bcl-2和bax蛋白在正常子宫内膜中的表达
作者：黄凤英 林秋华 方小玲
单位：黄凤英(410011 长沙，湖南医科大学第二临床学院妇产科)；林秋华(410011 长沙，湖南医科大学第二临床学院妇产科)；方小玲(410011 长沙，湖南医科大学第二临床学院妇产科)
关键词：
中华妇产科杂志000320 为探讨细胞凋亡与月经周期调节之间的关系，我们采用免疫组织化学(免疫组化)法，研究正常子宫内膜中凋亡调节蛋白bcl-2和bax的表达，探讨其在月经生理中的作用。
一、资料和方法
1.研究对象：正常子宫内膜标本33份取自33例1998年1月至7月在我院因良性病变行子宫切除的患者，年龄27～50岁，均于术前半年内未接受激素治疗，月经规律。其中，月经期(1～5 d)4例，增生早期(6～10 d)10例，增生晚期(11～14 d)7例，分泌早中期(15～24 d)7例，分泌晚期(25～28 d)5例。标本用甲醛液固定，石蜡包埋，5 μm连续切片。
, 百拇医药
2.方法：采用免疫组化ABC法检测子宫内膜组织中bcl-2和bax蛋白。鼠抗bcl-2和兔抗bax蛋白抗体(1∶100)、生物素标记羊抗鼠IgG和羊抗兔IgG(1∶300)及ABC试剂(1∶500)采用美国Sigma公司产品，3，3′-二氨基联苯胺显色剂为瑞士Fluka生化试剂公司产品。
3.结果判定：bcl-2和bax阳性细胞为胞浆中有棕黄色颗粒，由两个观察者对切片进行盲式评分，每片取20个腺体，计算阳性细胞百分数，取其平均值。参照Watanabe等[1]免疫组化半定量评分标准：阳性细胞百分数<5%为阴性(0分)、5%～20%为弱阳性(1分)、20%～50%为阳性(2分)、50%～75%为强阳性(3分)、>75%为非常强阳性(4分)。
4.统计学方法：结果用
±s表示，采用秩和检验。
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二、结果
1.bcl-2蛋白的表达：bcl-2主要表达于腺体和腔上皮细胞，在腺上皮细胞浆分布均匀，呈明显周期性变化：增生期染色最强，分泌早、中期显著减少，分泌晚期和月经期消失(图1，2)。bcl-2染色强度在增生期与分泌期、增生期与月经期之间差异有极显著性(P<0.01)。月经期和增生早期与增生晚期、增生早期和分泌晚期、增生晚期和分泌晚期之间均明显不同(P<0.05)。
图1 增生晚期子宫内膜腺上皮细胞胞浆呈深棕黄色，为bcl-2蛋白表达强阳性。 免疫组化ABC ×200
图2 分泌晚期内膜腺上皮中无bcl-2蛋白表达。 免疫组化ABC ×200
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2.bax的表达：增生期bax免疫组化染色类型与bcl-2相同，主要位于腺上皮细胞。但bax表达见于整个月经周期中，且分泌期强于增生早期，分泌晚期和月经期最强，3期之间差异有显著性(P<0.05)(图3，4)。
图3 增生晚期内膜腺上皮细胞胞浆呈棕黄色，为bax蛋白表达阳性。 免疫组化ABC ×100
图4 月经期内膜腺上皮细胞胞浆深棕黄色，为bax蛋白表达强阳性。 免疫组化ABC ×400
3.bcl-2和bax蛋白表达的关系：增生期腺上皮bcl-2的表达明显强于bax(P<0.05)；而分泌期和月经期bax的表达显著强于bcl-2(P<0.01)，bcl-2/bax比值呈周期性变化。
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三、讨论
近年报道，凋亡是分泌期子宫内膜的一个主要特征[2]，提示凋亡可能参与月经的调节。bcl-2是抑制细胞凋亡的原癌基因之一，不仅存在于淋巴造血组织，而且也存在于上皮细胞、子宫内膜及多种肿瘤细胞株中。本研究结果表明，子宫内膜的腺上皮细胞bcl-2蛋白表达有明显的周期性变化，增生期最强，分泌晚期与月经期消失，与国外报道一致[1，3]。有研究表明，bcl-2的表达与雌、孕激素受体含量的变化一致[4]，在乳腺癌细胞株是bcl-2而不是bax受雌二醇的调节[5]。提示，bcl-2表达可能受卵巢甾体激素的调节。
bax能加速细胞死亡，并与bcl-2一起调控细胞凋亡。在我们的研究中，整个月经周期腺上皮细胞bax蛋白均有表达，且随着月经周期的进展，其染色强度逐渐增强，分泌期和月经期明显强于增生早期，bcl-2/bax比值也呈明显周期性变化。bcl-2和bax共同表达于增生期子宫内膜腺上皮，且bcl-2明显占优势，可以解释此期缺乏凋亡，内膜得以增殖；分泌早期bcl-2明显减少、bax增加，使这些细胞对凋亡的敏感性增加；而在分泌晚期和月经期，bcl-2缺乏、bax强表达，使内膜细胞不再增殖而发生凋亡，以维持细胞增殖和死亡的动态平衡。可以推想，一旦bcl-2/bax比值失衡，可能会引起子宫内膜萎缩或增殖性疾病形成。此还有待于进一步研究。
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参考文献
1，Watanabe H, Kanzaki H, Narukawa S, et al. Bcl-2 and Fas expression in eutopic and ectopic human endometrium during the menstrual cycle in relation to endometrial cell apoptosis. Am J Obstet Gynecol, 1997,176：360-368.
