妊高征胎盘绒毛组织内皮素-1及其mRNA表达和血浆内皮素-1的变化
作者：佟秀琴 李诗兰 赵扬玉 张小为 王蔼明
单位：100083 北京医科大学第三医院妇产科
关键词：妊娠并发症；心血管；高血压；内皮缩血管肽-1；RNA；信使
中华妇产科杂志990103 【摘要】 目的 探讨内皮素-1(ET-1)在妊高征发病中的作用。方法 采用放射免疫法检测70例妊高征患者(妊高征组)和30例正常妊娠妇女(正常妊娠组)血浆ET-1水平，用免疫组化及原位杂交方法检测ET-1及ET-1 mRNA在妊高征及正常妊娠胎盘绒毛组织的表达。结果 (1)妊高征组血浆ET-1水平(75.08±16.35) ng/L，明显高于正常妊娠组(47.62±8.66) ng/L，病情越重其值越高，且ET-1水平与妊高征患者平均动脉压呈正相关关系。(2)胎盘绒毛组织合体滋养细胞及胎儿血管内皮细胞有ET-1及ET-1 mRNA的表达，且妊高征组胎盘绒毛组织ET-1及ET-1 mRNA阳性信号较正常妊娠组增强。结论 血管内皮损伤与妊高征的发病有关，胎盘绒毛组织ET-1增高在妊高征的发病中起重要作用。
, 百拇医药
Expression of Endothelin-1 and Endothelin-1 mRNA in Placental Villus of Pregnancy Induced Hypertension and The Changes of Plasma Endothelin-1 TONG Xiuqin, LI Shilan, ZHAO Yangyu, et al. The Third Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100083
【Abstract】 Objective To investigate the role of endothelin (ET-1) in the pathogenesis of pregnancy induced hypertension (PIH). Methods In 70 cases of PIH the plasma concentration of ET-1 was measured by RIA, and the expressions of ET-1 and its mRNA in placental villus were determined by immunohistochemistry and in situ hybridization respectively. 30 normal pregnant women (NP) served as control group. Results (1) The Plasma concentration of ET-1 was significantly higher in PIH than that in NP. There was a positive correlation between the plasma ET-1 level and mean arterial pressure in PIH. (2) The expressions of ET-1 and ET-1 mRNA were found in syncytiotrophoblast of placental villus and in the endothelium of fetal vessels. These positive signals were higher in PIH than in NP. Conclusion The injury of endothelium of fetal and placental blood vessels was one of the causes of PIH. The placenta may play an important role in the pathogenesis of PIH.
, 百拇医药
【Key words】 Pregnancy complications, cardiovascular Hypertension Endothelin-1 RNA, messenger
内皮素(ET-1)是目前已知最强的缩血管活性肽。心肌梗死、血管炎及肺动脉高压时，血浆内皮素水平增加。因此，人们提出血浆内皮素水平增加与高血压有关。妊高征患者胎盘娩出后病情缓解，且该病可发生于完全性葡萄胎患者，说明胎盘组织中的某些成分在妊高征的发病中起重要作用，我们采用免疫组化和原位杂交技术，检测ET-1及ET-1 mRNA在妊高征患者胎盘绒毛组织的表达情况，探讨其与妊高征发病的关系，为临床寻找妊高征病因提供依据。
资料与方法
一、研究对象
选择本院1996年7月～1997年7月住院产妇，其中正常妊娠妇女30例(正常妊娠组)，妊娠37～40周。妊高征患者70例(妊高征组)，按《妇产科学》第4版诊断标准分类。其中轻度30例，妊娠37～41周；中度20例，妊娠35～41周；重度20例，妊娠34～41周。年龄22～34岁。均为单胎初产妇，无高血压、糖尿病、肝肾疾病等合并症。
