酵母重组基因工程乙型肝炎疫苗与血源疫苗对新生儿的保护作用比较
作者：刘颖琳 刘新质 邝健全
单位：中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科 510120 广州
关键词：酵母菌；重组；遗传；肝炎疫苗；乙型；婴儿；新生；接种
中华妇产科杂志990807 【摘要】 目的 评价酵母重组基因工程乙型肝炎(乙肝)疫苗对乙肝表面抗原(HBsAg)及e抗原阳性(双阳)母亲分娩的新生儿的保护效果及副反用，并与血源乙肝疫苗比较。方法 将117例双阳母亲分娩的新生儿，分为试验组76例，注射酵母重组基因工程乙肝疫苗5μg，对照组41例，注射血源乙肝疫苗30U。均于出生后24小时、1个月、6个月注射，每次注射前及出生9个月时抽取静脉血，检查乙肝病毒脱氧核糖核酸片段(HBV-DNA)(PCR及斑点杂交法)、HBsAg(ELISA)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb) (RIA)、肝功能等，并观察副反应。结果 (1)试验组出生6、9个月后，HBV持续感染率分别为7.89%、5.26%，均低于对照组(14.63%、17.07%)，但差异无显著性；(2)试验组疫苗保护率(VE)为93.82%，对照组为79.92%；(3)出生9个月时试验组HBsAb阳性率为94.74%，对照组为80.49%，两组比较差异有显著性(P<0.05)；(4)两组副反应发生率比较，差异无显著性。结论 酵母重组基因工程乙肝疫苗对乙肝双阳母亲分娩的新生儿的保护作用优于血源乙肝疫苗。
, 百拇医药
Comparing Immunogenicity and Efficacy of Two Hepatitis B Vaccines in Newborn Infants of Hepatitis B Surface Antigen (+)/Hepatitis B e Antigen (+) Carrier Mothers
LIU Yinglin, LIU Xinzhi, KUANG Jianquan.
SUN Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou, 510120
【Abstract】 Objective To evaluate the effect of yeast recombinant HBV vaccine on protecting the newborns from HBV carrier mothers and to compare with plasma-derived vaccine. Methods There were 117 neonates from HBsAg(+)/HBeAg(+) carrier mothers involved in the study. Study group [76 of them received RECOMBIVAX HB( 5mcg/0.5ml)] and control group (41 neonates receive plasma derived vaccine) had blood samples collected and received vaccine at 0, 1, 6, 9 month after birth respectively. HBV-DNA, HBsAg/HBeAg, HBsAb were determined by PCR, ELISA, RIA independently. Results (1) Children chronic HBV infection rates at 6, 9 month of age in study group were 7.89%, 5.26% respectively, which were lower than that of control group(14.63%, 17.07%). (2) The vaccine efficacy (VE) in study group was 93.82%, vs, that of control group was 79.92%. (3) The HBsAb positive rate in study group at 9 month of age was 94.74% which was significantly higher than that of control group(80.49%)(P<0.05). (4) The difference of side-effect rates between the two groups was not significant. Conclusion Immunogenicity and efficacy of yeast-recombinant hepatitis B vaccine is better than that of plasma derived vaccine in newborn infants of HBsAg(+)/HBeAg(+) carrier mothers.
