放射免疫显像在恶性滋养细胞疾病诊断中的应用
作者：万希润 杨秀玉 宋鸿钊 李方 郭丽娜
单位：100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科
关键词：放射免疫显像；滋养层肿瘤；同位素标记
中华妇产科杂志/991107 【摘要】 目的 探讨放射免疫显像用于恶性滋养细胞疾病诊断的效果。方法 应用131I标记的小鼠抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体，对21例恶性滋养细胞疾病患者进行24例次放射免疫显像，观察其对病灶的定位效果。结果 24例次放射免疫显像中，阳性13例次(其中假阳性1例次)，阴性11例次(其中假阴性2例次)。病灶定位的敏感性为85.7%，特异性为90.0%，准确性为87.5%。在8例手术患者中，放射免疫显像所见与病理及免疫组织化学检查结果完全相符。结论 放射免疫显像可以有效地进行恶性滋养细胞疾病病灶的定位，并具有一定的功能性诊断价值。
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Radioimmunodetection in the Diagnosis of Trophoblastic Disease
WAN Xirun, YANG Xiuyu, SONG Hongzhao, et al.
Peking Union Hospital, Peking Union Medical College,Chinese Academy of Medical Science， Beijing 100730
【Abstract】 Objective To study the efficiency of radioimmunodetection (RID) to locate the loci of trophoblastic disease. Method 24 RIDs were performed with 131I labeled mouse anti-hCG monoclonal antibodies on 21 patients with trophoblastic disease. Results Of 24 RIDs performed, 13 were positive, including one false positive; 11 were negative, including two false negative. The sensitivity of RID was 85.7%, the specificity was 90.0%, the accuracy was 87.5%. In 8 patients who underwent operations after RID, the findings of RID were in accordance with the pathologic and immunohistologic findings. Conclusions RID is an efficient imaging method for trophoblastic disease. In some cases, RID showed its value as a functional diagnostic method.
, 百拇医药
【Key words】 Radioimmunodetection Trophoblastic neoplasms Isotope labeling
为提高恶性滋养细胞疾病病灶定位的诊断水平，我们在应用放射免疫显像(radioimmunodetection, RID)测定，对人绒癌裸鼠皮下移植瘤成功地进行了显像观察的基础上[1]，对RID在恶性滋养细胞疾病诊断中的应用，进行了初步探讨。
材料与方法
一、抗体的制备
小鼠抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体(MAb)杂交瘤腹水细胞株，由我院内分泌科单克隆室提供，共3株。经我科放射免疫室应用羟基磷灰石柱层析法提纯制备，百分交叉反应及竞争性结合百分率测定均呈完全特异性。经检验，抗体的热原试验及毒性试验，均符合中国药典(1990年版)[2]。为提高RID的敏感性，将上述3株抗体组成抗体组合(cocktail antibody)，其浓度为5 mg/ml。
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二、抗体标记
在碱性条件下(pH 7.4)，用氯胺-T法[3]为上述抗体标记131I，以偏重亚硫酸钠终止反应，产物通过Sephadex G-50层析柱(美国Pharmacia公司产品)，磷酸缓冲液洗脱。标记后抗体的放射活度为2 mCi/mg。
三、临床资料
1992年1月至1993年12月，共观察21例恶性滋养细胞疾病患者，年龄为21～44岁，平均30.5岁。其中侵蚀性葡萄胎6例，妊娠性绒癌14例，原发性卵巢绒癌1例。患者的病程为2～50个月，平均16个月；化学治疗(化疗)1～24个疗程，平均6个疗程。
四、显像方法
每位患者于注射抗体前3～5天起口服卢戈液 3 滴，每日3次，直到注射抗体后5～7天，以封闭甲状腺。应用RID当日，在每例患者的双足第1、第2趾间蹼皮下注入131I标记的抗hCG MAb，每侧约1～2 mg，共约2～4 mg，总放射剂量约4～8 mCi。注射标记抗体前半小时，肌内注射地塞米松10 mg，以预防过敏反应。每例患者于注入标记抗体后48、72、96小时进行盆腹腔闪烁计数显像。显像前予膀胱冲洗，必要时予以灌肠，以减低膀胱及肠道的非特异性放射浓聚。显像仪为 SPECT型(以色列Elscint公司产品)。