, 百拇医药
二、实验方法
1.标本采集：(1)产前取肘静脉血2 ml，置含抑肽酶400 IU、10%乙二胺四乙酸(EDTA) 10 μl的试管内，4℃离心10分钟，取上清-70℃冻存。(2)无内科合并症及并发症，仅因产科指征行选择性剖宫产的正常妊娠及重度妊高征患者各10例，胎盘娩出后，即刻取靠近脐带的胎盘绒毛膜板下绒毛组织0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm，液氮冻存待测。
2.检测方法：(1)放射免疫：用放射免疫法检测血浆ET-1水平。(2)免疫组化：胎盘绒毛组织冰冻切片8 μm厚，采用ET-1兔抗人抗体的免疫组化ABC法检测ET-1在胎盘绒毛组织的表达。并用缓冲液(PBS)代替Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ抗作为阴性对照。(3)原位杂交：胎盘绒毛组织冰冻切片5 μm厚，用ET-1 cDNA探针作原位杂交，检测胎盘绒毛组织ET-1 mRNA的表达。
三、统计方法
, 百拇医药
采用方差分析及直线相关分析。
结果
一、正常妊娠组及妊高征组血浆ET-1水平比较
结果显示，妊高征组血浆ET-1水平明显高于正常妊娠组，病情越重其值越高。但轻度妊高征与正常妊娠组比较，差异无显著性。不同程度妊高征之间及中度、重度妊高征与正常妊娠组间差异有显著性(P<0.05)。见表1。妊高征患者血浆ET-1水平与平均动脉压(MAP)呈正相关关系(r=0.919, P<0.05)。
表1 妊高征组及正常妊娠组血浆ET-1水平比较(
±s) 组别
例数
ET-1 (ng/L)
, 百拇医药
正常妊娠组
30
47.62± 8.66
妊高征组
轻度
30
54.05±10.45*
中度
20
74.58±12.56**
重度
20
, 百拇医药
96.62±26.05**
* P>0.05 **P<0.05
二、胎盘绒毛组织ET-1蛋白抗原的表达
用免疫组化染色法我们发现，胎盘绒毛组织合体滋养细胞及胎儿血管内皮细胞有ET-1蛋白抗原的表达，妊高征组胎盘绒毛组织切片加入显色剂后3分钟开始显色，而正常对照组7分钟开始显色，同时终止反应后观察，妊高征组阳性信号较正常妊娠组增强。
三、胎盘绒毛组织ET-1 mRNA的表达
用原位杂交的方法我们发现，在胎盘绒毛组织合体滋养细胞及胎儿血管内皮细胞有ET-1 mRNA的表达，妊高征组胎盘绒毛组织切片加入显色剂后30分钟开始显色，而正常对照组1小时开始显色，同时终止反应后观察，妊高征组阳性信号较正常妊娠组增强。
, 百拇医药
讨论
一、血浆ET-1与妊高征的关系
本研究中，妊高征组血浆ET-1水平明显高于正常妊娠组，与Dimitrios等[1]报道一致，妊高征病情越重其值越高，并与妊高征患者平均动脉压呈正相关关系。
许多研究结果表明，血管内皮损伤及功能障碍在妊高征发病机理中起重要作用[2]。ET-1是血管内皮细胞产生的一种强大的缩血管物质，并在血管内皮与平滑肌局部起作用。因此，内皮细胞解剖结构的分裂和破坏使内皮素从局部释放入血是妊高征患者血浆ET-1增加的主要原因之一。正常状态下血浆中就有一定水平的内皮素，与血栓素A2(TXA2)一起调节血管收缩效应，而这种效应被血管内皮衍生松弛因子(EDRF)及前列环素(PGI2)减弱，这样ET、TXA2与EDRF、PGI2按机体需要成比例释放，在体内保持动态平衡，控制机体血压和局部血流。妊高征时，由于血管内皮细胞损伤产生了高水平ET-1，血管内皮损伤使EDRF、PGI2产生减少[3]，导致妊高征患者血管舒缩因子平衡紊乱，引起妊高征一系列临床症状产生。
, 百拇医药
二、胎盘绒毛组织ET-1变化与妊高征的关系
本研究显示，胎盘绒毛组织合体滋养细胞及胎儿血管内皮细胞有ET-1及ET-1 mRNA表达，妊高征患者胎盘表达量高。妊高征时胎盘绒毛组织ET-1的增加，在胎盘局部引起胎儿血管收缩，合体滋养细胞产生的ET-1释放入绒毛间隙，经子宫静脉开口进入循环血中，这可能是妊高征患者血浆ET-1水平增加的重要原因之一。
ET-1增加引起子宫螺旋小动脉痉挛，从而引起或加重胎盘血液供应不良，胎儿-胎盘循环阻力增加[4，5]。据文献报道，ET-1以剂量依赖的方式刺激胎盘纤维细胞DNA的合成，并在非生理水平使胰岛素样生长因子的合成及释放增加[6]。推测ET-1的增加与妊高征胎盘的异常发育有关。因此，我们认为ET-1增高可能是妊高征患者易并发IUGR的原因之一。
参考文献
, 百拇医药
[1] Dimitrios S, Mastrogiannis MD, William F, et al. Potential role of endothelin-1 in normal and hypertensive pregnancy. Am J Obstet Gynecol, 1991, 165:1711-1766.
