白细胞介素6在早产胎膜早破孕妇血清及胎膜组织中的表达
作者：赵扬玉 李诗兰 佟秀琴 杨池荪
单位：100083 北京医科大学第三临床医院妇产科[赵扬玉(现在北京民航总医院)，李诗兰，佟秀琴，杨池荪]
关键词：白细胞介素6；胎膜早破；分娩；早产
中华妇产科杂志990303 【摘要】 目的 探讨白细胞介素6(IL-6)在早产胎膜早破孕妇血清中的水平及其在胎膜组织中的表达与早产胎膜早破的关系。方法 采用酶联免疫吸附法和免疫组化方法，对30例早产胎膜早破孕妇(14例为早产1组，即有中、重度绒毛膜羊膜炎者；16例为早产2组，即无中、重度绒毛膜羊膜炎者)和20例正常孕妇(对照组)血清中IL-6水平及胎膜组织中IL-6蛋白表达进行检测。结果 早产1组孕妇血清中IL-6水平明显高于其他两组，差异均有极显著性(P<0.01)；早产1组、早产2组及对照组IL-6分别为155.17 ng/L、79.11 ng/L及70.15 ng/L。早产两组的胎膜组织中，有绒毛膜羊膜炎者，在绒毛膜层有较多的IL-6蛋白表达，在侵入绒毛膜的炎性细胞胞浆中，IL-6表达更明显。结论 IL-6与感染引起的早产有关。
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Serum Concentration of Interleukin-6 in Maternal Serum and its Expression in Amniochorionic Membranes of Preterm Premature Rupture of Membrane ZHAO Yangyu, LI Shilan, TONG Xiuqin, et al. The Third Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100083
【Abstract】 Objective To investigate the relationship between interleukin-6 (IL-6) and preterm premature rupture of membranes (PPROM). Methods Serum IL-6 in 20 cases of normal pregnancy (control group) and 30 cases with PPROM in which 14 had moderate and severe chorioamnionitis (group 1), 16 had no chorioamnionitis (group 2) were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and IL-6 protein in fetal membranes were determined by immunohistochemistry technique. Results The level of serum IL-6 in group 1 (155.17 ng/L) was significantly higher than that in group 2 (79.11 ng/L) and control group (70.15 ng/L) (P<0.01). Expression of the IL-6 had more positive signs in chorion with chorioamnionitis, especially in infiltrating inflammatory cells. Conclusion IL-6 associated with the onset of preterm labor caused by infection.
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【Key words】 Interleukin-6 Fetal membranes, premature rupture Labor, premature
早产的发病率虽然只有5%～15%，但对母婴影响较为严重。早产的确切病因目前尚不清楚。近年来，有人提出，炎性细胞因子与早产有关。采用羊水中的炎性细胞因子如白细胞介素6(interleukin-6, IL-6)的检测，用来预测亚临床感染引起的早产，在国外已有较多的报道[1，2]。本研究通过检测早产胎膜早破孕妇血清中IL-6水平及胎膜组织中IL-6蛋白的定位表达，探讨IL-6与早产胎膜早破的关系，为临床诊治早产提供依据。
材料与方法
一、研究对象
1.病例选择：选择1996年10月至1997年9月，因早产胎膜早破在我院住院分娩的产妇30例，按胎膜组织病理学检查结果，分为早产1组，即有中、重度绒毛膜羊膜炎者，14例；早产2组，即无中、重度绒毛膜羊膜炎者，16例。该两组均无临床感染症状，在妊娠32～37+6周间分娩。另选择妊娠32～37+6周，在我院产前门诊检查者20例为对照组。所有孕妇均无产科及内、外科合并症。
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2.胎盘绒毛膜羊膜炎的诊断标准[3]：在绒毛膜及羊膜组织中，中性粒细胞浸润每高倍视野5～10个为轻度；11～30个为中度；>30个为重度。
二、方法
1.标本采集：(1)孕妇血清标本的采集：所有孕妇取血时，均无宫缩。取肘静脉血4 ml，分离血清，-20℃冰箱保存待测。(2)胎膜标本的采集：胎盘娩出后，取离胎膜破口5 cm以上的胎膜组织2 cm×3 cm×0.5 cm，用10%甲醛固定，常规石蜡包埋，室温保存，待病理学和免疫组织化学检测。