, 百拇医药
【Key words】 Yeasts Recombineation, genetic Hepatitis B vaccines Infant, newborn Vaccination
我国是乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)感染的高发区，病毒携带率高达10%[1]。围产期传播是重要的传播途径，乙肝表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg)阳性(双阳)母亲是高危人群，其围产期传播率平均可达85%[1]，目前疫苗的接种是阻断HBV传播的主要手段[2]。我们通过对乙肝双阳母亲分娩的新生儿，注射酵母重组基因工程乙肝疫苗(商品名RECOMBIVAX HB
)，观察持续感染率及保护性抗体的阳性率，并与血源疫苗比较，评价该疫苗对新生儿的保护作用及副作用。
资料与方法
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一、资料来源
1993年6月～1996年2月我院产科门诊进行产前检查并足月分娩的孕妇共3 746例，于孕32周左右常规检测HBsAg及抗体、HBeAg及抗体、核心抗原HBcAg及抗体(乙肝三对)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)，发现HBsAg阳性者369例，其中乙肝双阳者144例，阳性率为3.84%。
上述乙肝双阳孕妇所分娩的新生儿符合下列条件者成为受试者：孕龄≥37周；出生体重≥2 500g；出生后1分钟Apgar评分≥7分；出生时全身体检未发现异常。符合条件的新生儿126例进入研究，剔除失访的9例，资料完整者共117例，其中试验组76例，对照组41例。
两组孕妇平均年龄分别为(28.0±3.5)岁和(26.9±3.3)岁；平均孕周分别为(39.6±1.3)周和(39.5±1.5)周；剖宫产与阴道产的比例分别为18∶58和13∶28；新生儿出生体重分别为(3 190±431)g和(3 148±421)g。
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二、方法
1.疫苗注射：受试者分别于出生后24小时内、1个月、6个月各注射疫苗1次。试验组注射酵母重组基因工程乙肝疫苗(5μg)，于左大腿前外侧处肌内注射，疫苗为美国MSD药厂的产品，批号Cy-235/0948w；对照组注射血源乙肝疫苗(30U)，于右上臂三角肌处皮下注射，疫苗由北京生物制品厂生产,批号940101/940604。
2.检测项目：新生儿出生后每次注射疫苗前及出生9个月时,分别抽取外周静脉血，提取血清样本后置于-50℃冰箱储存待检，分别检测乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、AST、ALT，出生后6个月、9个月时分别检测HBV-DNA、HBsAg、HBeAg。
3.检测方法：HBV-DNA测定用斑点杂交及聚合酶链反应(PCR法)，药盒分别由上海医科大学源力试剂公司及中山医科大学附属第三医院传染科提供；HBsAg、HBeAg测定用酶联免疫吸附试验(ELISA法)，药盒由深圳月亮湾工程有限公司提供；HBsAb测定用放射免疫测定法(RIA)，药盒由中国潍坊3V诊断技术公司提供；AST、ALT用速率法(IFCC)检测，药盒由台湾Unison公司和意大利Sclavo公司提供。
, 百拇医药
每次注射疫苗后均记录受试者5天内体温、局部及全身不良反应。第1次注射在医院住院，由医护人员记录，第2、3次注射后由受试者家人记录，定期回收记录表。
三、数据处理
统计方法包括t检验及χ2检验，由Window 95的Microsoft Excel软件处理。疫苗的保护率(VE)按以下公式计算：VE=(ARU-ARV)/ARU×100%。ARU指未接种疫苗人群的发病率，ARV指已接种疫苗人群的发病率[3]。
结果
一、两组婴儿HBV持续感染率及VE比较
以血清HBV-DNA和(或)HBsAg阳性作为诊断HBV感染的指标，试验组婴儿出生6个月及9个月HBV持续感染率分别为7.89%(6/76)和5.26%(4/76)，均低于对照组的14.63%(6/41)和17.07%(7/41)，但差异无显著性(P>0.05)。试验组疫苗保护率为93.82%，对照组为79.92%。见表1。
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表1 两组婴儿出生后不同时期HBV持续感染率比较 组别
总例数
6个月
9个月
VE
(%)
例数
百分比(%)
例数
百分比(%)
试验组
76
6
, http://www.100md.com
7.89
4
5.26
93.82
对照组
41
6
14.63
7
17.07
79.92
P值
>0.05
, http://www.100md.com
>0.05
二、两组婴儿 HBsAb阳转率比较
出生1个月(注射第2次疫苗前)及出生6个月(注射第3次疫苗前)时，试验组保护性抗体的阳转率分别为11.84%(9/76)和85.53%(65/76)，均高于对照组的2.44%(1/41)和78.04%(32/41)，但差异无显著性(P>0.05)。出生9个月(注射第3次疫苗后3个月)时，试验组的抗体阳转率为94.74%(72/76)，显著高于对照组的80.49%(33/41)，差异有显著性(P<0.05)，见表2。对照组中有2例虽然在出生9个月时检测到HBsAb阳性，但同时发现HBV-DNA和(或)HBsAg阳性，说明抗体无保护性作用，予以删除。
