米非司酮对早孕绒毛及蜕膜细胞周期动力学的影响
作者：周霞平 巫世娟 张利 黄健
单位：518029 深圳市红十字会医院妇产科
关键词：米非司酮；细胞周期；绒毛膜绒毛；蜕膜
中华妇产科杂志990506 【摘要】 目的 探讨米非司酮对早孕绒毛及蜕膜细胞周期动力学的影响。方法 应用流式细胞技术对23例正常早孕和24例口服米非司酮后吸宫流产物的绒毛及蜕膜组织，进行细胞周期动力学分析。 结果 服用米非司酮后，绒毛滋养层细胞G0 、G1 期细胞明显增加(P<0.01)，G2 、M期明显降低(P<0.01)，细胞增殖指数明显降低(P<0.01)；蜕膜细胞除G2 、M期细胞上升(P<0.05)外，其余各期无变化。结论 米非司酮可阻断滋养层G0 、G1 期细胞向S期的转化，从而抑制细胞增殖，且其对绒毛的作用大于对蜕膜的作用。
, 百拇医药
Effect of Mifepristone on Cell-cycle Kinetics of Human Placental
Chorio-trophoblastic and Decidual Cell
ZHOU Xiaping, WU Shijuan, ZHANG Li
Shenzhen Red Cross Hospital, Shenzhen 518029
【Abstract】 Objective To study the effects of mifepristone on cell-cycle kinetics of human placental chorio-trophoblastic and decidual cells. Methods Flow-cytometry was introduced in the study of the mechanism of early pregnancy terminating drug, mifepristone.Twenty-three samples were obtained from normal pregnant women by surgical aspiration. Another 24 samples were obtained in women pretreated with 150 mg mifepristone 48 hours before operation. Results The percentage of the cytotrophoblastic cells in G0 +G1 phases was much higher in the treatment group (P<0.01), whereas it was much lower (P<0.01) in G2 +M phases, and the proliferating index of cells was signifreantly decreased. Apart from the increasing of decidual cells in G2 +M phases(P<0.05), there was no change in other phases. Conclusions Mifepristone may block the transformation of the cytotrophoblastic cells from G0, G1 phases to S phase,thus leading to the block of the proliferation of cells. Mifepristone has much more significant effects on the chorionic villi than on the decidua.
, 百拇医药
【Key words】 Mifepristone Cellcycle Chorionic villi Decidua
本研究对早孕妇女服用米非司酮药物流产的流产物进行细胞周期动力学方面的探讨，试图进一步了解该药在体内对绒毛和蜕膜的影响，以及在细胞学方面的作用机理。
资料与方法
一、研究对象
为1997年12月至1998年5月在深圳市红十字会医院妇产科就诊，要求终止妊娠、自愿接受试验的47例早孕妇女。无急、慢性器质性病变，3个月内未用过甾体激素类药物且月经周期正常，未放置宫内节育器，停经44～49天，停经后也未用过任何其他药物，经妇科检查、尿妊娠试验及B超检查确诊为早孕者。
按服药与否分成两组：(1)米非司酮组24例，停经(46±1)天，口服米非司酮(上海华联制药有限公司产品) 150 mg(顿服)，服药前后均禁食2小时，服药48小时后行负压吸引流产；(2)对照组23例，停经(46±1)天，直接行负压吸引流产。
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二、方法
1.早孕流产绒毛及蜕膜的处理：将负压吸引流产所得妊娠物分别迅速存放于4℃生理盐水中，立即带回实验室，用4℃生理盐水洗3次，洗去血块，在显微镜下仔细分离绒毛及蜕膜组织，并剔除其他结缔组织等。将绒毛及蜕膜组织分别按Tanaka[1]所介绍的机械法制成细胞悬液。最后将细胞悬液以2 000 r/min离心15分钟，弃上清液，沉淀物充分混匀，并渐次加入无水乙醇2ml，放入4℃冰箱贮存待测。
