子宫内膜异位症患者血中自然杀伤细胞及腹腔液中肿瘤坏死因子的测定
作者：韩璐 常德安
单位：116012 大连市妇产医院(韩璐)；大连医科大学附属第二医院妇产科(常德安)
关键词：
中华妇产科杂志990114 近年来,子宫内膜异位症(内异症)发病率明显增高, 以往的各种学说对病因均不能作完善解释。大量研究表明，免疫学变化在该病的发病机理中具有重要作用。我们通过对29 例内异症患者外周血自然杀伤细胞(NKC)活性及腹腔液中肿瘤坏死因子(TNF)进行测定,了解两者在内异症中的变化。
一、资料和方法
1.研究对象:为1995年3月至1997年3月大连市妇产医院、大连医科大学附属第二医院收治的子宫内膜异位症患者，29例(内异症组),年龄25～50岁。按美国生育协会修正标准分期：Ⅰ期4例,Ⅱ期6例,Ⅲ期9例,Ⅳ期10例,均经开腹手术后病理检查证实,且术前3个月内未经激素治疗。同时选择月经周期规律、 生育力正常的育龄期妇女15例为对照(对照组),年龄31～45岁,其中11例为行输卵管绝育术,4例为行输卵管再通术者。
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2.方法:NKC活性测定:均于月经周期的第5天采外周血3 ml, 2 ml置肝素抗凝管,测NKC活性用,余1 ml的血清标本-20℃保存待测雌二醇(E2)用。制备靶细胞:由大连医科大学卫生学教研室提供传代培养24小时后的K562细胞,调整细胞浓度为2.5×105个/ml,成活率达95%以上。制备效应细胞:抗凝的静脉血2 ml, 分离淋巴细胞,调细胞浓度为5×106个/ml,成活率达95%以上。以2小时短程释放法测活性。测定组效靶各0.1 ml, 自然释放组以培养液代替效应细胞;最大释放组以表面活性剂代替效应细胞。在酶联免疫测定仪中以490 nm测其吸光度值(A),每份标本均做复管。外周血E2测定:采用放射免疫(放免)法,由天津九鼎公司提供E2放免测定试剂盒,于标准曲线上查出标本E2浓度。腹腔液TNF含量测定:开腹手术者立即收集腹腔液5 ml置于无菌离心管中,离心后收集上清液置于-30℃保存待测,凡有溶血者弃之不用。采用放免法测定,由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供TNF放免分析盒,按说明书操作,于自动γ计数器上测定,按放免程序直接得出样品中的TNF浓度。
, 百拇医药
3.统计学方法:结果以
±s表示,显著性标准α=0.05( 双侧)。两样本间行t检验,多样本间行方差分析、直线回归与相关分析。
二、结果
1.外周血NKC活性:内异症组外周血NKC活性为14.9%±12.4%，较对照组的37.7%±4.2%为低,差异有极显著性(P<0.01)。
2.NKC活性与疾病程度的关系:NKC活性与临床期别呈负相关(r=-0.83,P<0.001)，随临床期别增加而递减。见表1。
3.血NKC活性与血E2水平的相关性:两者呈负相关(r=-0.88， P<0.001)。见表1。
表1 两组NKC活性、TNF含量及E2水平(±s) 组别
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总例数
NKC(%)
TNF(μg/L)
E2(pmol/L)
对照组
15
37.7±4.2
0.55±0.40
148± 39
内异症组
Ⅰ期
4
, 百拇医药
24.0±7.2
0.62±0.22
112± 26
Ⅱ期
6
20.7±7.2
0.78±0.52
161± 48
Ⅲ期
9
13.5±8.0
1.11±0.71
, 百拇医药 411±165
Ⅳ期
10
9.2±3.4
1.46±1.02
653±226
4.腹腔液TNF含量:内异症组腹腔液中TNF含量为(1.09±0.96) μg/L，较对照组(0.55±0.40) μg/L增高, 差异有显著性(P<0.05)。内异症组Ⅰ、Ⅱ期TNF含量与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)；Ⅲ、Ⅳ期与对照组比较，差异有显著性(P<0.05)。Ⅲ、Ⅳ期患者TNF含量[(1.29±0.93) μg/L]较Ⅰ、 Ⅱ期[(0.71±0.44) μg/L]增加,差异有显著性(P<0.05)。
三、讨论