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五、病理学检查及免疫组织化学检查
21例患者中，8例在RID后接受了次广泛子宫切除手术，全部手术切除标本均经我院病理科同一医师阅片，并对镜检有存活癌细胞的标本进行hCG、α-hCG、β-hCG 的免疫组织化学(免疫组化)染色检查(所用抗体为兔源性，日本Ortho公司产品)。
六、副反应观察
每例患者在行RID前、后，均测定肝、肾功能，并观察有无过敏反应。
结果
一、RID结果
21例患者共进行了RID 24例次 (其中3例在不同的时间，分别进行了2次RID)，阳性13例次(其中假阳性1例次)，阴性11例次(其中假阴性2例次)。病灶定位的敏感性为85.7%，特异性为90.0%，阳性预期值为92.3%，阴性预期值为81.8%，准确性为87.5%。RID阳性的13例患者中，1例为冷病变[表现为放射性浓聚很低或较低的放射性区域(图1)]，病灶切除组织病理检查可见大片组织坏死，有存活的滋养细胞(图2)；12例为热病变(表现为放射性浓聚区域，病灶部位的放射性浓聚随时间的推移，与周围组织的对比逐渐突出，在注入标记抗体后72～96小时，即可获得满意的图像)。其中1例患者在血hCG<10 IU/L的情况下，RID表现为热病变，随后的其他检查证实患者确有病灶存在，之后血hCG也有回升。所有患者在肝脏部位及胃部都有非特异性放射性浓聚；膀胱冲洗不够的3例患者，还可见到膀胱部位的放射性浓聚；1例患者表现为结肠部位的放射性浓聚，经灌肠后该部位的放射性浓聚消失。
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图1 盆腔RID，呈放射性浓聚的低放射性区域(冷病变)
图2 患者盆腔病灶手术病理，大片坏死组织，可见存活的滋养细胞。HE ×100
二、RID与病理及免疫组化检查比较
8例患者在RID后接受了次广泛子宫切除手术，术后病理检查及免疫组化检查结果与术前RID检查结果(阳性6例，阴性2例)完全相符。其中1例，彩色超声检查提示，子宫有病灶存在，但RID为阴性，手术后证实彩色超声所示病灶为化疗后完全坏死的结节，无存活滋养细胞。
三、应用RID的副反应及随诊情况
24例次RID检查中，未发现明显副反应。所有患者均在我院滋养细胞疾病门诊随诊，时间为1.5～5.0年。除1例患者1.5年后死于疾病发展外，其他患者均于完成治疗后无瘤存活。
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讨论
一、RID的表现及其意义
RID是基于抗原-抗体特异性反应的影像学方法，标记抗体在肿瘤部位形成放射性浓聚(热病变)，或由于肿瘤中心部位组织坏死而形成的放射性浓聚甚低或较低(冷病变)的放射性区域。由于标记抗体针对的是相应的肿瘤相关抗原(tumor associated antigen, TAA)，而只有存活的癌细胞才有可能表达TAA。因此，RID 具有能够判别其他检查方法所发现的病灶是有存活癌细胞的肿瘤，或仅仅是坏死组织的能力，即所谓的功能性诊断能力。对恶性滋养细胞疾病的功能性诊断非常有意义[4]。临床上常有这样一些患者，经化疗后血hCG已正常，但胸相或B超仍显示有肺部阴影或盆腔病灶的存在。对于这类患者，区分这些病灶是真正的残余病灶还是已无存活滋养细胞的坏死结节(在恶性滋养细胞疾病，尤其是绒癌的病灶，十分常见)十分重要，但现有的影像学方法难以做出这种鉴别。另一方面，对恶性滋养细胞疾病的研究证实，血hCG为1IU/L时，体内仍可有多达105个滋养细胞，而现有的影像学方法难以发现太小的病灶。在这些情况下，RID的功能性诊断能力可能有助于正确判断患者的荷瘤情况，以做出正确的处理，避免化疗过度或化疗不足。这在其他一些肿瘤的研究中已经得到了初步证实[5]。本研究应用RID进行恶性滋养细胞疾病的病灶定位，取得了良好的效果。特别值得注意的是，RID在1例血hCG<10IU/L的患者先于其他方法发现了病灶，以及为另1例患者提示了其他检查方法显示的病灶是无存活滋养细胞的坏死结节。这表明，RID确实具有一定的功能性诊断价值，能够提供更为准确的病灶信息，有利于指导临床进一步处理。当然，RID的这种功能性诊断价值，尚有待深入探讨。
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二、应用RID的几个问题的处理
为了安全、有效的应用RID,应注意以下几个问题：(1) 行盆腔RID过程中，膀胱的充分冲洗十分重要。 尿液中大量的非特异性放射性浓聚将严重干扰盆腔的显像，造成RID结果判断的困难。同样，肠道中也可有放射性的非特异性浓聚，也是通过灌肠消除这种浓聚的。(2)由于甲状腺具有聚集131I的作用，因而有必要在行RID前，充分封闭甲状腺，直到行RID后5～7天，以免对甲状腺造成不必要的放射损伤。(3) RID所用抗体多为鼠源性抗体，作为异源性蛋白，它有可能引起人体的免疫反应，产生人抗小鼠抗体(HAMA)。本研究虽未检测患者HAMA的产生情况，但临床未见接受RID的患者发生明显的过敏反应。据文献报道，虽然有些患者能够产生HAMA，但过敏反应极少见，即使重复接受RID，也是相当安全的[6]。
