慢性子宫颈炎患者子宫颈人乳头状瘤病毒、单纯疱疹病毒和沙眼衣原体的检测
作者：包其郁 张丽芳 朱雪琼 王玉环
单位：包其郁，张丽芳 325003 温州医学院微生物学教研室；朱雪琼，王玉环 附属第二医院妇产科
关键词：
中华妇产科杂志/991122 人乳头状瘤病毒(HPV)、单纯疱疹病毒(HSV)和沙眼衣原体(CT)是引起性传播疾病(STD)的主要病原体，且与宫颈疾病，尤其是宫颈癌的发生相关。我们应用聚合酶链反应(PCR)技术对在妇产科门诊就诊的慢性宫颈炎患者HPV、2型HSV(HSV-2)和CT的感染情况进行了检测。
一、 资料和方法
1. 研究对象：92例为1995年11月至1996年11月间就诊于温州医学院附属第二医院妇产科的慢性宫颈炎(伴不同程度宫颈糜烂)患者(观察组)，年龄18～67岁，取其宫颈脱落细胞；并采集同期间在门诊体检，宫颈口外观正常、光滑、无炎症的育龄妇女宫颈脱落细胞标本48份为对照组。
, 百拇医药
2. 标本处理：脱落细胞标本用pH7.0、66 mmol/L磷酸盐缓冲液洗涤，离心后用蛋白酶K于55℃水浴作用3小时，再于95℃10分钟灭活蛋白酶K、收集离心后的上清液，-20℃冰箱保存备用。
3. HPV、HSV-2和CT测定：采用PCR方法。总HPV、HSV-2和CT检测试剂盒购自伊利康生物技术有限公司，各试剂用量及实验步骤按说明书进行。HPV亚型(6、11、16和18型)引物由澳大利亚Queensland 大学周健博士惠赠。试剂用量为每50 μl反应体系中，含各型引物50 μmol/L，4种脱氧三磷酸核苷各200 μmol/L，TaqDNA聚合酶1.5U，模板用量10 μl，反应步骤为92℃ 60秒变性、55℃ 120秒复性、72℃ 90秒引物延伸，共进行35个循环。每次设试剂空白管和已知阳性模板管对照，扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，在紫外光下观察结果并照相记录。
4. 统计学方法：两组病原体检出率比较，采用χ2检验。
, 百拇医药
二、 结果
1. 两组HPV、HSV-2和CT的检测结果：观察组检出HPV、HSV-2和CT分别为43例(47%)、30例(33%)和22例(24%)，对照组分别检出6例(13%)、4例(8%)和1例(2%)。两组间3种病原体的检出率差异均有极显著性(P<0.01)。观察组病原体总检出率为74%(68/92)，与对照组病原体总检出率(23%，11/48)比较，差异有极显著性(P<0.01)；观察组2种或以上病原体检出率为24%(22/92)，而对照组无多重病原体检出者；轻度、中度和重度宫颈糜烂者总病原体检出率分别为54%(15/28)、72%(21/29)和91%(32/35)(P<0.01)，随着宫颈糜烂程度的增加，多重病原体检出率也显著增高，见表1。
2. 观察组患者不同年龄者的3种病原体检测结果：各年龄段(18～25岁、26～35岁、36～45岁和46～67岁)病原体总检出率分别为96% (22/23)、74%(26/35)、64%(14/22)和50%(6/12)，其中单一病原体检出率分别为70%(16/23)、46%(16/35)、41%(9/22)和42%(5/12)，多重病原体检出率则分别为26%(6/23)、29%(10/35)、23%(5/22)和8%(1/12)。 各年龄段病原体总检出率差异有显著性(P<0.05)，以18～25岁者检出率最高。
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3. HPV亚型分布： 43例检出一个或多个HPV亚型，16型和18型检出率较高，分别为56%(24/43)和40%(17/43)，6型和11型的检出率分别为5%(2/43)和2%(1/43)；单独检出16型或18型28例(65%)，同时检出16型和18型5例(12%)、6型和18型1例(2%)，6、11和18型 1例(2%)。
三、讨论
本研究HSV-2及CT的检出率与国内的报道[1，2]接近，尚未见对该组患者上述3种病原体联合检测的报道。
HPV约有100多个亚型，6和11型主要引起生殖道尖锐湿疣 ，16和18型主要引起宫颈癌[3]。本资料中HPV16或(和)HPV18型阳性者占81%(35/43)，说明与宫颈糜烂有关的HPV以16和18型为主，有潜在癌变危险。
, 百拇医药 表1 HPV、HSV-2和CT在不同程度宫颈糜烂患者(观察组)及对照组中的检出情况 组别
总
例
数
病原体
总检出
检出单一病原体
检出两种及以上病原体
HPV
HSV-2
CT
HPV+CT
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HPV+HSV-2
CT+HSV-2
HPV+HSV-2+CT
例数
检出率
(%)
例数
检出率
(%)
例数
检出率
(%)
例数
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检出率