2.检测方法：(1)血清中IL-6的检测：IL-6试剂盒由北京邦定公司提供，采用酶联免疫吸附试验检测，在酶联免疫测定仪上测定410 nm处吸光度值，绘制标准曲线，计算IL-6水平。(2)胎膜组织IL-6蛋白的检测：采用免疫组化(ABC)方法。I抗为鼠抗人IL-6单克隆抗体(系邦定公司产品)；Ⅱ抗为生物化兔抗鼠IgG；Ⅲ抗为辣根酶标记的链霉卵白素(为北京中山生物技术有限公司产品)。主要步骤按ABC免疫组化试剂盒内说明书进行。结果判定：光镜下细胞浆内有棕黄色颗粒，即为IL-6蛋白表达。
, 百拇医药
三、统计分析
血清中IL-6为偏态分布，取自然对数使其呈正态分布后进行统计，以
±s表示。采用单因素方差分析，用SPSS Windows 6.0统计软件包进行统计。
结 果
一、各组孕妇血清中IL-6水平
早产1组孕妇血清中IL-6水平明显高于早产2组及对照组，差异均有极显著性(P<0.01)，而后两组比较，差异无显著性(P>0.05)。见表1。
表1 三组孕妇血清中IL-6水平比较 组别
例数
, 百拇医药
IL-6(ng/L,±s)
早产1组
14
155.17±62.00*
早产2组
16
79.11±17.96
对照组
20
70.15±14.62
*与早产2组及对照组比较，P<0.01
, 百拇医药
二、胎膜组织中IL-6蛋白的表达
在早产2组的胎膜组织中，羊膜细胞胞浆内有IL-6蛋白表达，而绒毛膜层内仅有散在的棕黄色颗粒。在早产1组胎膜组织中，IL-6蛋白除在羊膜细胞胞浆内有表达外，在绒毛膜层内也有较明显表达，尤其在侵入绒毛膜的炎性细胞胞浆中，IL-6蛋白表达更加明显。两组比较，差异有显著性(P<0.05)。
讨 论
一、血清中IL-6水平与早产的关系
细胞因子是一组相关的糖蛋白，主要因感染或免疫反应而由激活的免疫细胞和间质细胞所合成。蜕膜含有丰富的巨噬细胞，是人类妊娠组织中合成各种细胞因子的主要来源，羊膜绒毛膜也被认为是炎性细胞因子产生的场所。IL-6是一种炎性细胞因子。正常妊娠情况下，生殖器官局部组织细胞产生适量的IL-6，对胎儿的生长发育及足月临产的发动有一定作用，如果IL-6产生过多，并进入母体循环，则可引起病理情况。本研究发现，有绒毛膜羊膜炎引起早产者，母血中IL-6水平升高，与Greiy等[4]及Ollesezezuk等[5]报道的结果一致。
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二、胎膜组织IL-6蛋白表达与早产的关系
Menon等[6]应用免疫组化方法研究发现，在感染或经内毒素刺激后的羊膜及绒毛膜组织，均有IL-6蛋白表达。本研究用免疫组化方法，对早产有绒毛膜羊膜炎的胎膜组织进行IL-6蛋白表达的检测，结果与Menon等[6]的结果一致。本研究还发现，在侵入绒毛膜的炎性细胞胞浆中，IL-6蛋白的表达更明显，说明这些侵入到绒毛膜羊膜中的炎性细胞，也是IL-6的主要来源。我们认为，早产的发动，可能是由于羊膜绒毛膜组织中侵入的大量炎性细胞使IL-6产生增加，而IL-6可使羊膜及绒毛膜合成和分泌前列腺素[7]，从而引起子宫收缩，引发早产。另外，这些炎性细胞释放溶酶体酶，使胎膜组织变性、坏死，张力下降，引起胎膜早破并导致早产的发生。
参考文献
1 Hillier SL, Wikin SS, Krohn MA, et al. The relationship of amnion fluid cytokines and preterm delivery, amniotic fluid infection, hislotogic chorioammnionitis, and chorioamnion infection. Obstet Gynecol, 1993, 81:941-948.
, 百拇医药
2 Yoon BH, Romero R, Kim CJ, et al. Amnion fluid interleukin-6: a sensitive test for antenatal acute inflummatory lesions of preterm placenta and prediction of perinatal morbidity. Am J Obstet Gynecol, 1995, 172:960-763.
3 陈忠年.妇产科病理学.第1版.上海：上海医科大学出版社，1996.341-344.
4 Greiy PC, Murtha AP, Jimmerson CT, et al. Maternal serum interleukin-6 during pregnancy and auring term and preterm labor. Obstet Gynecol, 1997, 90:464-469.
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5 Olleszezuk J, Wawrzyoke B, Maj JG, et al. Interleukin-6 and neopterin levels in serukm of patlents with preterm labor with and without infection. Eur J Obstet Gynecol Reproductive Biology, 1997, 74:27-30.
6 Menon R, Swan KF, Lyden TW, et al. Expression of inflammatory cytokines (interleukin-1β and interleukin-6) in ammniochorionic membranes. Am J Obstet Gynecol, 1995, 172:493-500.
7 Mithell MD, Dudlly DJ, Edwin SS, et al. Interleukin-6 stimulates prostayandin production by human amnion and decidual cells. Eur J Pharmacol, 1991, 192:189-191.