应当指出的是，由于本研究是初步临床探讨，所选择的患者基本系临床诊断比较明确的非诊断困难病例，且其病灶均较大。而且，一般认为，盆腹腔 (肝脾除外) 行RID的效果要好于其他部位，这与这一部位较少受血液非特异性放射性浓聚的干扰有关。因而，本研究中，RID的敏感性及特异性均较高。另外，恶性滋养细胞疾病常见有肺转移，如何对血运丰富的肺部的病变应用RID，也有待于进一步的研究。
, 百拇医药
本课题受国家863计划资助(编号:B3879028)
参考文献
1 万希润，张德永，杨秀玉，等.人绒癌裸鼠皮下移植瘤模型的放射免疫显像.中华肿瘤杂志，1999，21: 6-8.
2 吴从愿，牛占坡，王瑛，等.抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的某些特点.中华微生物和免疫学杂志，1987，7: 119-121.
3 潘中允.放射性药物.见：马寄晓，刘秀杰，主编.实用临床核医学. 北京：原子能出版社，1990.48-64.
4 Bengent R. Immunoscintigraphy with radiolabeled antibodies directed against hCG. In: Chatal JF, ed. Monoclonal antibodies in immunoscintigraphy. Boca Raton: CRC Press, 1989. 299-309.
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5 Baum RP, Brummendorf TH. Radioimmunolocalization of primary and metastatic breast cancer. Q J Nucl Med， 1998, 42: 33-42.
6 Nabi HA, Doerr RJ. Radiolabeled monoclonal antibody imaging (immunoscintigraphy) of colorectal cancers: current status and future perspectives. Am J Surg, 1992,163: 448-456.
(收稿：1999-03-11 修回：1999-08-31), http://www.100md.com
单位：100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科
关键词：放射免疫显像；滋养层肿瘤；同位素标记
中华妇产科杂志/991107 【摘要】 目的 探讨放射免疫显像用于恶性滋养细胞疾病诊断的效果。方法 应用131I标记的小鼠抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体，对21例恶性滋养细胞疾病患者进行24例次放射免疫显像，观察其对病灶的定位效果。结果 24例次放射免疫显像中，阳性13例次(其中假阳性1例次)，阴性11例次(其中假阴性2例次)。病灶定位的敏感性为85.7%，特异性为90.0%，准确性为87.5%。在8例手术患者中，放射免疫显像所见与病理及免疫组织化学检查结果完全相符。结论 放射免疫显像可以有效地进行恶性滋养细胞疾病病灶的定位，并具有一定的功能性诊断价值。
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Radioimmunodetection in the Diagnosis of Trophoblastic Disease
WAN Xirun, YANG Xiuyu, SONG Hongzhao, et al.
Peking Union Hospital, Peking Union Medical College,Chinese Academy of Medical Science， Beijing 100730
【Abstract】 Objective To study the efficiency of radioimmunodetection (RID) to locate the loci of trophoblastic disease. Method 24 RIDs were performed with 131I labeled mouse anti-hCG monoclonal antibodies on 21 patients with trophoblastic disease. Results Of 24 RIDs performed, 13 were positive, including one false positive; 11 were negative, including two false negative. The sensitivity of RID was 85.7%, the specificity was 90.0%, the accuracy was 87.5%. In 8 patients who underwent operations after RID, the findings of RID were in accordance with the pathologic and immunohistologic findings. Conclusions RID is an efficient imaging method for trophoblastic disease. In some cases, RID showed its value as a functional diagnostic method.
