ⅰ in the small-for-gestational-age (SGA) neonates was significantly lower than that in average-for gestational-age (AGA) (t=4.77, P<0.001), But the serum concentration of IGF-Ⅰ in the Large-for-gestational-aga (LGA) neonates was significantly higher than that of AGA neonates (t=7.97, P<0.001). Conclusion Those results suggested that IGF-Ⅰ is an important regulator for fetal and placental growth and development. It has the key role for macrosomia and IUGR forming.
, 百拇医药
【Key word】 Insulin-like growth factor Ⅰ Fetus Placenta Radioimmunoassay
胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)由70个氨基酸组成，其编码基因位于12号染色体短臂上，它只有通过细胞表面的特异性受体才能刺激细胞增生、分化。哺乳动物几乎所有组织和细胞均能合成IGF-Ⅰ，表达IGF受体。
Lassarre等[1]研究发现，脐血清 IGF-Ⅰ的水平随胎龄的增加而升高，推测IGF-Ⅰ在胎儿生长发育阶段可能起作用，本研究通过放射免疫分析法，测定脐血清中的 IGF-Ⅰ水平，探讨其在胎儿、胎盘生长发育中的作用。
资料与方法
一、研究对象
自1997年5月至11月在南京医科大学第一附属医院和第二附属医院分娩的102例孕妇，无明显的妊娠合并症及内外科合并症。相应胎龄出生体重在90百分位以上为大于胎龄儿(LGA)组，10～90百分位之间为适于胎龄儿(AGA)组，10百分位以下为小于胎龄儿(SGA)组[2]。SGA组36例、AGA组36例、LGA组30例。在分娩或剖宫产时采集脐动、静脉混和血10ml。孕妇年龄19～38岁，孕龄37～42周。所有标本的采集均征得孕妇本人同意。血样本采集后1 500 r/min离心15分钟，取血清1 ml，-20℃保存待测。
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二、方法
1.试剂： IGF-Ⅰ标准品由美国Sigma公司提供，10 μg/瓶，纯度>98%。125I-IGF-Ⅰ (92.5 KBq、化学纯度74 TBq/mmol)、兔抗人兔血清(25 ml，最终稀释浓度1∶12 000)、包被驴抗兔抗体的Amerlex-M磁性分离剂均由英国Amersham公司提供。
2. IGF-Ⅰ放射免疫分析测定法：在放射免疫分析测定之前，血清经过酸-醇抽提将IGF-Ⅰ从结合蛋白中分离出来[3]，主要步骤：样品血清0.2 ml加到0.8 ml的抽提液中，抽提液由87.5%(v/v)无水乙醇、12.5%(v/v)浓度为2 mol/L的盐酸组成。混合后室温下静置30分钟，4 ℃以下1 850 r/min离心30分钟，取上清液0.5 ml加到0.2 ml、浓度为0.86 mol/L 的Trisbase液中。
IGF-Ⅰ放射免疫分析测定是在含5%小牛血清(0.05 mol/L，pH7.4)的PBS液中进行的，均采用双管测定。在100 μl标准品或抽提样品中加100μl抗血清(最终稀释浓度为1:12 000)、100 μl 125IGF-Ⅰ(370 KBq、放免化学纯度74TBq/mmol)，摇匀后在2～4 ℃下孵育48小时。应用Amerlex-M分离试剂，分离出结合IGF-Ⅰ与游离IGF-Ⅰ，加500 μl Amerlex-M分离剂，摇匀后在15～30℃下静置10分钟，置于磁性分离架上15分钟，倾弃上清液，倒置5分钟，测每分钟γ计数。标准品浓度共11点，由此得出标准曲线。批内变异5 μg/L时为1.40%，500 μg/L时为9.07%。
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三、统计处理
各组间均数检验用t检验，各类数据间用线性相关分析。
结果
一、脐血清IGF-Ⅰ与胎龄、胎儿体重、胎盘重量关系
直线相关分析表明，脐血清IGF-Ⅰ与胎龄、胎儿体重、胎盘重量均呈显著正相关(r=0.32，P<0.001；r=0.68，P<0.001；r=0.75，P<0.001)，其中与胎盘重量呈高度正相关。
二、3组脐血清IGF-Ⅰ水平比较
