整合素β1在早孕流产绒毛组织中的表达
作者：李艳萍 谌兵来 曾文洁 刘年彬
单位：李艳萍，曾文洁，刘年彬(410008 长沙，湖南医科大学附属湘雅医院妇产科)；谌兵来(中心实验室)
关键词：
中华妇产科杂志990422 本研究用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测整合素β1在稽留流产、药物流产及正常早孕绒毛组织中的信使核糖核酸(mRNA)表达，探讨其与早期流产的关系。
一、资料与方法
1.研究对象：(1)稽留流产组:1998年1月至3月期间在我院门诊或住院，此次妊娠前3个月月经规则，停经10～12周(平均76.3天)，尿妊娠免疫试验阳性，经B超检查诊断为胚胎在宫内死亡尚未自然排出者，共10例。平均年龄27.4岁。(2)药物流产组及对照组：同期在我院及附属第二医院门诊就诊，自愿终止妊娠的健康早孕妇女，此次妊娠前3个月月经规则，经妇科检查、超声检查确诊为宫内妊娠，无药物流产及人工流产禁忌证，各20例，分别行药物流产(药物流产组)与人工流产(对照组)。平均年龄分别为25.3岁及26.5岁，平均停经天数分别为43.6天及45.5天。均无肝、肾疾患及糖尿病。
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2.标本采集：(1)稽留流产组及对照组：均采用膜式电动吸引器真空吸引，无菌操作取绒毛组织，用生理盐水清洗干净，置-70℃冻存，稽留流产患者如吸出的组织为变性、机化则不做为本研究的对象。(2)药物流产组：口服米非司酮每天上午50 mg、下午25 mg，连服两天，第3天上午口服米索前列醇600 μg，服药前后均禁食2小时。于孕囊排出后立即取绒毛组织，以生理盐水清洗后置-70℃冻存。
3.整合素β1的测定：引物参照β1整合素亚单位cDNA序列设计[1]。引物1为 5′-GGAGAGTGGGTCTGGGGACA-GTGG-3′，引物2为 5′-TGAAGGC-TCTGCACTGAACA-3′。RT-PCR操作步骤：(1)提取绒毛组织中总RNA；(2)一步法行RT-PCR检测绒毛中整合素β1的mRNA表达(试剂盒购自美国Promega公司)；(3)结果判定：扩增产物以2%琼脂糖凝胶电泳40分钟后在紫外灯下观察各泳道是否有橙黄色荧光带出现，并与扩增时所设阳性对照比较，与其荧光在一条直线上的为阳性，反之为阴性。373bp为整合素β1扩增片段，323bp为阳性对照扩增片段。
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4.统计学方法：各样本率的比较采用F检验。
二、结果
稽留流产组整合素β1 mRNA阳性表达率为20%(2/10)，药物流产组和对照组分别为85%(17/20)、90%(18/20)。稽留流产组与对照组比较，差异有显著性(P<0.05)，药物流产组与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)。
三、讨论
1.绒毛组织中整合素β1 mRNA表达与稽留流产的关系：本研究结果显示，稽留流产者绒毛组织中整合素β1 mRNA表达阳性率明显低于正常妊娠。这与Stephens等[2]报道的一致。胚胎着床后，胚胎的外层滋养细胞分化成游离绒毛和固定绒毛,固定绒毛一部分侵入子宫螺旋动脉，并部分替代内皮使血管中空，平滑肌与弹性纤维为疏松结缔组织所取代，因而使血管腔扩大，子宫、胎盘血流量增加，即螺旋动脉的“血管重铸”，以保证孕期胎儿生长发育的需要。近年来应用分子生物学对固定绒毛柱进行研究发现，滋养细胞功能与其表达粘附分子有关。滋养细胞的浸润和固定与整合素α5β1、α1β1和αvβ3有关[3]。滋养层的侵蚀力受细胞外基质调节，而滋养层与细胞外基质蛋白的作用主要依靠粘附受体的整合素家族[4]。因此，当β1整合素表达缺失时，子宫螺旋动脉“血管重铸”受阻，胚胎缺血、缺氧，这可能是导致胚胎死亡、流产的原因。