(%)
例数
检出率
(%)
例数
检出率
(%)
例数
检出率
(%)
观察组
92
, http://www.100md.com 68
74
26
28
14
15
6
7
6
7
6
7
5
5
, http://www.100md.com
5
5
轻度宫颈糜烂
28
15
54
7
25
3
11
2
7
1
4
, http://www.100md.com
1
4
1
4
0
0
中度宫颈糜烂
29
21
72
8
28
5
17
, http://www.100md.com
2
7
2
7
1
4
1
4
2
7
重度宫颈糜烂
35
37
91
, 百拇医药
11
31
6
17
2
6
3
9
4
11
3
9
3
9
, 百拇医药
对照组
48
11
23
6
13
4
8
1
2
0
0
0
0
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0
0
0
0
动物实验已证明，HSV-2可诱发宫颈癌的发生，有报道CT感染可引起宫颈上皮细胞的非典型增生。近年来众多研究发现，宫颈癌的发生并非单一因素所致，而与CT、HSV-2、人巨细胞病毒及HPV等多种因素有关，CT有与其他病毒的协同致癌作用[4]。本资料检出病原的68例中，同时检出2种或3种病原体的占32%(22/68)。因此，在临床上需对上述病原体的进行实验诊断及治疗，以防病情的发展与恶化。
参考文献
1 陈伟丽，金扬，顾慧巍，等. 用多聚酶链反应探讨单纯疱疹病毒感染与宫颈疾病的关系. 现代妇产科进展，1995，4：22-24.
2 刘厚君，王椿森，涂亚庭，等. 聚合酶链反应检测宫颈沙眼衣原体感染. 中华皮肤科杂志，1995，28：179-180.
3 崔满华，郑鹏生，黄冰玉，等. 尖锐湿疣及子宫颈癌组织人乳头状瘤病毒DNA的比较研究. 中华妇产科杂志，1996，31：163-165.
4 胡伟，顾美皎. 子宫颈癌及癌前病变与性传播性疾病关系的研究. 中华妇产科杂志， 1995，30：547-549.
(收稿：1998-08-10 修回：1999-08-02), 百拇医药
单位：包其郁，张丽芳 325003 温州医学院微生物学教研室；朱雪琼，王玉环 附属第二医院妇产科
关键词：
中华妇产科杂志/991122 人乳头状瘤病毒(HPV)、单纯疱疹病毒(HSV)和沙眼衣原体(CT)是引起性传播疾病(STD)的主要病原体，且与宫颈疾病，尤其是宫颈癌的发生相关。我们应用聚合酶链反应(PCR)技术对在妇产科门诊就诊的慢性宫颈炎患者HPV、2型HSV(HSV-2)和CT的感染情况进行了检测。
一、 资料和方法
1. 研究对象：92例为1995年11月至1996年11月间就诊于温州医学院附属第二医院妇产科的慢性宫颈炎(伴不同程度宫颈糜烂)患者(观察组)，年龄18～67岁，取其宫颈脱落细胞；并采集同期间在门诊体检，宫颈口外观正常、光滑、无炎症的育龄妇女宫颈脱落细胞标本48份为对照组。
, 百拇医药
2. 标本处理：脱落细胞标本用pH7.0、66 mmol/L磷酸盐缓冲液洗涤，离心后用蛋白酶K于55℃水浴作用3小时，再于95℃10分钟灭活蛋白酶K、收集离心后的上清液，-20℃冰箱保存备用。
3. HPV、HSV-2和CT测定：采用PCR方法。总HPV、HSV-2和CT检测试剂盒购自伊利康生物技术有限公司，各试剂用量及实验步骤按说明书进行。HPV亚型(6、11、16和18型)引物由澳大利亚Queensland 大学周健博士惠赠。试剂用量为每50 μl反应体系中，含各型引物50 μmol/L，4种脱氧三磷酸核苷各200 μmol/L，TaqDNA聚合酶1.5U，模板用量10 μl，反应步骤为92℃ 60秒变性、55℃ 120秒复性、72℃ 90秒引物延伸，共进行35个循环。每次设试剂空白管和已知阳性模板管对照，扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，在紫外光下观察结果并照相记录。
4. 统计学方法：两组病原体检出率比较，采用χ2检验。
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二、 结果
1. 两组HPV、HSV-2和CT的检测结果：观察组检出HPV、HSV-2和CT分别为43例(47%)、30例(33%)和22例(24%)，对照组分别检出6例(13%)、4例(8%)和1例(2%)。两组间3种病原体的检出率差异均有极显著性(P<0.01)。观察组病原体总检出率为74%(68/92)，与对照组病原体总检出率(23%，11/48)比较，差异有极显著性(P<0.01)；观察组2种或以上病原体检出率为24%(22/92)，而对照组无多重病原体检出者；轻度、中度和重度宫颈糜烂者总病原体检出率分别为54%(15/28)、72%(21/29)和91%(32/35)(P<0.01)，随着宫颈糜烂程度的增加，多重病原体检出率也显著增高，见表1。