表2 两组婴儿出生后不同时期抗体阳转率比较 组别
总例数
, 百拇医药
1个月
6个月
9个月
例数
百分比
(%)
例数
百分比
(%)
例数
百分比
(%)
试验组
, http://www.100md.com 76
9
11.84
65
85.53
72
94.74
对照组
41
1
2.44
32
78.04
, 百拇医药 33
80.49
P值
>0.05
>0.05
<0.05
三、不良反应比较
不良反应记录表共发放351张，回收229张，回收率65.24%，其中第1次注射后的记录表回收率为100%。试验组不良反应发生率为8.06%，包括注射局部的硬块、发红，体温升高(>37.50℃)，全身发疹等，以局部反应为主，占5.38%，与对照组比较，差异无显著性。两组婴儿AST、ALT比较，差异也无显著性(P>0.05)。
讨论
, 百拇医药
一、围产期阻断HBV传播的重要性
本研究中，HBsAg阳性率为9.85%，而HBsAg、HBeAg双阳者占总人数的3.84%。在HBV母婴传播中，母亲HBeAg阳性是重要因素之一，若不给予任何预防措施，她们所分娩的新生儿有85%可获得HBV围产期传播[3]，因此阻断HBeAg阳性母亲围产期传播是非常重要的。
二、两种乙肝疫苗对双阳母亲所分娩新生儿的保护作用
以往我们应用血源乙肝疫苗阻断HBV围产期传播，取得较好的保护效果，对双阳母亲单用大剂量疫苗阻断HBV母婴传播，保护率可达85%左右。但血源乙肝疫苗来源于病人血清，不能完全排除其他病毒或病原体的污染，且制造成本昂贵，因而受到一定的限制。
酵母重组基因工程乙肝疫苗，制造工艺先进，材料来源不受限制，制造成本相对低廉，不存在污染问题，克服了血源乙肝疫苗的弊病。本研究所见，应用该疫苗的试验组婴儿6个月、9个月HBV持续感染率均低于对照组，虽无显著性差异，但试验组呈下降趋势，而对照组呈上升趋势。试验组VE为93.82%，高于对照组。试验组婴儿出生后9个月时，HBsAb的阳转率为94.74%，高于对照组，差异有显著性。以上资料均说明，酵母重组基因工程乙肝疫苗对双阳母亲分娩的新生儿，其保护效果优于血源乙肝疫苗。
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三、两种疫苗的副反用比较
本研究所观察到的副反用主要为注射局部的发红、硬块等，少数有体温升高、全身皮疹等，比较两组副反应及AST、ALT变化，差异均无显著性，说明该疫苗是安全、可靠的，但仍有赖于将来积累大量的临床资料以观察分析。
四、其他
对照组中发现2例婴儿在出现HBsAb阳转的同时出现HBV持续感染，而试验组中则未见类似现象，其原因可能是血源乙肝疫苗所诱导的抗体较单纯，对于一些少见的HBV亚型感染未能起到阻断的作用。有关机理有待进一步的研究。
参考文献
1 高寿征主编. 病毒性肝炎防治研究.第1版.北京：北京出版社，1993.23-37.
2 高寿征主编. 病毒性肝炎防治研究.第1版. 北京：北京出版社，1993.38-46.
3 耿贯一主编. 流行病学. 第2版.北京：人民卫生出版社，1995.435-455.
(收稿：1998-12-08 修回：1999-06-07), 百拇医药
单位：中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科 510120 广州
关键词：酵母菌；重组；遗传；肝炎疫苗；乙型；婴儿；新生；接种
中华妇产科杂志990807 【摘要】 目的 评价酵母重组基因工程乙型肝炎(乙肝)疫苗对乙肝表面抗原(HBsAg)及e抗原阳性(双阳)母亲分娩的新生儿的保护效果及副反用，并与血源乙肝疫苗比较。方法 将117例双阳母亲分娩的新生儿，分为试验组76例，注射酵母重组基因工程乙肝疫苗5μg，对照组41例，注射血源乙肝疫苗30U。均于出生后24小时、1个月、6个月注射，每次注射前及出生9个月时抽取静脉血，检查乙肝病毒脱氧核糖核酸片段(HBV-DNA)(PCR及斑点杂交法)、HBsAg(ELISA)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb) (RIA)、肝功能等，并观察副反应。结果 (1)试验组出生6、9个月后，HBV持续感染率分别为7.89%、5.26%，均低于对照组(14.63%、17.07%)，但差异无显著性；(2)试验组疫苗保护率(VE)为93.82%，对照组为79.92%；(3)出生9个月时试验组HBsAb阳性率为94.74%，对照组为80.49%，两组比较差异有显著性(P<0.05)；(4)两组副反应发生率比较，差异无显著性。结论 酵母重组基因工程乙肝疫苗对乙肝双阳母亲分娩的新生儿的保护作用优于血源乙肝疫苗。
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Comparing Immunogenicity and Efficacy of Two Hepatitis B Vaccines in Newborn Infants of Hepatitis B Surface Antigen (+)/Hepatitis B e Antigen (+) Carrier Mothers
LIU Yinglin, LIU Xinzhi, KUANG Jianquan.