[2] James M, Roberts MD, Robert N, et al. Preeclampsia: an endothelial cell disorder. Am J Obstet Gynecol, 1989, 161:1200-1204.
[3] Nucci G, Branch DW. Receptor mediated release of endothelium derived relaxing factor and prostacylin from boving aortic endothelial cell is coupled. Proc Natl Axad Sci USA, 1988, 85:1075.
, http://www.100md.com
[4] Trudinger BJ, Giles WB, Cooke GM, et al. Fetal umbilical arterry flow velocity wave forms and placental resistance clinical significance. Br J Obstet Gynaecol, 1985, 92:23-30.
[5] 李诗兰，谢道银，王泽密，等.彩色多普勒超声检测妊高征患者肾内小动脉和脐动脉血流速度变化.北京医科大学学报，1996，1：43-45.
[6] Fant ME, Nanu L, Word RA. A potent role for endothelin-1 in human placental growth factor family of peptides, J Clin Endocrinol Metab, 1992, 74:1158-1163.
(收稿：1998-05-28 修回：1998-09-06), 百拇医药
单位：100083 北京医科大学第三医院妇产科
关键词：妊娠并发症；心血管；高血压；内皮缩血管肽-1；RNA；信使
中华妇产科杂志990103 【摘要】 目的 探讨内皮素-1(ET-1)在妊高征发病中的作用。方法 采用放射免疫法检测70例妊高征患者(妊高征组)和30例正常妊娠妇女(正常妊娠组)血浆ET-1水平，用免疫组化及原位杂交方法检测ET-1及ET-1 mRNA在妊高征及正常妊娠胎盘绒毛组织的表达。结果 (1)妊高征组血浆ET-1水平(75.08±16.35) ng/L，明显高于正常妊娠组(47.62±8.66) ng/L，病情越重其值越高，且ET-1水平与妊高征患者平均动脉压呈正相关关系。(2)胎盘绒毛组织合体滋养细胞及胎儿血管内皮细胞有ET-1及ET-1 mRNA的表达，且妊高征组胎盘绒毛组织ET-1及ET-1 mRNA阳性信号较正常妊娠组增强。结论 血管内皮损伤与妊高征的发病有关，胎盘绒毛组织ET-1增高在妊高征的发病中起重要作用。
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Expression of Endothelin-1 and Endothelin-1 mRNA in Placental Villus of Pregnancy Induced Hypertension and The Changes of Plasma Endothelin-1 TONG Xiuqin, LI Shilan, ZHAO Yangyu, et al. The Third Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100083
【Abstract】 Objective To investigate the role of endothelin (ET-1) in the pathogenesis of pregnancy induced hypertension (PIH). Methods In 70 cases of PIH the plasma concentration of ET-1 was measured by RIA, and the expressions of ET-1 and its mRNA in placental villus were determined by immunohistochemistry and in situ hybridization respectively. 30 normal pregnant women (NP) served as control group. Results (1) The Plasma concentration of ET-1 was significantly higher in PIH than that in NP. There was a positive correlation between the plasma ET-1 level and mean arterial pressure in PIH. (2) The expressions of ET-1 and ET-1 mRNA were found in syncytiotrophoblast of placental villus and in the endothelium of fetal vessels. These positive signals were higher in PIH than in NP. Conclusion The injury of endothelium of fetal and placental blood vessels was one of the causes of PIH. The placenta may play an important role in the pathogenesis of PIH.