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【Key words】 Radioimmunodetection Trophoblastic neoplasms Isotope labeling
为提高恶性滋养细胞疾病病灶定位的诊断水平，我们在应用放射免疫显像(radioimmunodetection, RID)测定，对人绒癌裸鼠皮下移植瘤成功地进行了显像观察的基础上[1]，对RID在恶性滋养细胞疾病诊断中的应用，进行了初步探讨。
材料与方法
一、抗体的制备
小鼠抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体(MAb)杂交瘤腹水细胞株，由我院内分泌科单克隆室提供，共3株。经我科放射免疫室应用羟基磷灰石柱层析法提纯制备，百分交叉反应及竞争性结合百分率测定均呈完全特异性。经检验，抗体的热原试验及毒性试验，均符合中国药典(1990年版)[2]。为提高RID的敏感性，将上述3株抗体组成抗体组合(cocktail antibody)，其浓度为5 mg/ml。
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二、抗体标记
在碱性条件下(pH 7.4)，用氯胺-T法[3]为上述抗体标记131I，以偏重亚硫酸钠终止反应，产物通过Sephadex G-50层析柱(美国Pharmacia公司产品)，磷酸缓冲液洗脱。标记后抗体的放射活度为2 mCi/mg。
三、临床资料
1992年1月至1993年12月，共观察21例恶性滋养细胞疾病患者，年龄为21～44岁，平均30.5岁。其中侵蚀性葡萄胎6例，妊娠性绒癌14例，原发性卵巢绒癌1例。患者的病程为2～50个月，平均16个月；化学治疗(化疗)1～24个疗程，平均6个疗程。
四、显像方法
每位患者于注射抗体前3～5天起口服卢戈液 3 滴，每日3次，直到注射抗体后5～7天，以封闭甲状腺。应用RID当日，在每例患者的双足第1、第2趾间蹼皮下注入131I标记的抗hCG MAb，每侧约1～2 mg，共约2～4 mg，总放射剂量约4～8 mCi。注射标记抗体前半小时，肌内注射地塞米松10 mg，以预防过敏反应。每例患者于注入标记抗体后48、72、96小时进行盆腹腔闪烁计数显像。显像前予膀胱冲洗，必要时予以灌肠，以减低膀胱及肠道的非特异性放射浓聚。显像仪为 SPECT型(以色列Elscint公司产品)。
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五、病理学检查及免疫组织化学检查
21例患者中，8例在RID后接受了次广泛子宫切除手术，全部手术切除标本均经我院病理科同一医师阅片，并对镜检有存活癌细胞的标本进行hCG、α-hCG、β-hCG 的免疫组织化学(免疫组化)染色检查(所用抗体为兔源性，日本Ortho公司产品)。
六、副反应观察
每例患者在行RID前、后，均测定肝、肾功能，并观察有无过敏反应。
结果
一、RID结果
21例患者共进行了RID 24例次 (其中3例在不同的时间，分别进行了2次RID)，阳性13例次(其中假阳性1例次)，阴性11例次(其中假阴性2例次)。病灶定位的敏感性为85.7%，特异性为90.0%，阳性预期值为92.3%，阴性预期值为81.8%，准确性为87.5%。RID阳性的13例患者中，1例为冷病变[表现为放射性浓聚很低或较低的放射性区域(图1)]，病灶切除组织病理检查可见大片组织坏死，有存活的滋养细胞(图2)；12例为热病变(表现为放射性浓聚区域，病灶部位的放射性浓聚随时间的推移，与周围组织的对比逐渐突出，在注入标记抗体后72～96小时，即可获得满意的图像)。其中1例患者在血hCG<10 IU/L的情况下，RID表现为热病变，随后的其他检查证实患者确有病灶存在，之后血hCG也有回升。所有患者在肝脏部位及胃部都有非特异性放射性浓聚；膀胱冲洗不够的3例患者，还可见到膀胱部位的放射性浓聚；1例患者表现为结肠部位的放射性浓聚，经灌肠后该部位的放射性浓聚消失。
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图1 盆腔RID，呈放射性浓聚的低放射性区域(冷病变)
图2 患者盆腔病灶手术病理，大片坏死组织，可见存活的滋养细胞。HE ×100
二、RID与病理及免疫组化检查比较
8例患者在RID后接受了次广泛子宫切除手术，术后病理检查及免疫组化检查结果与术前RID检查结果(阳性6例，阴性2例)完全相符。其中1例，彩色超声检查提示，子宫有病灶存在，但RID为阴性，手术后证实彩色超声所示病灶为化疗后完全坏死的结节，无存活滋养细胞。
三、应用RID的副反应及随诊情况
24例次RID检查中，未发现明显副反应。所有患者均在我院滋养细胞疾病门诊随诊，时间为1.5～5.0年。除1例患者1.5年后死于疾病发展外，其他患者均于完成治疗后无瘤存活。
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讨论