SUN Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou, 510120
【Abstract】 Objective To evaluate the effect of yeast recombinant HBV vaccine on protecting the newborns from HBV carrier mothers and to compare with plasma-derived vaccine. Methods There were 117 neonates from HBsAg(+)/HBeAg(+) carrier mothers involved in the study. Study group [76 of them received RECOMBIVAX HB( 5mcg/0.5ml)] and control group (41 neonates receive plasma derived vaccine) had blood samples collected and received vaccine at 0, 1, 6, 9 month after birth respectively. HBV-DNA, HBsAg/HBeAg, HBsAb were determined by PCR, ELISA, RIA independently. Results (1) Children chronic HBV infection rates at 6, 9 month of age in study group were 7.89%, 5.26% respectively, which were lower than that of control group(14.63%, 17.07%). (2) The vaccine efficacy (VE) in study group was 93.82%, vs, that of control group was 79.92%. (3) The HBsAb positive rate in study group at 9 month of age was 94.74% which was significantly higher than that of control group(80.49%)(P<0.05). (4) The difference of side-effect rates between the two groups was not significant. Conclusion Immunogenicity and efficacy of yeast-recombinant hepatitis B vaccine is better than that of plasma derived vaccine in newborn infants of HBsAg(+)/HBeAg(+) carrier mothers.
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【Key words】 Yeasts Recombineation, genetic Hepatitis B vaccines Infant, newborn Vaccination
我国是乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)感染的高发区，病毒携带率高达10%[1]。围产期传播是重要的传播途径，乙肝表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg)阳性(双阳)母亲是高危人群，其围产期传播率平均可达85%[1]，目前疫苗的接种是阻断HBV传播的主要手段[2]。我们通过对乙肝双阳母亲分娩的新生儿，注射酵母重组基因工程乙肝疫苗(商品名RECOMBIVAX HB
)，观察持续感染率及保护性抗体的阳性率，并与血源疫苗比较，评价该疫苗对新生儿的保护作用及副作用。资料与方法
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一、资料来源
1993年6月～1996年2月我院产科门诊进行产前检查并足月分娩的孕妇共3 746例，于孕32周左右常规检测HBsAg及抗体、HBeAg及抗体、核心抗原HBcAg及抗体(乙肝三对)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)，发现HBsAg阳性者369例，其中乙肝双阳者144例，阳性率为3.84%。
上述乙肝双阳孕妇所分娩的新生儿符合下列条件者成为受试者：孕龄≥37周；出生体重≥2 500g；出生后1分钟Apgar评分≥7分；出生时全身体检未发现异常。符合条件的新生儿126例进入研究，剔除失访的9例，资料完整者共117例，其中试验组76例，对照组41例。
两组孕妇平均年龄分别为(28.0±3.5)岁和(26.9±3.3)岁；平均孕周分别为(39.6±1.3)周和(39.5±1.5)周；剖宫产与阴道产的比例分别为18∶58和13∶28；新生儿出生体重分别为(3 190±431)g和(3 148±421)g。
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二、方法
1.疫苗注射：受试者分别于出生后24小时内、1个月、6个月各注射疫苗1次。试验组注射酵母重组基因工程乙肝疫苗(5μg)，于左大腿前外侧处肌内注射，疫苗为美国MSD药厂的产品，批号Cy-235/0948w；对照组注射血源乙肝疫苗(30U)，于右上臂三角肌处皮下注射，疫苗由北京生物制品厂生产,批号940101/940604。
2.检测项目：新生儿出生后每次注射疫苗前及出生9个月时,分别抽取外周静脉血，提取血清样本后置于-50℃冰箱储存待检，分别检测乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、AST、ALT，出生后6个月、9个月时分别检测HBV-DNA、HBsAg、HBeAg。
3.检测方法：HBV-DNA测定用斑点杂交及聚合酶链反应(PCR法)，药盒分别由上海医科大学源力试剂公司及中山医科大学附属第三医院传染科提供；HBsAg、HBeAg测定用酶联免疫吸附试验(ELISA法)，药盒由深圳月亮湾工程有限公司提供；HBsAb测定用放射免疫测定法(RIA)，药盒由中国潍坊3V诊断技术公司提供；AST、ALT用速率法(IFCC)检测，药盒由台湾Unison公司和意大利Sclavo公司提供。