(收稿：1998-07-01 修回：1998-11-14), http://www.100md.com
单位：100083 北京医科大学第三临床医院妇产科[赵扬玉(现在北京民航总医院)，李诗兰，佟秀琴，杨池荪]
关键词：白细胞介素6；胎膜早破；分娩；早产
中华妇产科杂志990303 【摘要】 目的 探讨白细胞介素6(IL-6)在早产胎膜早破孕妇血清中的水平及其在胎膜组织中的表达与早产胎膜早破的关系。方法 采用酶联免疫吸附法和免疫组化方法，对30例早产胎膜早破孕妇(14例为早产1组，即有中、重度绒毛膜羊膜炎者；16例为早产2组，即无中、重度绒毛膜羊膜炎者)和20例正常孕妇(对照组)血清中IL-6水平及胎膜组织中IL-6蛋白表达进行检测。结果 早产1组孕妇血清中IL-6水平明显高于其他两组，差异均有极显著性(P<0.01)；早产1组、早产2组及对照组IL-6分别为155.17 ng/L、79.11 ng/L及70.15 ng/L。早产两组的胎膜组织中，有绒毛膜羊膜炎者，在绒毛膜层有较多的IL-6蛋白表达，在侵入绒毛膜的炎性细胞胞浆中，IL-6表达更明显。结论 IL-6与感染引起的早产有关。
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Serum Concentration of Interleukin-6 in Maternal Serum and its Expression in Amniochorionic Membranes of Preterm Premature Rupture of Membrane ZHAO Yangyu, LI Shilan, TONG Xiuqin, et al. The Third Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100083
【Abstract】 Objective To investigate the relationship between interleukin-6 (IL-6) and preterm premature rupture of membranes (PPROM). Methods Serum IL-6 in 20 cases of normal pregnancy (control group) and 30 cases with PPROM in which 14 had moderate and severe chorioamnionitis (group 1), 16 had no chorioamnionitis (group 2) were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and IL-6 protein in fetal membranes were determined by immunohistochemistry technique. Results The level of serum IL-6 in group 1 (155.17 ng/L) was significantly higher than that in group 2 (79.11 ng/L) and control group (70.15 ng/L) (P<0.01). Expression of the IL-6 had more positive signs in chorion with chorioamnionitis, especially in infiltrating inflammatory cells. Conclusion IL-6 associated with the onset of preterm labor caused by infection.
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【Key words】 Interleukin-6 Fetal membranes, premature rupture Labor, premature
早产的发病率虽然只有5%～15%，但对母婴影响较为严重。早产的确切病因目前尚不清楚。近年来，有人提出，炎性细胞因子与早产有关。采用羊水中的炎性细胞因子如白细胞介素6(interleukin-6, IL-6)的检测，用来预测亚临床感染引起的早产，在国外已有较多的报道[1，2]。本研究通过检测早产胎膜早破孕妇血清中IL-6水平及胎膜组织中IL-6蛋白的定位表达，探讨IL-6与早产胎膜早破的关系，为临床诊治早产提供依据。
材料与方法
一、研究对象
1.病例选择：选择1996年10月至1997年9月，因早产胎膜早破在我院住院分娩的产妇30例，按胎膜组织病理学检查结果，分为早产1组，即有中、重度绒毛膜羊膜炎者，14例；早产2组，即无中、重度绒毛膜羊膜炎者，16例。该两组均无临床感染症状，在妊娠32～37+6周间分娩。另选择妊娠32～37+6周，在我院产前门诊检查者20例为对照组。所有孕妇均无产科及内、外科合并症。
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2.胎盘绒毛膜羊膜炎的诊断标准[3]：在绒毛膜及羊膜组织中，中性粒细胞浸润每高倍视野5～10个为轻度；11～30个为中度；>30个为重度。
二、方法
1.标本采集：(1)孕妇血清标本的采集：所有孕妇取血时，均无宫缩。取肘静脉血4 ml，分离血清，-20℃冰箱保存待测。(2)胎膜标本的采集：胎盘娩出后，取离胎膜破口5 cm以上的胎膜组织2 cm×3 cm×0.5 cm，用10%甲醛固定，常规石蜡包埋，室温保存，待病理学和免疫组织化学检测。
2.检测方法：(1)血清中IL-6的检测：IL-6试剂盒由北京邦定公司提供，采用酶联免疫吸附试验检测，在酶联免疫测定仪上测定410 nm处吸光度值，绘制标准曲线，计算IL-6水平。(2)胎膜组织IL-6蛋白的检测：采用免疫组化(ABC)方法。I抗为鼠抗人IL-6单克隆抗体(系邦定公司产品)；Ⅱ抗为生物化兔抗鼠IgG；Ⅲ抗为辣根酶标记的链霉卵白素(为北京中山生物技术有限公司产品)。主要步骤按ABC免疫组化试剂盒内说明书进行。结果判定：光镜下细胞浆内有棕黄色颗粒，即为IL-6蛋白表达。