2.DNA含量测定及DNA染色: 参照曹世龙[2]所介绍的方法进行， 全部样品采用临床型流式细胞仪(FACSCalibur，美国BD公司产品)测定。以波长488 nm，输出功率15 mW的氩离子激光作发射光源。每次测定前对仪器进行调整校对，使变异系数在6%以内，以保证每次实验条件相对一致。 (1)DNA倍体计算：DNA倍体指数(DI)=样品细胞G0 、G1 峰道数均值/正常二倍体细胞G0 、G1 峰道数均值。 本研究以正常人淋巴细胞作为二倍体标准，采用外标源法计算DNA倍体水平，DI=1.00，即为DNA二倍体，DI为0.88～1.12系二倍体范围(DI±2CV)。 (2)细胞周期分析：根据测得的DNA组方图和数据表，计算出每例标本的G0 与G1 期、G2 与M期和S期细胞数，及各自在细胞周期中所占百分比。 (3)细胞增殖指数(PI)： PI＝[(S+G2、M)/(S+G2、M+G0、G1 )]×100%
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三、统计学方法
采用F检验、t检验，以统计处理软件系统进行统计学处理。
结果
一、各组DI及倍体水平
滋养层细胞及蜕膜细胞DI范围均值，米非司酮组绒毛为0.93～1.04，蜕膜为0.81～1.01；对照组绒毛0.95～1.11，蜕膜0.83～1.03，均为二倍体范围。说明正常早孕妇女滋养层细胞及蜕膜细胞均为二倍体，用药后DNA倍体水平无变化。
二、不同周期细胞在细胞周期中的分布
滋养层细胞周期分布与对照组相比，在服用米非司酮后绒毛滋养层细胞G0 、G1 期百分比明显增加(P<0.01)，G2 、M期明显降低(P<0.01)，S期也有降低趋势(P>0.05)。PI在用药后也明显降低(P<0.01)。在服用米非司酮后，蜕膜细胞除G2 、M期细胞上升(P<0.05)外，其余各期基本无变化。蜕膜PI用药后无变化。对照组的绒毛滋养层细胞PI较蜕膜细胞明显为高(P<0.001)。见表1。
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表1 两组患者滋养层及蜕膜细胞的细胞周期分布(%，
±s) 组别
总例数
绒毛
蜕膜
G0、G1
S
G2、M
PI
G0、G1
S
, 百拇医药
G2、M
PI
米非司酮组
24
80.56±6.18
11.35±3.32
8.08±3.38
19.44±6.18
94.44±3.50
3.42±2.27
3.13±1.63
6.56±3.50
, 百拇医药
对照组
23
74.43±8.69
14.23±6.44
11.33±3.60
25.56±8.69
94.63±3.58
3.12±3.30
2.25±0.88
5.37±3.58
P值
<0.01
, 百拇医药
>0.05
<0.01
<0.01
>0.05
>0.05
<0.05
>0.05
讨论
一、米非司酮对早孕绒毛及蜕膜细胞周期动力学的影响
本研究发现，早孕妇女顿服米非司酮150 mg 48小时后，绒毛细胞周期动力学发生明显变化，表现为G0 、G1 期细胞的显著增加及G2 、M期细胞的显著下降，S期细胞亦有下降的趋势，反映绒毛滋养层细胞增殖状态的PI也显著下降。提示，米非司酮能明显抑制滋养层细胞的增殖，它的作用可能是阻断G0 、G1 期细胞向S期的转化，引起G0 、G1 期细胞的积聚，阻断细胞周期的正常运转，引起绒毛滋养层细胞退化变性，达到抗早孕的目的。而米非司酮究竟作用于G0 期或是G1 期，杨业洲等[3] 认为可能是在G1 期前。本研究结果从细胞周期动力学的角度间接支持这一论点。
, 百拇医药
早孕妇女服用米非司酮后，蜕膜细胞除G2 、M期细胞增加外，其他各期细胞及PI无明显变化。结果提示，用药后蜕膜组织G2 、M期细胞的积聚，可能是米非司酮对蜕膜细胞的有丝分裂有一定的影响，与滋养细胞相比，反映了米非司酮对不同增殖状态的人早孕组织细胞有着不同的作用位点和作用结果。但有研究显示，米非司酮对离体培养的人蜕膜细胞的影响因药物剂量和培养时间的不同而异，蜕膜细胞在接触米非司酮后，细胞胞浆减少、溶解或出现空泡、核固缩等，去除米非司酮后继续培养24～48小时，细胞形态开始恢复[4]。提示，米非司酮对蜕膜细胞影响的短暂性及可修复性。对本研究采用服药后48小时的蜕膜组织进行研究，所发现的蜕膜细胞G2 、M期增加、PI未变的结果，尚难定论是否是蜕膜细胞在体内受米非司酮作用后的一种修复表现。
二、米非司酮对人早孕组织细胞周期动力学的影响及意义
米非司酮临床抗早孕，是作用于绒毛还是蜕膜组织，或两者兼而有之，观点不一。Shi等[5]从妊娠蜕膜和绒毛组织孕酮受体含量及米非司酮作用后的变化推测，米非司酮不能直接作用于绒毛组织。刘伯宁等[4]发现，米非司酮流产失败而行吸宫者，绒毛退变明显重于蜕膜。提示，米非司酮能直接作用于妊娠绒毛，且这种作用大于对蜕膜的影响。本研究结果与此相一致，米非司酮明显抑制人早孕绒毛的细胞增殖，而对蜕膜的影响却是轻微的，这也与一些临床研究报道相一致[6，7]。提示，蜕膜组织排出缓慢可能是米非司酮终止早孕后阴道流血时间长的主要原因，并且米非司酮对绒毛的影响大于对蜕膜的影响。因而我们可以认为，米非司酮对蜕膜作用的不彻底性，导致蜕膜较易残留，从而导致米非司酮药流后出血延长。提示，在米非司酮配伍抗早孕的临床研究方面，进一步加强配伍药物对蜕膜的作用，可能在临床上有着广阔的应用前景。
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参考文献
1 Tanaka K. Assessment of methods for the cytogenetic analysis of human solid tumors. J Nath Cancer Inst，1987，79：1287-1289.