, 百拇医药
【Key words】 Pregnancy complications, cardiovascular Hypertension Endothelin-1 RNA, messenger
内皮素(ET-1)是目前已知最强的缩血管活性肽。心肌梗死、血管炎及肺动脉高压时，血浆内皮素水平增加。因此，人们提出血浆内皮素水平增加与高血压有关。妊高征患者胎盘娩出后病情缓解，且该病可发生于完全性葡萄胎患者，说明胎盘组织中的某些成分在妊高征的发病中起重要作用，我们采用免疫组化和原位杂交技术，检测ET-1及ET-1 mRNA在妊高征患者胎盘绒毛组织的表达情况，探讨其与妊高征发病的关系，为临床寻找妊高征病因提供依据。
资料与方法
一、研究对象
选择本院1996年7月～1997年7月住院产妇，其中正常妊娠妇女30例(正常妊娠组)，妊娠37～40周。妊高征患者70例(妊高征组)，按《妇产科学》第4版诊断标准分类。其中轻度30例，妊娠37～41周；中度20例，妊娠35～41周；重度20例，妊娠34～41周。年龄22～34岁。均为单胎初产妇，无高血压、糖尿病、肝肾疾病等合并症。
, 百拇医药
二、实验方法
1.标本采集：(1)产前取肘静脉血2 ml，置含抑肽酶400 IU、10%乙二胺四乙酸(EDTA) 10 μl的试管内，4℃离心10分钟，取上清-70℃冻存。(2)无内科合并症及并发症，仅因产科指征行选择性剖宫产的正常妊娠及重度妊高征患者各10例，胎盘娩出后，即刻取靠近脐带的胎盘绒毛膜板下绒毛组织0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm，液氮冻存待测。
2.检测方法：(1)放射免疫：用放射免疫法检测血浆ET-1水平。(2)免疫组化：胎盘绒毛组织冰冻切片8 μm厚，采用ET-1兔抗人抗体的免疫组化ABC法检测ET-1在胎盘绒毛组织的表达。并用缓冲液(PBS)代替Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ抗作为阴性对照。(3)原位杂交：胎盘绒毛组织冰冻切片5 μm厚，用ET-1 cDNA探针作原位杂交，检测胎盘绒毛组织ET-1 mRNA的表达。
三、统计方法
, 百拇医药
采用方差分析及直线相关分析。
结果
一、正常妊娠组及妊高征组血浆ET-1水平比较
结果显示，妊高征组血浆ET-1水平明显高于正常妊娠组，病情越重其值越高。但轻度妊高征与正常妊娠组比较，差异无显著性。不同程度妊高征之间及中度、重度妊高征与正常妊娠组间差异有显著性(P<0.05)。见表1。妊高征患者血浆ET-1水平与平均动脉压(MAP)呈正相关关系(r=0.919, P<0.05)。
表1 妊高征组及正常妊娠组血浆ET-1水平比较(
±s) 组别例数
ET-1 (ng/L)
, 百拇医药
正常妊娠组
30
47.62± 8.66
妊高征组
轻度
30
54.05±10.45*
中度
20
74.58±12.56**
重度
20
, 百拇医药
96.62±26.05**
* P>0.05 **P<0.05
二、胎盘绒毛组织ET-1蛋白抗原的表达
用免疫组化染色法我们发现，胎盘绒毛组织合体滋养细胞及胎儿血管内皮细胞有ET-1蛋白抗原的表达，妊高征组胎盘绒毛组织切片加入显色剂后3分钟开始显色，而正常对照组7分钟开始显色，同时终止反应后观察，妊高征组阳性信号较正常妊娠组增强。
三、胎盘绒毛组织ET-1 mRNA的表达
用原位杂交的方法我们发现，在胎盘绒毛组织合体滋养细胞及胎儿血管内皮细胞有ET-1 mRNA的表达，妊高征组胎盘绒毛组织切片加入显色剂后30分钟开始显色，而正常对照组1小时开始显色，同时终止反应后观察，妊高征组阳性信号较正常妊娠组增强。
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讨论
一、血浆ET-1与妊高征的关系
本研究中，妊高征组血浆ET-1水平明显高于正常妊娠组，与Dimitrios等[1]报道一致，妊高征病情越重其值越高，并与妊高征患者平均动脉压呈正相关关系。