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三、统计分析
血清中IL-6为偏态分布，取自然对数使其呈正态分布后进行统计，以
±s表示。采用单因素方差分析，用SPSS Windows 6.0统计软件包进行统计。结 果
一、各组孕妇血清中IL-6水平
早产1组孕妇血清中IL-6水平明显高于早产2组及对照组，差异均有极显著性(P<0.01)，而后两组比较，差异无显著性(P>0.05)。见表1。
表1 三组孕妇血清中IL-6水平比较 组别
例数
, 百拇医药
IL-6(ng/L,
±s)早产1组
14
155.17±62.00*
早产2组
16
79.11±17.96
对照组
20
70.15±14.62
*与早产2组及对照组比较，P<0.01
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二、胎膜组织中IL-6蛋白的表达
在早产2组的胎膜组织中，羊膜细胞胞浆内有IL-6蛋白表达，而绒毛膜层内仅有散在的棕黄色颗粒。在早产1组胎膜组织中，IL-6蛋白除在羊膜细胞胞浆内有表达外，在绒毛膜层内也有较明显表达，尤其在侵入绒毛膜的炎性细胞胞浆中，IL-6蛋白表达更加明显。两组比较，差异有显著性(P<0.05)。
讨 论
一、血清中IL-6水平与早产的关系
细胞因子是一组相关的糖蛋白，主要因感染或免疫反应而由激活的免疫细胞和间质细胞所合成。蜕膜含有丰富的巨噬细胞，是人类妊娠组织中合成各种细胞因子的主要来源，羊膜绒毛膜也被认为是炎性细胞因子产生的场所。IL-6是一种炎性细胞因子。正常妊娠情况下，生殖器官局部组织细胞产生适量的IL-6，对胎儿的生长发育及足月临产的发动有一定作用，如果IL-6产生过多，并进入母体循环，则可引起病理情况。本研究发现，有绒毛膜羊膜炎引起早产者，母血中IL-6水平升高，与Greiy等[4]及Ollesezezuk等[5]报道的结果一致。
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二、胎膜组织IL-6蛋白表达与早产的关系
Menon等[6]应用免疫组化方法研究发现，在感染或经内毒素刺激后的羊膜及绒毛膜组织，均有IL-6蛋白表达。本研究用免疫组化方法，对早产有绒毛膜羊膜炎的胎膜组织进行IL-6蛋白表达的检测，结果与Menon等[6]的结果一致。本研究还发现，在侵入绒毛膜的炎性细胞胞浆中，IL-6蛋白的表达更明显，说明这些侵入到绒毛膜羊膜中的炎性细胞，也是IL-6的主要来源。我们认为，早产的发动，可能是由于羊膜绒毛膜组织中侵入的大量炎性细胞使IL-6产生增加，而IL-6可使羊膜及绒毛膜合成和分泌前列腺素[7]，从而引起子宫收缩，引发早产。另外，这些炎性细胞释放溶酶体酶，使胎膜组织变性、坏死，张力下降，引起胎膜早破并导致早产的发生。
参考文献
1 Hillier SL, Wikin SS, Krohn MA, et al. The relationship of amnion fluid cytokines and preterm delivery, amniotic fluid infection, hislotogic chorioammnionitis, and chorioamnion infection. Obstet Gynecol, 1993, 81:941-948.
, 百拇医药
2 Yoon BH, Romero R, Kim CJ, et al. Amnion fluid interleukin-6: a sensitive test for antenatal acute inflummatory lesions of preterm placenta and prediction of perinatal morbidity. Am J Obstet Gynecol, 1995, 172:960-763.
3 陈忠年.妇产科病理学.第1版.上海：上海医科大学出版社，1996.341-344.
4 Greiy PC, Murtha AP, Jimmerson CT, et al. Maternal serum interleukin-6 during pregnancy and auring term and preterm labor. Obstet Gynecol, 1997, 90:464-469.
, http://www.100md.com
5 Olleszezuk J, Wawrzyoke B, Maj JG, et al. Interleukin-6 and neopterin levels in serukm of patlents with preterm labor with and without infection. Eur J Obstet Gynecol Reproductive Biology, 1997, 74:27-30.
6 Menon R, Swan KF, Lyden TW, et al. Expression of inflammatory cytokines (interleukin-1β and interleukin-6) in ammniochorionic membranes. Am J Obstet Gynecol, 1995, 172:493-500.
7 Mithell MD, Dudlly DJ, Edwin SS, et al. Interleukin-6 stimulates prostayandin production by human amnion and decidual cells. Eur J Pharmacol, 1991, 192:189-191.
(收稿：1998-07-01 修回：1998-11-14), http://www.100md.com