脐血清IGF-Ⅰ在SGA组、AGA组、LGA组分别为90.80±49.00 μg/L、144.59±46.73 μg/L、209.17±81.45 μg/L。与AGA组比较，脐血清IGF-Ⅰ水平在SGA组显著降低(t=4.77，P<0.001)，在LGA组显著升高(t=7.97，P<0.001)。
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讨论
一、脐血清IGF-Ⅰ与胎盘生长发育的关系
本研究结果显示， 脐血清IGF-Ⅰ的浓度与胎龄、胎儿体重、胎盘重量均呈正相关，与Lassarre等[1]报道相似。说明脐血清IGF-Ⅰ随孕龄的增长而升高，且与胎儿、胎盘的发育密切相关。但与胎盘重量的相关性较与胎儿体重的相关性更强，说明脐血清IGF-Ⅰ的水平可能与胎盘的生长发育更为密切。
二、IGF-Ⅰ在胎儿生长发育中的作用
与AGA组比较，脐血清IGF-Ⅰ在SGA组的水平显著降低，在LGA组的水平显著升高，与Wang等[4]报道不一致，与Lassarre等[1]报道相似。提示IGF-Ⅰ可能与胎儿的发育相关，至少胎儿在宫内生活的晚期是这样。Baker等[5]通过转基因动物研究显示：去除IGF-Ⅰ基因的小鼠，在宫内发育迟缓，从而间接证实了IGF-Ⅰ在胎儿生长发育中的作用。Simmons等[6]研究发现，IGF-Ⅰ能使胎鼠肺和肌肉的糖原摄取、糖转移因子-1蛋白和mRNA增加。Schoknecht等[7]研究发现，外源性IGF-Ⅰ能使宫内发育迟缓胎儿蛋白质、脂肪积累增加，生长速率加快,说明IGF-Ⅰ通过促进胎儿糖、蛋白质、脂肪代谢而影响胎儿生长发育。
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参考文献
1 Lassarre C ,Hardouin S, Daffos F,et al.Serum insulin-like growth factors and insulin-like growth factor binding proteins in the human fetus： relationships with growth in normal subjects and in subjects with intrauterine growth retardation. Pediatr Res,1991,29:219-225.
2 Brenner WE .A standard of fetal growth for the united states of america. Am J Obstet Gynecol,1976,126:555-564.
3 Daughaday WH, Ward AP, Goldberg AC, et al. Characterization of somatomedin binding in human serum by ultracentrifugation and gelfiltration. J Clin Endocrinol Metab,1982,55:916-921.
, 百拇医药
4 Wang HS, Lim J, Irvine L, et al. The concentration of insulin-like growth factor-I and insulin-like growth factor-binding protein-1 in human umbilical cord serum at delivery:relation to fetal weight.J Endocrine,1991,129:459-464.
5 Baker J ,Liu JP,Robertson EJ,et al.Role of insulin-like growth factors in embryonic and postnatal growth.Cell,1993,75:73-82.
6 Simmons RA, Flozak AS. Ogata ES. The effect of insulin and insulin-like growth factor-Ⅰ on glocose transport in normal and small for gestational age fetal rats.Endocrinology,1993,133:1361-1368.
7 Schoknecht PA, Ebner S, Skottner A, et al. Exogenus insulin-like growth factor-I increases weight gain in intrauterine growth-retarded neonatal pigs. Pediatr Res,1997,42:201-207.