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NKC作为一类无须致敏而具有细胞毒性的淋巴细胞，在机体的抗肿瘤发生中发挥着重要的免疫监督作用。 本研究结果显示，内异症患者外周血NKC活性显著降低,这与Oosterlynek等[1]报道的一致。体外实验也表明，NKC与子宫内膜细胞杀伤有关, 推测内异症患者血NKC活性下降致使异位腹腔内的活性内膜细胞未被消除[2]。本研究结果还显示,内异症患者NKC活性与临床期别呈负相关,即随着疾病程度的进展NKC活性下降更为明显。人们发现，内异症是雌激素依赖性疾病,而雌激素又是免疫功能的重要调节因素。 本研究发现，内异症患者存在着高雌激素水平和低 NKC 活性的现象。NKC活性与外周血E2浓度呈负相关,Ⅲ、Ⅳ期患者较Ⅰ、 Ⅱ期E2水平升高明显,其原因可能是E2对NKC毒性有直接抑制作用[3]。 大量研究表明,内异症的免疫变化与细胞因子有着密切的关系,其中TNF参与内异症的发病和进展。而内异症患者腹腔液TNF含量明显增高，且随病变程度加重而增加。TNF在刺激T淋巴细胞增殖,活化介导免疫反应,促进前列腺素合成和纤维蛋白形成,盆腔纤维化和粘连形成中起一定作用。内异症患者为什么会出现低NKC活性、高TNF含量这一矛盾现象， 两者何为因果，有待进一步探讨。
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参考文献
[1] Oosterlynek DJ,Cornillic FJ, Wear M, et al. Women with endometriosis show a defect in natural killer activty resulting in a decreased cytotoxicity to autologous endometrium.Fertil Steril， 1991，56:45-51.
[2] Hirata J, Kikuchi Y, Imaizumi E, et al. Endometriotic tissue produce immunosuppressive factors.Gynecol Obstet Invest， 1994，37:43-47.
[3] Provinciali M,Fabris N. Models and mechanisms of neuroendocrine- immune interacting during ontogeny. Adv Neuro Immumel, 1991，1:124-138.
(收稿：1997-07-24 修回：1998-09-10), http://www.100md.com
单位：116012 大连市妇产医院(韩璐)；大连医科大学附属第二医院妇产科(常德安)
关键词：
中华妇产科杂志990114 近年来,子宫内膜异位症(内异症)发病率明显增高, 以往的各种学说对病因均不能作完善解释。大量研究表明，免疫学变化在该病的发病机理中具有重要作用。我们通过对29 例内异症患者外周血自然杀伤细胞(NKC)活性及腹腔液中肿瘤坏死因子(TNF)进行测定,了解两者在内异症中的变化。
一、资料和方法
1.研究对象:为1995年3月至1997年3月大连市妇产医院、大连医科大学附属第二医院收治的子宫内膜异位症患者，29例(内异症组),年龄25～50岁。按美国生育协会修正标准分期：Ⅰ期4例,Ⅱ期6例,Ⅲ期9例,Ⅳ期10例,均经开腹手术后病理检查证实,且术前3个月内未经激素治疗。同时选择月经周期规律、 生育力正常的育龄期妇女15例为对照(对照组),年龄31～45岁,其中11例为行输卵管绝育术,4例为行输卵管再通术者。
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2.方法:NKC活性测定:均于月经周期的第5天采外周血3 ml, 2 ml置肝素抗凝管,测NKC活性用,余1 ml的血清标本-20℃保存待测雌二醇(E2)用。制备靶细胞:由大连医科大学卫生学教研室提供传代培养24小时后的K562细胞,调整细胞浓度为2.5×105个/ml,成活率达95%以上。制备效应细胞:抗凝的静脉血2 ml, 分离淋巴细胞,调细胞浓度为5×106个/ml,成活率达95%以上。以2小时短程释放法测活性。测定组效靶各0.1 ml, 自然释放组以培养液代替效应细胞;最大释放组以表面活性剂代替效应细胞。在酶联免疫测定仪中以490 nm测其吸光度值(A),每份标本均做复管。外周血E2测定:采用放射免疫(放免)法,由天津九鼎公司提供E2放免测定试剂盒,于标准曲线上查出标本E2浓度。腹腔液TNF含量测定:开腹手术者立即收集腹腔液5 ml置于无菌离心管中,离心后收集上清液置于-30℃保存待测,凡有溶血者弃之不用。采用放免法测定,由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供TNF放免分析盒,按说明书操作,于自动γ计数器上测定,按放免程序直接得出样品中的TNF浓度。