一、RID的表现及其意义
RID是基于抗原-抗体特异性反应的影像学方法，标记抗体在肿瘤部位形成放射性浓聚(热病变)，或由于肿瘤中心部位组织坏死而形成的放射性浓聚甚低或较低(冷病变)的放射性区域。由于标记抗体针对的是相应的肿瘤相关抗原(tumor associated antigen, TAA)，而只有存活的癌细胞才有可能表达TAA。因此，RID 具有能够判别其他检查方法所发现的病灶是有存活癌细胞的肿瘤，或仅仅是坏死组织的能力，即所谓的功能性诊断能力。对恶性滋养细胞疾病的功能性诊断非常有意义[4]。临床上常有这样一些患者，经化疗后血hCG已正常，但胸相或B超仍显示有肺部阴影或盆腔病灶的存在。对于这类患者，区分这些病灶是真正的残余病灶还是已无存活滋养细胞的坏死结节(在恶性滋养细胞疾病，尤其是绒癌的病灶，十分常见)十分重要，但现有的影像学方法难以做出这种鉴别。另一方面，对恶性滋养细胞疾病的研究证实，血hCG为1IU/L时，体内仍可有多达105个滋养细胞，而现有的影像学方法难以发现太小的病灶。在这些情况下，RID的功能性诊断能力可能有助于正确判断患者的荷瘤情况，以做出正确的处理，避免化疗过度或化疗不足。这在其他一些肿瘤的研究中已经得到了初步证实[5]。本研究应用RID进行恶性滋养细胞疾病的病灶定位，取得了良好的效果。特别值得注意的是，RID在1例血hCG<10IU/L的患者先于其他方法发现了病灶，以及为另1例患者提示了其他检查方法显示的病灶是无存活滋养细胞的坏死结节。这表明，RID确实具有一定的功能性诊断价值，能够提供更为准确的病灶信息，有利于指导临床进一步处理。当然，RID的这种功能性诊断价值，尚有待深入探讨。
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二、应用RID的几个问题的处理
为了安全、有效的应用RID,应注意以下几个问题：(1) 行盆腔RID过程中，膀胱的充分冲洗十分重要。 尿液中大量的非特异性放射性浓聚将严重干扰盆腔的显像，造成RID结果判断的困难。同样，肠道中也可有放射性的非特异性浓聚，也是通过灌肠消除这种浓聚的。(2)由于甲状腺具有聚集131I的作用，因而有必要在行RID前，充分封闭甲状腺，直到行RID后5～7天，以免对甲状腺造成不必要的放射损伤。(3) RID所用抗体多为鼠源性抗体，作为异源性蛋白，它有可能引起人体的免疫反应，产生人抗小鼠抗体(HAMA)。本研究虽未检测患者HAMA的产生情况，但临床未见接受RID的患者发生明显的过敏反应。据文献报道，虽然有些患者能够产生HAMA，但过敏反应极少见，即使重复接受RID，也是相当安全的[6]。
应当指出的是，由于本研究是初步临床探讨，所选择的患者基本系临床诊断比较明确的非诊断困难病例，且其病灶均较大。而且，一般认为，盆腹腔 (肝脾除外) 行RID的效果要好于其他部位，这与这一部位较少受血液非特异性放射性浓聚的干扰有关。因而，本研究中，RID的敏感性及特异性均较高。另外，恶性滋养细胞疾病常见有肺转移，如何对血运丰富的肺部的病变应用RID，也有待于进一步的研究。
, 百拇医药
本课题受国家863计划资助(编号:B3879028)
参考文献
1 万希润，张德永，杨秀玉，等.人绒癌裸鼠皮下移植瘤模型的放射免疫显像.中华肿瘤杂志，1999，21: 6-8.
2 吴从愿，牛占坡，王瑛，等.抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的某些特点.中华微生物和免疫学杂志，1987，7: 119-121.
3 潘中允.放射性药物.见：马寄晓，刘秀杰，主编.实用临床核医学. 北京：原子能出版社，1990.48-64.
4 Bengent R. Immunoscintigraphy with radiolabeled antibodies directed against hCG. In: Chatal JF, ed. Monoclonal antibodies in immunoscintigraphy. Boca Raton: CRC Press, 1989. 299-309.
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5 Baum RP, Brummendorf TH. Radioimmunolocalization of primary and metastatic breast cancer. Q J Nucl Med， 1998, 42: 33-42.
6 Nabi HA, Doerr RJ. Radiolabeled monoclonal antibody imaging (immunoscintigraphy) of colorectal cancers: current status and future perspectives. Am J Surg, 1992,163: 448-456.
(收稿：1999-03-11 修回：1999-08-31), http://www.100md.com