(收稿：1998-03-03 修回1997-07-15)
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单位：210029 南京医科大学第一附属医院妇产科
关键词：胰岛素样生长因子-Ⅰ；胎儿；胎盘；放射免疫测定
中华妇产科杂志981205 摘要 目的 评估胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)在胎儿、胎盘生长发育中的作用。方法 用放射免疫分析法(RIA)测定大于胎龄儿(LGA)组30例，适于胎龄儿(AGA)组36例及小于胎龄儿(SGA)组36例的脐血清IGF-Ⅰ的水平。用线性相关分析法分析各组变量之间的相关关系。结果 3组胎儿脐血清IGF-Ⅰ与胎龄、胎儿体重、胎盘重量均呈显著正相关(r=0.32，P<0.001；r=0.68，P<0.001；r=0.75，P<0.001)，其中与胎盘重量呈高度正相关。脐血清IGF-Ⅰ水平，AGA组为144.59±46.73 μg/L；SGA组为90.80 μg/L(t=4.77，P<0.001)，LGA组为209.17 μg/L(t=7.97, P<0.001)。结论 IGF-Ⅰ是胎儿、胎盘生长发育的重要调节因子，对巨大儿、小于胎龄儿的形成有重要作用。
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Serum Concentration of Insulin-like Growth Factor-I in Cord Blood Wan Guiping, Yu Shu, Liu Jiayin, et al. First Affiliated Hospital, Nanjing Medical University, Nanjing 210029
【Abstract】 Objective To evaluate the role of insulin-like growth factor-Ⅰ(IGF-Ⅰ) in fetal growth and placental growth. Methods Cord blood IGF-Ⅰ was determined by radioimmunoassay (RIA) after serum samples were extracted with acid-ethanol. Linear correlation between variables was tested by calculating pearson's correlation coefficient. student's test was used to compare mean values between groups. Results In 102 tested samples, the concentration of cord blood serum IGF-Ⅰ was correlated with the gestational age, the birth weight of neonates and placental weight (r=0.32, P<0.001, r=0.68, P<0.001, r=0.75, P<0.001). The mean serum level of IGF-Ⅰ in the small-for-gestational-age (SGA) neonates was significantly lower than that in average-for gestational-age (AGA) (t=4.77, P<0.001), But the serum concentration of IGF-Ⅰ in the Large-for-gestational-aga (LGA) neonates was significantly higher than that of AGA neonates (t=7.97, P<0.001). Conclusion Those results suggested that IGF-Ⅰ is an important regulator for fetal and placental growth and development. It has the key role for macrosomia and IUGR forming.
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【Key word】 Insulin-like growth factor Ⅰ Fetus Placenta Radioimmunoassay
胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)由70个氨基酸组成，其编码基因位于12号染色体短臂上，它只有通过细胞表面的特异性受体才能刺激细胞增生、分化。哺乳动物几乎所有组织和细胞均能合成IGF-Ⅰ，表达IGF受体。
Lassarre等[1]研究发现，脐血清 IGF-Ⅰ的水平随胎龄的增加而升高，推测IGF-Ⅰ在胎儿生长发育阶段可能起作用，本研究通过放射免疫分析法，测定脐血清中的 IGF-Ⅰ水平，探讨其在胎儿、胎盘生长发育中的作用。
资料与方法
一、研究对象
自1997年5月至11月在南京医科大学第一附属医院和第二附属医院分娩的102例孕妇，无明显的妊娠合并症及内外科合并症。相应胎龄出生体重在90百分位以上为大于胎龄儿(LGA)组，10～90百分位之间为适于胎龄儿(AGA)组，10百分位以下为小于胎龄儿(SGA)组[2]。SGA组36例、AGA组36例、LGA组30例。在分娩或剖宫产时采集脐动、静脉混和血10ml。孕妇年龄19～38岁，孕龄37～42周。所有标本的采集均征得孕妇本人同意。血样本采集后1 500 r/min离心15分钟，取血清1 ml，-20℃保存待测。
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二、方法
1.试剂： IGF-Ⅰ标准品由美国Sigma公司提供，10 μg/瓶，纯度>98%。125I-IGF-Ⅰ (92.5 KBq、化学纯度74 TBq/mmol)、兔抗人兔血清(25 ml，最终稀释浓度1∶12 000)、包被驴抗兔抗体的Amerlex-M磁性分离剂均由英国Amersham公司提供。