2，Kokawa K, Shikone T, Nakano R. Apoptosis in the human uterine endometrium during the menstrual cycle. J Clin Endocrinol Metab, 1996, 81：4144-4147.
3，Tao XJ, Tilly KI, Maravei DV, et al. Differential expression of members of the bcl-2 gene family in proliferative and secretory human endometrium: glandular epithelial cell apoptosis is associated with increased expression of bax. J Clin Endocrinol Metab, 1997,82：2738-2746.
, http://www.100md.com
4，Otsuki Y, Misaki O, Sugimoto O, et al. Cyclic bcl-2 gene expression in human uterine endometrium during menstrual cycle. Lancet, 1994,344：28-29.
5，Teixeira C, Reed JC, Pratt MA. Estrogen promotes chemotherapeutic drug resistance by a mechanism involving bcl-2 proto-oncogene expression in human breast cancer cells. Cancer Res, 1995,55：3902-3907.
(收稿日期：1999-03-24), 百拇医药
单位：黄凤英(410011 长沙，湖南医科大学第二临床学院妇产科)；林秋华(410011 长沙，湖南医科大学第二临床学院妇产科)；方小玲(410011 长沙，湖南医科大学第二临床学院妇产科)
关键词：
中华妇产科杂志000320 为探讨细胞凋亡与月经周期调节之间的关系，我们采用免疫组织化学(免疫组化)法，研究正常子宫内膜中凋亡调节蛋白bcl-2和bax的表达，探讨其在月经生理中的作用。
一、资料和方法
1.研究对象：正常子宫内膜标本33份取自33例1998年1月至7月在我院因良性病变行子宫切除的患者，年龄27～50岁，均于术前半年内未接受激素治疗，月经规律。其中，月经期(1～5 d)4例，增生早期(6～10 d)10例，增生晚期(11～14 d)7例，分泌早中期(15～24 d)7例，分泌晚期(25～28 d)5例。标本用甲醛液固定，石蜡包埋，5 μm连续切片。
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2.方法：采用免疫组化ABC法检测子宫内膜组织中bcl-2和bax蛋白。鼠抗bcl-2和兔抗bax蛋白抗体(1∶100)、生物素标记羊抗鼠IgG和羊抗兔IgG(1∶300)及ABC试剂(1∶500)采用美国Sigma公司产品，3，3′-二氨基联苯胺显色剂为瑞士Fluka生化试剂公司产品。
3.结果判定：bcl-2和bax阳性细胞为胞浆中有棕黄色颗粒，由两个观察者对切片进行盲式评分，每片取20个腺体，计算阳性细胞百分数，取其平均值。参照Watanabe等[1]免疫组化半定量评分标准：阳性细胞百分数<5%为阴性(0分)、5%～20%为弱阳性(1分)、20%～50%为阳性(2分)、50%～75%为强阳性(3分)、>75%为非常强阳性(4分)。
4.统计学方法：结果用
±s表示，采用秩和检验。, 百拇医药
二、结果
1.bcl-2蛋白的表达：bcl-2主要表达于腺体和腔上皮细胞，在腺上皮细胞浆分布均匀，呈明显周期性变化：增生期染色最强，分泌早、中期显著减少，分泌晚期和月经期消失(图1，2)。bcl-2染色强度在增生期与分泌期、增生期与月经期之间差异有极显著性(P<0.01)。月经期和增生早期与增生晚期、增生早期和分泌晚期、增生晚期和分泌晚期之间均明显不同(P<0.05)。
图1 增生晚期子宫内膜腺上皮细胞胞浆呈深棕黄色，为bcl-2蛋白表达强阳性。 免疫组化ABC ×200
图2 分泌晚期内膜腺上皮中无bcl-2蛋白表达。 免疫组化ABC ×200
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2.bax的表达：增生期bax免疫组化染色类型与bcl-2相同，主要位于腺上皮细胞。但bax表达见于整个月经周期中，且分泌期强于增生早期，分泌晚期和月经期最强，3期之间差异有显著性(P<0.05)(图3，4)。