2 曹世龙.四年中裸鼠人体鼻咽癌生物学特性的稳定性：流式细胞分析技术.中国放射肿瘤学，1988，2 (2)：34-36.
3 杨业洲，曹泽毅，韩字研，等. 米非司酮对人早孕绒毛细胞增殖和凋亡的影响. 中华妇产科杂志，1998, 33: 268-270.
4 刘伯宁，孙剑英，陶雯琪，等. 米非司酮终止早孕流产物的病理观察. 中华妇产科杂志，1995, 30: 7-9.
5 Shi WL, Wang JD, Fu Y, et al. Estrogen and progesterone receptor in human decidua after RU486 treatment. Fertril Steril, 1993, 60: 68-73.
6 杨伟，贺奇刚，赵永荃. 丙酸睾丸酮加强米非司酮终止50～68天早孕的研究. 中国计划生育学杂志, 1997, 5: 210-211.
7 邱晓燕，酆豫增，李大金，等. 米非司酮抗早孕后出血量与宫腔组织学观察. 生殖与避孕，1997，17: 81-85.
(收稿：1998-09-08 修回：1999-03-01)
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单位：518029 深圳市红十字会医院妇产科
关键词：米非司酮；细胞周期；绒毛膜绒毛；蜕膜
中华妇产科杂志990506 【摘要】 目的 探讨米非司酮对早孕绒毛及蜕膜细胞周期动力学的影响。方法 应用流式细胞技术对23例正常早孕和24例口服米非司酮后吸宫流产物的绒毛及蜕膜组织，进行细胞周期动力学分析。 结果 服用米非司酮后，绒毛滋养层细胞G0 、G1 期细胞明显增加(P<0.01)，G2 、M期明显降低(P<0.01)，细胞增殖指数明显降低(P<0.01)；蜕膜细胞除G2 、M期细胞上升(P<0.05)外，其余各期无变化。结论 米非司酮可阻断滋养层G0 、G1 期细胞向S期的转化，从而抑制细胞增殖，且其对绒毛的作用大于对蜕膜的作用。
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Effect of Mifepristone on Cell-cycle Kinetics of Human Placental
Chorio-trophoblastic and Decidual Cell
ZHOU Xiaping, WU Shijuan, ZHANG Li
Shenzhen Red Cross Hospital, Shenzhen 518029
【Abstract】 Objective To study the effects of mifepristone on cell-cycle kinetics of human placental chorio-trophoblastic and decidual cells. Methods Flow-cytometry was introduced in the study of the mechanism of early pregnancy terminating drug, mifepristone.Twenty-three samples were obtained from normal pregnant women by surgical aspiration. Another 24 samples were obtained in women pretreated with 150 mg mifepristone 48 hours before operation. Results The percentage of the cytotrophoblastic cells in G0 +G1 phases was much higher in the treatment group (P<0.01), whereas it was much lower (P<0.01) in G2 +M phases, and the proliferating index of cells was signifreantly decreased. Apart from the increasing of decidual cells in G2 +M phases(P<0.05), there was no change in other phases. Conclusions Mifepristone may block the transformation of the cytotrophoblastic cells from G0, G1 phases to S phase,thus leading to the block of the proliferation of cells. Mifepristone has much more significant effects on the chorionic villi than on the decidua.