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2.绒毛组织中整合素β1 mRNA表达与药物流产的关系：整合素是细胞表面传递来自细胞外基质信号的主要受体，早期胚胎的形成、发育及胎盘的形成，直接受细胞与细胞及细胞与细胞外基质相互作用的调节。相反，不正常的细胞与细胞及细胞与细胞外基质的相互作用将对这些过程产生严重的负作用。而这一方面的研究甚少，并多限于动物实验或免疫组化水平检测整合素的蛋白质表达[2]。本研究用分子生物学方法检测了人类流产组织的整合素基因表达，发现20例药物流产绒毛组织中整合素β1 mRNA的表达阳性率与对照组无显著差异。可能原因是米非司酮主要作用机理是与孕酮竞争蜕膜的孕激素受体,阻断孕酮活性,使蜕膜变性坏死。而其对绒毛的滋养细胞的退化作用，主要是继发于蜕膜组织退化及网状纤维的降解使绒毛失去支持所致[5]。
本研究受湖南省科委科研项目资助(98JTY1003)
参考文献
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1 Argraves WS, Suzuki S, Arai H,et al. Amino acid sequence of the human fibronectin receptor. J Cell Biol, 1987,105:1183-1190.
2 Stephens LE, Sutherland AE,Kilmanskaya IV,et al. Deletion of β1 integrins in mice results in inner cell mass failure and peri-implantatiom lethality. Dev Dyn, 1996, 206:330-342.
3 林其德.生殖免疫学进展.中华妇产科杂志,1998,33:4-6.
4 Armant DR,Kaplan HA, Lennarz WJ. Fibronetin and laminin promote in vitro attachment and outgrowth of mouse blastocysts. Dve Biol, 1986，116:519-523.
5 周先荣，周剑萍，杜心谷,等.米非司酮对早孕蜕膜和绒毛超微结构的影响.生殖与避孕, 1995，15：342-346.
(收稿：1998-07-14 修回：1999-01-12), 百拇医药
单位：李艳萍，曾文洁，刘年彬(410008 长沙，湖南医科大学附属湘雅医院妇产科)；谌兵来(中心实验室)
关键词：
中华妇产科杂志990422 本研究用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测整合素β1在稽留流产、药物流产及正常早孕绒毛组织中的信使核糖核酸(mRNA)表达，探讨其与早期流产的关系。
一、资料与方法
1.研究对象：(1)稽留流产组:1998年1月至3月期间在我院门诊或住院，此次妊娠前3个月月经规则，停经10～12周(平均76.3天)，尿妊娠免疫试验阳性，经B超检查诊断为胚胎在宫内死亡尚未自然排出者，共10例。平均年龄27.4岁。(2)药物流产组及对照组：同期在我院及附属第二医院门诊就诊，自愿终止妊娠的健康早孕妇女，此次妊娠前3个月月经规则，经妇科检查、超声检查确诊为宫内妊娠，无药物流产及人工流产禁忌证，各20例，分别行药物流产(药物流产组)与人工流产(对照组)。平均年龄分别为25.3岁及26.5岁，平均停经天数分别为43.6天及45.5天。均无肝、肾疾患及糖尿病。
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2.标本采集：(1)稽留流产组及对照组：均采用膜式电动吸引器真空吸引，无菌操作取绒毛组织，用生理盐水清洗干净，置-70℃冻存，稽留流产患者如吸出的组织为变性、机化则不做为本研究的对象。(2)药物流产组：口服米非司酮每天上午50 mg、下午25 mg，连服两天，第3天上午口服米索前列醇600 μg，服药前后均禁食2小时。于孕囊排出后立即取绒毛组织，以生理盐水清洗后置-70℃冻存。