图3 增生晚期内膜腺上皮细胞胞浆呈棕黄色，为bax蛋白表达阳性。 免疫组化ABC ×100
图4 月经期内膜腺上皮细胞胞浆深棕黄色，为bax蛋白表达强阳性。 免疫组化ABC ×400
3.bcl-2和bax蛋白表达的关系：增生期腺上皮bcl-2的表达明显强于bax(P<0.05)；而分泌期和月经期bax的表达显著强于bcl-2(P<0.01)，bcl-2/bax比值呈周期性变化。
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三、讨论
近年报道，凋亡是分泌期子宫内膜的一个主要特征[2]，提示凋亡可能参与月经的调节。bcl-2是抑制细胞凋亡的原癌基因之一，不仅存在于淋巴造血组织，而且也存在于上皮细胞、子宫内膜及多种肿瘤细胞株中。本研究结果表明，子宫内膜的腺上皮细胞bcl-2蛋白表达有明显的周期性变化，增生期最强，分泌晚期与月经期消失，与国外报道一致[1，3]。有研究表明，bcl-2的表达与雌、孕激素受体含量的变化一致[4]，在乳腺癌细胞株是bcl-2而不是bax受雌二醇的调节[5]。提示，bcl-2表达可能受卵巢甾体激素的调节。
bax能加速细胞死亡，并与bcl-2一起调控细胞凋亡。在我们的研究中，整个月经周期腺上皮细胞bax蛋白均有表达，且随着月经周期的进展，其染色强度逐渐增强，分泌期和月经期明显强于增生早期，bcl-2/bax比值也呈明显周期性变化。bcl-2和bax共同表达于增生期子宫内膜腺上皮，且bcl-2明显占优势，可以解释此期缺乏凋亡，内膜得以增殖；分泌早期bcl-2明显减少、bax增加，使这些细胞对凋亡的敏感性增加；而在分泌晚期和月经期，bcl-2缺乏、bax强表达，使内膜细胞不再增殖而发生凋亡，以维持细胞增殖和死亡的动态平衡。可以推想，一旦bcl-2/bax比值失衡，可能会引起子宫内膜萎缩或增殖性疾病形成。此还有待于进一步研究。
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参考文献
1，Watanabe H, Kanzaki H, Narukawa S, et al. Bcl-2 and Fas expression in eutopic and ectopic human endometrium during the menstrual cycle in relation to endometrial cell apoptosis. Am J Obstet Gynecol, 1997,176：360-368.
2，Kokawa K, Shikone T, Nakano R. Apoptosis in the human uterine endometrium during the menstrual cycle. J Clin Endocrinol Metab, 1996, 81：4144-4147.
3，Tao XJ, Tilly KI, Maravei DV, et al. Differential expression of members of the bcl-2 gene family in proliferative and secretory human endometrium: glandular epithelial cell apoptosis is associated with increased expression of bax. J Clin Endocrinol Metab, 1997,82：2738-2746.
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4，Otsuki Y, Misaki O, Sugimoto O, et al. Cyclic bcl-2 gene expression in human uterine endometrium during menstrual cycle. Lancet, 1994,344：28-29.
5，Teixeira C, Reed JC, Pratt MA. Estrogen promotes chemotherapeutic drug resistance by a mechanism involving bcl-2 proto-oncogene expression in human breast cancer cells. Cancer Res, 1995,55：3902-3907.
(收稿日期：1999-03-24), 百拇医药