, 百拇医药
3.统计学方法:结果以
±s表示,显著性标准α=0.05( 双侧)。两样本间行t检验,多样本间行方差分析、直线回归与相关分析。二、结果
1.外周血NKC活性:内异症组外周血NKC活性为14.9%±12.4%，较对照组的37.7%±4.2%为低,差异有极显著性(P<0.01)。
2.NKC活性与疾病程度的关系:NKC活性与临床期别呈负相关(r=-0.83,P<0.001)，随临床期别增加而递减。见表1。
3.血NKC活性与血E2水平的相关性:两者呈负相关(r=-0.88， P<0.001)。见表1。
表1 两组NKC活性、TNF含量及E2水平(
±s) 组别, http://www.100md.com
总例数
NKC(%)
TNF(μg/L)
E2(pmol/L)
对照组
15
37.7±4.2
0.55±0.40
148± 39
内异症组
Ⅰ期
4
, 百拇医药
24.0±7.2
0.62±0.22
112± 26
Ⅱ期
6
20.7±7.2
0.78±0.52
161± 48
Ⅲ期
9
13.5±8.0
1.11±0.71
, 百拇医药 411±165
Ⅳ期
10
9.2±3.4
1.46±1.02
653±226
4.腹腔液TNF含量:内异症组腹腔液中TNF含量为(1.09±0.96) μg/L，较对照组(0.55±0.40) μg/L增高, 差异有显著性(P<0.05)。内异症组Ⅰ、Ⅱ期TNF含量与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)；Ⅲ、Ⅳ期与对照组比较，差异有显著性(P<0.05)。Ⅲ、Ⅳ期患者TNF含量[(1.29±0.93) μg/L]较Ⅰ、 Ⅱ期[(0.71±0.44) μg/L]增加,差异有显著性(P<0.05)。
三、讨论
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NKC作为一类无须致敏而具有细胞毒性的淋巴细胞，在机体的抗肿瘤发生中发挥着重要的免疫监督作用。 本研究结果显示，内异症患者外周血NKC活性显著降低,这与Oosterlynek等[1]报道的一致。体外实验也表明，NKC与子宫内膜细胞杀伤有关, 推测内异症患者血NKC活性下降致使异位腹腔内的活性内膜细胞未被消除[2]。本研究结果还显示,内异症患者NKC活性与临床期别呈负相关,即随着疾病程度的进展NKC活性下降更为明显。人们发现，内异症是雌激素依赖性疾病,而雌激素又是免疫功能的重要调节因素。 本研究发现，内异症患者存在着高雌激素水平和低 NKC 活性的现象。NKC活性与外周血E2浓度呈负相关,Ⅲ、Ⅳ期患者较Ⅰ、 Ⅱ期E2水平升高明显,其原因可能是E2对NKC毒性有直接抑制作用[3]。 大量研究表明,内异症的免疫变化与细胞因子有着密切的关系,其中TNF参与内异症的发病和进展。而内异症患者腹腔液TNF含量明显增高，且随病变程度加重而增加。TNF在刺激T淋巴细胞增殖,活化介导免疫反应,促进前列腺素合成和纤维蛋白形成,盆腔纤维化和粘连形成中起一定作用。内异症患者为什么会出现低NKC活性、高TNF含量这一矛盾现象， 两者何为因果，有待进一步探讨。
, http://www.100md.com
参考文献
[1] Oosterlynek DJ,Cornillic FJ, Wear M, et al. Women with endometriosis show a defect in natural killer activty resulting in a decreased cytotoxicity to autologous endometrium.Fertil Steril， 1991，56:45-51.
[2] Hirata J, Kikuchi Y, Imaizumi E, et al. Endometriotic tissue produce immunosuppressive factors.Gynecol Obstet Invest， 1994，37:43-47.
[3] Provinciali M,Fabris N. Models and mechanisms of neuroendocrine- immune interacting during ontogeny. Adv Neuro Immumel, 1991，1:124-138.
(收稿：1997-07-24 修回：1998-09-10), http://www.100md.com