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【Key words】 Mifepristone Cellcycle Chorionic villi Decidua
本研究对早孕妇女服用米非司酮药物流产的流产物进行细胞周期动力学方面的探讨，试图进一步了解该药在体内对绒毛和蜕膜的影响，以及在细胞学方面的作用机理。
资料与方法
一、研究对象
为1997年12月至1998年5月在深圳市红十字会医院妇产科就诊，要求终止妊娠、自愿接受试验的47例早孕妇女。无急、慢性器质性病变，3个月内未用过甾体激素类药物且月经周期正常，未放置宫内节育器，停经44～49天，停经后也未用过任何其他药物，经妇科检查、尿妊娠试验及B超检查确诊为早孕者。
按服药与否分成两组：(1)米非司酮组24例，停经(46±1)天，口服米非司酮(上海华联制药有限公司产品) 150 mg(顿服)，服药前后均禁食2小时，服药48小时后行负压吸引流产；(2)对照组23例，停经(46±1)天，直接行负压吸引流产。
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二、方法
1.早孕流产绒毛及蜕膜的处理：将负压吸引流产所得妊娠物分别迅速存放于4℃生理盐水中，立即带回实验室，用4℃生理盐水洗3次，洗去血块，在显微镜下仔细分离绒毛及蜕膜组织，并剔除其他结缔组织等。将绒毛及蜕膜组织分别按Tanaka[1]所介绍的机械法制成细胞悬液。最后将细胞悬液以2 000 r/min离心15分钟，弃上清液，沉淀物充分混匀，并渐次加入无水乙醇2ml，放入4℃冰箱贮存待测。
2.DNA含量测定及DNA染色: 参照曹世龙[2]所介绍的方法进行， 全部样品采用临床型流式细胞仪(FACSCalibur，美国BD公司产品)测定。以波长488 nm，输出功率15 mW的氩离子激光作发射光源。每次测定前对仪器进行调整校对，使变异系数在6%以内，以保证每次实验条件相对一致。 (1)DNA倍体计算：DNA倍体指数(DI)=样品细胞G0 、G1 峰道数均值/正常二倍体细胞G0 、G1 峰道数均值。 本研究以正常人淋巴细胞作为二倍体标准，采用外标源法计算DNA倍体水平，DI=1.00，即为DNA二倍体，DI为0.88～1.12系二倍体范围(DI±2CV)。 (2)细胞周期分析：根据测得的DNA组方图和数据表，计算出每例标本的G0 与G1 期、G2 与M期和S期细胞数，及各自在细胞周期中所占百分比。 (3)细胞增殖指数(PI)： PI＝[(S+G2、M)/(S+G2、M+G0、G1 )]×100%
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三、统计学方法
采用F检验、t检验，以统计处理软件系统进行统计学处理。
结果
一、各组DI及倍体水平
滋养层细胞及蜕膜细胞DI范围均值，米非司酮组绒毛为0.93～1.04，蜕膜为0.81～1.01；对照组绒毛0.95～1.11，蜕膜0.83～1.03，均为二倍体范围。说明正常早孕妇女滋养层细胞及蜕膜细胞均为二倍体，用药后DNA倍体水平无变化。
二、不同周期细胞在细胞周期中的分布
滋养层细胞周期分布与对照组相比，在服用米非司酮后绒毛滋养层细胞G0 、G1 期百分比明显增加(P<0.01)，G2 、M期明显降低(P<0.01)，S期也有降低趋势(P>0.05)。PI在用药后也明显降低(P<0.01)。在服用米非司酮后，蜕膜细胞除G2 、M期细胞上升(P<0.05)外，其余各期基本无变化。蜕膜PI用药后无变化。对照组的绒毛滋养层细胞PI较蜕膜细胞明显为高(P<0.001)。见表1。
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表1 两组患者滋养层及蜕膜细胞的细胞周期分布(%，
±s) 组别总例数
绒毛
蜕膜
G0、G1
S
G2、M
PI
G0、G1
S
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G2、M
PI
米非司酮组
24
80.56±6.18
11.35±3.32
8.08±3.38
19.44±6.18
94.44±3.50
3.42±2.27
3.13±1.63
6.56±3.50
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对照组
23
74.43±8.69
14.23±6.44
11.33±3.60
25.56±8.69
94.63±3.58
3.12±3.30
2.25±0.88
5.37±3.58
P值
<0.01