2. IGF-Ⅰ放射免疫分析测定法：在放射免疫分析测定之前，血清经过酸-醇抽提将IGF-Ⅰ从结合蛋白中分离出来[3]，主要步骤：样品血清0.2 ml加到0.8 ml的抽提液中，抽提液由87.5%(v/v)无水乙醇、12.5%(v/v)浓度为2 mol/L的盐酸组成。混合后室温下静置30分钟，4 ℃以下1 850 r/min离心30分钟，取上清液0.5 ml加到0.2 ml、浓度为0.86 mol/L 的Trisbase液中。
IGF-Ⅰ放射免疫分析测定是在含5%小牛血清(0.05 mol/L，pH7.4)的PBS液中进行的，均采用双管测定。在100 μl标准品或抽提样品中加100μl抗血清(最终稀释浓度为1:12 000)、100 μl 125IGF-Ⅰ(370 KBq、放免化学纯度74TBq/mmol)，摇匀后在2～4 ℃下孵育48小时。应用Amerlex-M分离试剂，分离出结合IGF-Ⅰ与游离IGF-Ⅰ，加500 μl Amerlex-M分离剂，摇匀后在15～30℃下静置10分钟，置于磁性分离架上15分钟，倾弃上清液，倒置5分钟，测每分钟γ计数。标准品浓度共11点，由此得出标准曲线。批内变异5 μg/L时为1.40%，500 μg/L时为9.07%。
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三、统计处理
各组间均数检验用t检验，各类数据间用线性相关分析。
结果
一、脐血清IGF-Ⅰ与胎龄、胎儿体重、胎盘重量关系
直线相关分析表明，脐血清IGF-Ⅰ与胎龄、胎儿体重、胎盘重量均呈显著正相关(r=0.32，P<0.001；r=0.68，P<0.001；r=0.75，P<0.001)，其中与胎盘重量呈高度正相关。
二、3组脐血清IGF-Ⅰ水平比较
脐血清IGF-Ⅰ在SGA组、AGA组、LGA组分别为90.80±49.00 μg/L、144.59±46.73 μg/L、209.17±81.45 μg/L。与AGA组比较，脐血清IGF-Ⅰ水平在SGA组显著降低(t=4.77，P<0.001)，在LGA组显著升高(t=7.97，P<0.001)。
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讨论
一、脐血清IGF-Ⅰ与胎盘生长发育的关系
本研究结果显示， 脐血清IGF-Ⅰ的浓度与胎龄、胎儿体重、胎盘重量均呈正相关，与Lassarre等[1]报道相似。说明脐血清IGF-Ⅰ随孕龄的增长而升高，且与胎儿、胎盘的发育密切相关。但与胎盘重量的相关性较与胎儿体重的相关性更强，说明脐血清IGF-Ⅰ的水平可能与胎盘的生长发育更为密切。
二、IGF-Ⅰ在胎儿生长发育中的作用
与AGA组比较，脐血清IGF-Ⅰ在SGA组的水平显著降低，在LGA组的水平显著升高，与Wang等[4]报道不一致，与Lassarre等[1]报道相似。提示IGF-Ⅰ可能与胎儿的发育相关，至少胎儿在宫内生活的晚期是这样。Baker等[5]通过转基因动物研究显示：去除IGF-Ⅰ基因的小鼠，在宫内发育迟缓，从而间接证实了IGF-Ⅰ在胎儿生长发育中的作用。Simmons等[6]研究发现，IGF-Ⅰ能使胎鼠肺和肌肉的糖原摄取、糖转移因子-1蛋白和mRNA增加。Schoknecht等[7]研究发现，外源性IGF-Ⅰ能使宫内发育迟缓胎儿蛋白质、脂肪积累增加，生长速率加快,说明IGF-Ⅰ通过促进胎儿糖、蛋白质、脂肪代谢而影响胎儿生长发育。
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参考文献
1 Lassarre C ,Hardouin S, Daffos F,et al.Serum insulin-like growth factors and insulin-like growth factor binding proteins in the human fetus： relationships with growth in normal subjects and in subjects with intrauterine growth retardation. Pediatr Res,1991,29:219-225.
2 Brenner WE .A standard of fetal growth for the united states of america. Am J Obstet Gynecol,1976,126:555-564.
3 Daughaday WH, Ward AP, Goldberg AC, et al. Characterization of somatomedin binding in human serum by ultracentrifugation and gelfiltration. J Clin Endocrinol Metab,1982,55:916-921.
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4 Wang HS, Lim J, Irvine L, et al. The concentration of insulin-like growth factor-I and insulin-like growth factor-binding protein-1 in human umbilical cord serum at delivery:relation to fetal weight.J Endocrine,1991,129:459-464.
5 Baker J ,Liu JP,Robertson EJ,et al.Role of insulin-like growth factors in embryonic and postnatal growth.Cell,1993,75:73-82.
6 Simmons RA, Flozak AS. Ogata ES. The effect of insulin and insulin-like growth factor-Ⅰ on glocose transport in normal and small for gestational age fetal rats.Endocrinology,1993,133:1361-1368.
7 Schoknecht PA, Ebner S, Skottner A, et al. Exogenus insulin-like growth factor-I increases weight gain in intrauterine growth-retarded neonatal pigs. Pediatr Res,1997,42:201-207.
(收稿：1998-03-03 修回1997-07-15)
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