许多研究结果表明，血管内皮损伤及功能障碍在妊高征发病机理中起重要作用[2]。ET-1是血管内皮细胞产生的一种强大的缩血管物质，并在血管内皮与平滑肌局部起作用。因此，内皮细胞解剖结构的分裂和破坏使内皮素从局部释放入血是妊高征患者血浆ET-1增加的主要原因之一。正常状态下血浆中就有一定水平的内皮素，与血栓素A2(TXA2)一起调节血管收缩效应，而这种效应被血管内皮衍生松弛因子(EDRF)及前列环素(PGI2)减弱，这样ET、TXA2与EDRF、PGI2按机体需要成比例释放，在体内保持动态平衡，控制机体血压和局部血流。妊高征时，由于血管内皮细胞损伤产生了高水平ET-1，血管内皮损伤使EDRF、PGI2产生减少[3]，导致妊高征患者血管舒缩因子平衡紊乱，引起妊高征一系列临床症状产生。
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二、胎盘绒毛组织ET-1变化与妊高征的关系
本研究显示，胎盘绒毛组织合体滋养细胞及胎儿血管内皮细胞有ET-1及ET-1 mRNA表达，妊高征患者胎盘表达量高。妊高征时胎盘绒毛组织ET-1的增加，在胎盘局部引起胎儿血管收缩，合体滋养细胞产生的ET-1释放入绒毛间隙，经子宫静脉开口进入循环血中，这可能是妊高征患者血浆ET-1水平增加的重要原因之一。
ET-1增加引起子宫螺旋小动脉痉挛，从而引起或加重胎盘血液供应不良，胎儿-胎盘循环阻力增加[4，5]。据文献报道，ET-1以剂量依赖的方式刺激胎盘纤维细胞DNA的合成，并在非生理水平使胰岛素样生长因子的合成及释放增加[6]。推测ET-1的增加与妊高征胎盘的异常发育有关。因此，我们认为ET-1增高可能是妊高征患者易并发IUGR的原因之一。
参考文献
, 百拇医药
[1] Dimitrios S, Mastrogiannis MD, William F, et al. Potential role of endothelin-1 in normal and hypertensive pregnancy. Am J Obstet Gynecol, 1991, 165:1711-1766.
[2] James M, Roberts MD, Robert N, et al. Preeclampsia: an endothelial cell disorder. Am J Obstet Gynecol, 1989, 161:1200-1204.
[3] Nucci G, Branch DW. Receptor mediated release of endothelium derived relaxing factor and prostacylin from boving aortic endothelial cell is coupled. Proc Natl Axad Sci USA, 1988, 85:1075.
, http://www.100md.com
[4] Trudinger BJ, Giles WB, Cooke GM, et al. Fetal umbilical arterry flow velocity wave forms and placental resistance clinical significance. Br J Obstet Gynaecol, 1985, 92:23-30.
[5] 李诗兰，谢道银，王泽密，等.彩色多普勒超声检测妊高征患者肾内小动脉和脐动脉血流速度变化.北京医科大学学报，1996，1：43-45.
[6] Fant ME, Nanu L, Word RA. A potent role for endothelin-1 in human placental growth factor family of peptides, J Clin Endocrinol Metab, 1992, 74:1158-1163.
(收稿：1998-05-28 修回：1998-09-06), 百拇医药