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>0.05
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>0.05
>0.05
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>0.05
讨论
一、米非司酮对早孕绒毛及蜕膜细胞周期动力学的影响
本研究发现，早孕妇女顿服米非司酮150 mg 48小时后，绒毛细胞周期动力学发生明显变化，表现为G0 、G1 期细胞的显著增加及G2 、M期细胞的显著下降，S期细胞亦有下降的趋势，反映绒毛滋养层细胞增殖状态的PI也显著下降。提示，米非司酮能明显抑制滋养层细胞的增殖，它的作用可能是阻断G0 、G1 期细胞向S期的转化，引起G0 、G1 期细胞的积聚，阻断细胞周期的正常运转，引起绒毛滋养层细胞退化变性，达到抗早孕的目的。而米非司酮究竟作用于G0 期或是G1 期，杨业洲等[3] 认为可能是在G1 期前。本研究结果从细胞周期动力学的角度间接支持这一论点。
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早孕妇女服用米非司酮后，蜕膜细胞除G2 、M期细胞增加外，其他各期细胞及PI无明显变化。结果提示，用药后蜕膜组织G2 、M期细胞的积聚，可能是米非司酮对蜕膜细胞的有丝分裂有一定的影响，与滋养细胞相比，反映了米非司酮对不同增殖状态的人早孕组织细胞有着不同的作用位点和作用结果。但有研究显示，米非司酮对离体培养的人蜕膜细胞的影响因药物剂量和培养时间的不同而异，蜕膜细胞在接触米非司酮后，细胞胞浆减少、溶解或出现空泡、核固缩等，去除米非司酮后继续培养24～48小时，细胞形态开始恢复[4]。提示，米非司酮对蜕膜细胞影响的短暂性及可修复性。对本研究采用服药后48小时的蜕膜组织进行研究，所发现的蜕膜细胞G2 、M期增加、PI未变的结果，尚难定论是否是蜕膜细胞在体内受米非司酮作用后的一种修复表现。
二、米非司酮对人早孕组织细胞周期动力学的影响及意义
米非司酮临床抗早孕，是作用于绒毛还是蜕膜组织，或两者兼而有之，观点不一。Shi等[5]从妊娠蜕膜和绒毛组织孕酮受体含量及米非司酮作用后的变化推测，米非司酮不能直接作用于绒毛组织。刘伯宁等[4]发现，米非司酮流产失败而行吸宫者，绒毛退变明显重于蜕膜。提示，米非司酮能直接作用于妊娠绒毛，且这种作用大于对蜕膜的影响。本研究结果与此相一致，米非司酮明显抑制人早孕绒毛的细胞增殖，而对蜕膜的影响却是轻微的，这也与一些临床研究报道相一致[6，7]。提示，蜕膜组织排出缓慢可能是米非司酮终止早孕后阴道流血时间长的主要原因，并且米非司酮对绒毛的影响大于对蜕膜的影响。因而我们可以认为，米非司酮对蜕膜作用的不彻底性，导致蜕膜较易残留，从而导致米非司酮药流后出血延长。提示，在米非司酮配伍抗早孕的临床研究方面，进一步加强配伍药物对蜕膜的作用，可能在临床上有着广阔的应用前景。
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参考文献
1 Tanaka K. Assessment of methods for the cytogenetic analysis of human solid tumors. J Nath Cancer Inst，1987，79：1287-1289.
2 曹世龙.四年中裸鼠人体鼻咽癌生物学特性的稳定性：流式细胞分析技术.中国放射肿瘤学，1988，2 (2)：34-36.
3 杨业洲，曹泽毅，韩字研，等. 米非司酮对人早孕绒毛细胞增殖和凋亡的影响. 中华妇产科杂志，1998, 33: 268-270.
4 刘伯宁，孙剑英，陶雯琪，等. 米非司酮终止早孕流产物的病理观察. 中华妇产科杂志，1995, 30: 7-9.
5 Shi WL, Wang JD, Fu Y, et al. Estrogen and progesterone receptor in human decidua after RU486 treatment. Fertril Steril, 1993, 60: 68-73.
6 杨伟，贺奇刚，赵永荃. 丙酸睾丸酮加强米非司酮终止50～68天早孕的研究. 中国计划生育学杂志, 1997, 5: 210-211.
7 邱晓燕，酆豫增，李大金，等. 米非司酮抗早孕后出血量与宫腔组织学观察. 生殖与避孕，1997，17: 81-85.
(收稿：1998-09-08 修回：1999-03-01)
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