2. 观察组患者不同年龄者的3种病原体检测结果：各年龄段(18～25岁、26～35岁、36～45岁和46～67岁)病原体总检出率分别为96% (22/23)、74%(26/35)、64%(14/22)和50%(6/12)，其中单一病原体检出率分别为70%(16/23)、46%(16/35)、41%(9/22)和42%(5/12)，多重病原体检出率则分别为26%(6/23)、29%(10/35)、23%(5/22)和8%(1/12)。 各年龄段病原体总检出率差异有显著性(P<0.05)，以18～25岁者检出率最高。
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3. HPV亚型分布： 43例检出一个或多个HPV亚型，16型和18型检出率较高，分别为56%(24/43)和40%(17/43)，6型和11型的检出率分别为5%(2/43)和2%(1/43)；单独检出16型或18型28例(65%)，同时检出16型和18型5例(12%)、6型和18型1例(2%)，6、11和18型 1例(2%)。
三、讨论
本研究HSV-2及CT的检出率与国内的报道[1，2]接近，尚未见对该组患者上述3种病原体联合检测的报道。
HPV约有100多个亚型，6和11型主要引起生殖道尖锐湿疣 ，16和18型主要引起宫颈癌[3]。本资料中HPV16或(和)HPV18型阳性者占81%(35/43)，说明与宫颈糜烂有关的HPV以16和18型为主，有潜在癌变危险。
, 百拇医药 表1 HPV、HSV-2和CT在不同程度宫颈糜烂患者(观察组)及对照组中的检出情况 组别
总
例
数
病原体
总检出
检出单一病原体
检出两种及以上病原体
HPV
HSV-2
CT
HPV+CT
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HPV+HSV-2
CT+HSV-2
HPV+HSV-2+CT
例数
检出率
(%)
例数
检出率
(%)
例数
检出率
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例数
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例数
检出率
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例数
检出率
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例数
检出率
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观察组
92
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74
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14
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6
7
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5
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轻度宫颈糜烂
28
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25
3
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中度宫颈糜烂
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重度宫颈糜烂
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动物实验已证明，HSV-2可诱发宫颈癌的发生，有报道CT感染可引起宫颈上皮细胞的非典型增生。近年来众多研究发现，宫颈癌的发生并非单一因素所致，而与CT、HSV-2、人巨细胞病毒及HPV等多种因素有关，CT有与其他病毒的协同致癌作用[4]。本资料检出病原的68例中，同时检出2种或3种病原体的占32%(22/68)。因此，在临床上需对上述病原体的进行实验诊断及治疗，以防病情的发展与恶化。
参考文献
1 陈伟丽，金扬，顾慧巍，等. 用多聚酶链反应探讨单纯疱疹病毒感染与宫颈疾病的关系. 现代妇产科进展，1995，4：22-24.
2 刘厚君，王椿森，涂亚庭，等. 聚合酶链反应检测宫颈沙眼衣原体感染. 中华皮肤科杂志，1995，28：179-180.
3 崔满华，郑鹏生，黄冰玉，等. 尖锐湿疣及子宫颈癌组织人乳头状瘤病毒DNA的比较研究. 中华妇产科杂志，1996，31：163-165.
4 胡伟，顾美皎. 子宫颈癌及癌前病变与性传播性疾病关系的研究. 中华妇产科杂志， 1995，30：547-549.
(收稿：1998-08-10 修回：1999-08-02), 百拇医药