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每次注射疫苗后均记录受试者5天内体温、局部及全身不良反应。第1次注射在医院住院，由医护人员记录，第2、3次注射后由受试者家人记录，定期回收记录表。
三、数据处理
统计方法包括t检验及χ2检验，由Window 95的Microsoft Excel软件处理。疫苗的保护率(VE)按以下公式计算：VE=(ARU-ARV)/ARU×100%。ARU指未接种疫苗人群的发病率，ARV指已接种疫苗人群的发病率[3]。
结果
一、两组婴儿HBV持续感染率及VE比较
以血清HBV-DNA和(或)HBsAg阳性作为诊断HBV感染的指标，试验组婴儿出生6个月及9个月HBV持续感染率分别为7.89%(6/76)和5.26%(4/76)，均低于对照组的14.63%(6/41)和17.07%(7/41)，但差异无显著性(P>0.05)。试验组疫苗保护率为93.82%，对照组为79.92%。见表1。
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表1 两组婴儿出生后不同时期HBV持续感染率比较 组别
总例数
6个月
9个月
VE
(%)
例数
百分比(%)
例数
百分比(%)
试验组
76
6
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7.89
4
5.26
93.82
对照组
41
6
14.63
7
17.07
79.92
P值
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二、两组婴儿 HBsAb阳转率比较
出生1个月(注射第2次疫苗前)及出生6个月(注射第3次疫苗前)时，试验组保护性抗体的阳转率分别为11.84%(9/76)和85.53%(65/76)，均高于对照组的2.44%(1/41)和78.04%(32/41)，但差异无显著性(P>0.05)。出生9个月(注射第3次疫苗后3个月)时，试验组的抗体阳转率为94.74%(72/76)，显著高于对照组的80.49%(33/41)，差异有显著性(P<0.05)，见表2。对照组中有2例虽然在出生9个月时检测到HBsAb阳性，但同时发现HBV-DNA和(或)HBsAg阳性，说明抗体无保护性作用，予以删除。
表2 两组婴儿出生后不同时期抗体阳转率比较 组别
总例数
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1个月
6个月
9个月
例数
百分比
(%)
例数
百分比
(%)
例数
百分比
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试验组
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9
11.84
65
85.53
72
94.74
对照组
41
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2.44
32
78.04
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80.49
P值
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三、不良反应比较
不良反应记录表共发放351张，回收229张，回收率65.24%，其中第1次注射后的记录表回收率为100%。试验组不良反应发生率为8.06%，包括注射局部的硬块、发红，体温升高(>37.50℃)，全身发疹等，以局部反应为主，占5.38%，与对照组比较，差异无显著性。两组婴儿AST、ALT比较，差异也无显著性(P>0.05)。
讨论
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一、围产期阻断HBV传播的重要性
本研究中，HBsAg阳性率为9.85%，而HBsAg、HBeAg双阳者占总人数的3.84%。在HBV母婴传播中，母亲HBeAg阳性是重要因素之一，若不给予任何预防措施，她们所分娩的新生儿有85%可获得HBV围产期传播[3]，因此阻断HBeAg阳性母亲围产期传播是非常重要的。
二、两种乙肝疫苗对双阳母亲所分娩新生儿的保护作用
以往我们应用血源乙肝疫苗阻断HBV围产期传播，取得较好的保护效果，对双阳母亲单用大剂量疫苗阻断HBV母婴传播，保护率可达85%左右。但血源乙肝疫苗来源于病人血清，不能完全排除其他病毒或病原体的污染，且制造成本昂贵，因而受到一定的限制。
酵母重组基因工程乙肝疫苗，制造工艺先进，材料来源不受限制，制造成本相对低廉，不存在污染问题，克服了血源乙肝疫苗的弊病。本研究所见，应用该疫苗的试验组婴儿6个月、9个月HBV持续感染率均低于对照组，虽无显著性差异，但试验组呈下降趋势，而对照组呈上升趋势。试验组VE为93.82%，高于对照组。试验组婴儿出生后9个月时，HBsAb的阳转率为94.74%，高于对照组，差异有显著性。以上资料均说明，酵母重组基因工程乙肝疫苗对双阳母亲分娩的新生儿，其保护效果优于血源乙肝疫苗。
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三、两种疫苗的副反用比较
本研究所观察到的副反用主要为注射局部的发红、硬块等，少数有体温升高、全身皮疹等，比较两组副反应及AST、ALT变化，差异均无显著性，说明该疫苗是安全、可靠的，但仍有赖于将来积累大量的临床资料以观察分析。
四、其他
对照组中发现2例婴儿在出现HBsAb阳转的同时出现HBV持续感染，而试验组中则未见类似现象，其原因可能是血源乙肝疫苗所诱导的抗体较单纯，对于一些少见的HBV亚型感染未能起到阻断的作用。有关机理有待进一步的研究。
参考文献
1 高寿征主编. 病毒性肝炎防治研究.第1版.北京：北京出版社，1993.23-37.
2 高寿征主编. 病毒性肝炎防治研究.第1版. 北京：北京出版社，1993.38-46.
3 耿贯一主编. 流行病学. 第2版.北京：人民卫生出版社，1995.435-455.
(收稿：1998-12-08 修回：1999-06-07), 百拇医药