3.整合素β1的测定：引物参照β1整合素亚单位cDNA序列设计[1]。引物1为 5′-GGAGAGTGGGTCTGGGGACA-GTGG-3′，引物2为 5′-TGAAGGC-TCTGCACTGAACA-3′。RT-PCR操作步骤：(1)提取绒毛组织中总RNA；(2)一步法行RT-PCR检测绒毛中整合素β1的mRNA表达(试剂盒购自美国Promega公司)；(3)结果判定：扩增产物以2%琼脂糖凝胶电泳40分钟后在紫外灯下观察各泳道是否有橙黄色荧光带出现，并与扩增时所设阳性对照比较，与其荧光在一条直线上的为阳性，反之为阴性。373bp为整合素β1扩增片段，323bp为阳性对照扩增片段。
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4.统计学方法：各样本率的比较采用F检验。
二、结果
稽留流产组整合素β1 mRNA阳性表达率为20%(2/10)，药物流产组和对照组分别为85%(17/20)、90%(18/20)。稽留流产组与对照组比较，差异有显著性(P<0.05)，药物流产组与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)。
三、讨论
1.绒毛组织中整合素β1 mRNA表达与稽留流产的关系：本研究结果显示，稽留流产者绒毛组织中整合素β1 mRNA表达阳性率明显低于正常妊娠。这与Stephens等[2]报道的一致。胚胎着床后，胚胎的外层滋养细胞分化成游离绒毛和固定绒毛,固定绒毛一部分侵入子宫螺旋动脉，并部分替代内皮使血管中空，平滑肌与弹性纤维为疏松结缔组织所取代，因而使血管腔扩大，子宫、胎盘血流量增加，即螺旋动脉的“血管重铸”，以保证孕期胎儿生长发育的需要。近年来应用分子生物学对固定绒毛柱进行研究发现，滋养细胞功能与其表达粘附分子有关。滋养细胞的浸润和固定与整合素α5β1、α1β1和αvβ3有关[3]。滋养层的侵蚀力受细胞外基质调节，而滋养层与细胞外基质蛋白的作用主要依靠粘附受体的整合素家族[4]。因此，当β1整合素表达缺失时，子宫螺旋动脉“血管重铸”受阻，胚胎缺血、缺氧，这可能是导致胚胎死亡、流产的原因。
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2.绒毛组织中整合素β1 mRNA表达与药物流产的关系：整合素是细胞表面传递来自细胞外基质信号的主要受体，早期胚胎的形成、发育及胎盘的形成，直接受细胞与细胞及细胞与细胞外基质相互作用的调节。相反，不正常的细胞与细胞及细胞与细胞外基质的相互作用将对这些过程产生严重的负作用。而这一方面的研究甚少，并多限于动物实验或免疫组化水平检测整合素的蛋白质表达[2]。本研究用分子生物学方法检测了人类流产组织的整合素基因表达，发现20例药物流产绒毛组织中整合素β1 mRNA的表达阳性率与对照组无显著差异。可能原因是米非司酮主要作用机理是与孕酮竞争蜕膜的孕激素受体,阻断孕酮活性,使蜕膜变性坏死。而其对绒毛的滋养细胞的退化作用，主要是继发于蜕膜组织退化及网状纤维的降解使绒毛失去支持所致[5]。
本研究受湖南省科委科研项目资助(98JTY1003)
参考文献
, 百拇医药
1 Argraves WS, Suzuki S, Arai H,et al. Amino acid sequence of the human fibronectin receptor. J Cell Biol, 1987,105:1183-1190.
2 Stephens LE, Sutherland AE,Kilmanskaya IV,et al. Deletion of β1 integrins in mice results in inner cell mass failure and peri-implantatiom lethality. Dev Dyn, 1996, 206:330-342.
3 林其德.生殖免疫学进展.中华妇产科杂志,1998,33:4-6.
4 Armant DR,Kaplan HA, Lennarz WJ. Fibronetin and laminin promote in vitro attachment and outgrowth of mouse blastocysts. Dve Biol, 1986，116:519-523.
5 周先荣，周剑萍，杜心谷,等.米非司酮对早孕蜕膜和绒毛超微结构的影响.生殖与避孕, 1995，15：342-346.
(收稿：1998-07-14 修回：1999-01-12), 百拇医药